中华鳖生化组成的分析

本语文对中华鳖的稚鳖、一龄鳖、二龄鳖和三龄鳖的肌肉、背甲、裙边和油脂块等不同部位中的水分、灰分、蛋白南含量、脂含量及其肌肉中的脂肪酸的组成进行了分析,结果表明;中华鳖的肌肉、裙边和背甲中的蛋白质的含量高达１８．３３－２３．４４％,脂肪含量较低。肌肉中高度不饱和脂肪酸含量占脂肪酸总量的３２．６９％,ＤＨＡ与ＥＰＡ分别占脂肪酸总量的８．３０％和６．９７％左右。本研究在分析与比较的基础上评价了中华鳖的营     

中华鳖生化组成的分析──Ⅰ.一般营养成分的含量及肌肉脂肪酸的组成

本文对中华鳖的稚鳖（体重11．5－18．0g）、一龄鳖（体重100.0－125．5g）、二龄鳖（体重220．0－263．0g）和三龄鳖（体重450．0－480．0g）的肌肉、背甲、裙边和油脂块等不同部位中的水分、灰分、蛋白质含量、脂肪含量及其肌肉中的脂肪酸的组成进行了分析,结果表明：中华鳖的肌肉、裙边和背甲中的蛋白质的含量高达18．33％－23．44％,脂肪含量较低。肌肉中高度不饱和脂肪酸含量占脂肪酸总量的32．69％,DHA（C22:6）与EPA（C20:5）分别占脂肪酸总量的8．30％和6．97％左右。本研究在分析与比较的基础上评价了中华鳖的营养价值和药用价值,为中华鳖配合饲料的开发提供了理论依据。     

中华鳖生化组成的分析：Ⅲ.肌肉氨基酸的组成

对中华鳖的稚鳖、一龄鳖、二龄鳖和三龄鳖肌肉中的氨基酸的组成进行了分析,结果表明：肌肉中必需氨基酸的含量约占氨基酸总量的４９．４８％,谷氨酸的含量很高,为氨基酸总量的１５％以上。在分析与比较的基础上评价了中华鳖在氨基酸方面的营养价值,为中华鳖配合饲料的开发提出了理论上的依据。     

中华鳖幼鳖的生长模式及身体各部分生化组成

在实验条件下,模拟了中华鳖幼鳖背甲宽随年龄变化的生长曲线,观测了幼鳖身体总干重及内脏,脂肪块,骨骼和其它（肌肉和皮脍）各部分干重与背甲宽的相关关系,并测定了上述身体各部分的生化组成,结果发现幼鳖生长曲线呈Ｓ型,用逻辑斯缔生长方程可进行很好的拟合,该方程为：Ｃｗ＝９．７５６３／（１＋５．８００８ｅｘｐ（－０．２３０１ｔ）（ｒ＝０．８９,ｎ＝４２０,Ｐ〈０．００１）,幼鳖身体总干重及内脏,脂肪块,骨骼     

九肋鳖形态及遗传特性分析

研究在湖南洞庭湖及沅江水域内开展中华鳖(Pelodiscus sinensis)种质资源调查,发现中华鳖中存在“九肋鳖”,为了解其资源分布、形态特征以及遗传特性,从形态指标、线粒体DNA及骨骼发育基因多态性入手,比较研究九肋鳖(9对肋骨,简称R9)与八肋鳖(8对肋骨,简称R8)的形态及分子遗传特性。结果显示:(1)从湖南省沅江、益阳、常德和岳阳地区的12222只人工养殖中华鳖群体中共筛选出331只九肋鳖,其在养殖中华鳖群体中占比为2.2%—3.1%。(2)九肋鳖背甲内胸椎数为11枚,肋骨9对,比八肋鳖多1枚胸椎和1对肋骨。(3)九肋鳖背甲宽/背甲长、后侧裙边宽/背甲长显著小于八肋鳖,体高/背甲长显著大于八肋鳖。(4)九肋鳖CO I、Cytb、12S rRNA基因与中华鳖序列的同源性达到99%以上,进化树分析显示九肋鳖与中华鳖群体聚为一支,与中华鳖地理群体间均存在共享单倍型,未找到群体特异性标记。(5)九肋鳖与八肋鳖的RUNX2和VRTN基因外显子上共检测到4处突变位点,即g.977380 C>T、g.6014427C>T、g.6015734A>C及g.6015864A...     

中华鳖4个品系营养成分分析与比较

为了解墨鳖的营养价值, 对墨鳖、野生中华鳖、淮河鳖和日本鳖肌肉的一般营养成分、氨基酸含量、脂肪酸含量及裙边胶原蛋白进行测定和比较。结果显示: (1) 4个品系鳖肌肉水分含量分别为80.84%、79.48%、81.57%和79.25%, 墨鳖显著高于野生鳖和日本鳖(P<0.05); 粗蛋白含量分别是17.82%、17.60%、15.93%和16.40%, 墨鳖含量最高, 显著高于淮河鳖和日本鳖(P<0.05); 粗脂肪含量分别是0.42%、1.43%、0.65%和1.06%, 墨鳖显著低于其他鳖(P<0.05); 4个品系鳖灰分含量差异不显著(P>0.05)。(2) 4个品系鳖肌肉中总氨基酸和呈味氨基酸含量均以墨鳖最高。(3)4个品系鳖不饱和脂肪酸含量分别为65.19%、56.44%、59.32%和54.73%, 墨鳖显著高于其他鳖(P<0.05), 其中墨鳖单不饱和脂肪酸含量显著低于野生鳖(P<0.05), 多不饱和脂肪酸含量显著高于其他3个品系(P<0.05); 饱和脂肪酸含量分别为32.50%、41.85%、39.41%和39.98%, 墨鳖显著低于其他鳖(P<0.05)。(4)墨鳖肌肉中DHA和EPA含量与野生鳖差异不显著(P>0.05), 显著高于淮河鳖和日本鳖(P<0.05), 花生四烯酸(AA)含量显著高于其他3个品系鳖(P<0.05)。(5) 4个品系鳖裙边胶原蛋白含量均较高, 为160.6—170.4 mg/g。结果表明墨鳖是一种营养价值高、肉味鲜美的地方品系。     

松阳花鳖与中华鳖四个地理种群形态差异比较研究

通过对松阳花鳖、德清花鳖、黄沙鳖、黄河鳖和洞庭湖鳖5 个群体体色、背部花纹和腹部黑斑的观察, 同时测量这5 个群体的29 项生物学外部形态指标, 采用聚类分析和主成分分析方法进行统计分析。结果表明: 与其他中华鳖群体相比, 松阳花鳖在体色上与其他4 个群体存在着差异, 其背部主要呈青黑色或青褐色, 甲壳上雪花样斑点较多且明显, 腹部斑块图案较小, 颜色较浅呈青色, 腹部7 个斑块出现的概率均较低, 出现无斑块的概率为31.82%。其中斑块1 出现的概率最低。聚类分析显示5 个中华鳖群体可分为三支, 松阳花鳖与黄沙鳖相距最近, 聚为一支; 黄河鳖和德清花鳖聚为一支; 洞庭湖鳖与其他4 个群体相距较远, 单独聚为一支。主成分分析结果与聚类分析结果一致, 且群体间形态差异主要表现在中华鳖背甲周长、裙边宽、头部和尾部的形态变化。其中松阳花鳖、德清花鳖和黄河鳖的后侧裙边宽/背甲长较大, 与其他群体差异显著。     

三种鳖线粒体DNA细胞色素b基因序列的比较分析

对中华鳖、砂鳖和山瑞鳖线粒体DNA细胞色素b基因进行了引物设计、PCR扩增、序列测定和PCR-PFLP(Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism)分析。研究结果表明中华鳖、砂鳖与山瑞鳖线粒体DNACytb基因的序列全长相同,均为1140bp,其A、C、G、T含量相似,分别为378个(33.2%)、322个(28.2%)1、22个(10.7%)、318个(27.9%)、373个(32.7%)、324个(28.4%)、124个(10.9%)、319个(28.0%)、380个(33.3%)3、30个(28.9%)、127个(11.1%)、303个(26.7%)。同源性及序列差异率分析表明:中华鳖与砂鳖b基因序列的同源性为92.3%,中华鳖、山瑞鳖的为85.0%,砂鳖、山瑞鳖的为84.1%;中华鳖与砂鳖b基因核苷酸序列间的差异率为7.7%,中华鳖、山瑞鳖间的序列差异率为15.0%,砂鳖、山瑞鳖间的序列差异率为15.9%,而中华鳖、砂鳖、山瑞鳖各自个体间的序列差异率分别为2.37%、0.88%和0.18%,种间差异显著。用内切酶酶切分析其扩增产物,结果表明:用内切酶NdeⅠ可准确鉴别砂鳖,而用内切酶BamHⅠ则可准确鉴别山瑞鳖。内切酶NdeⅠ和BamHⅠ的联用分析,可使这三种鳖在分子水平都得到明确的鉴定。从三种鳖线粒体DNACytb基因核苷酸序列的显著差异和酶切位点的变化,可以进一步证明砂鳖是不同于中华鳖的鳖属一新种。     

鼋骨骼系统及与中华鳖比较

采用虫蚀法制备了鼋Pelochelys cantorii和中华鳖Pelodiscus sinensis的骨骼标本, 对骨骼系统进行了观察、描述、绘图及比较分析。结果显示, 鼋的骨骼共169枚, 由背甲和腹甲组成的外骨骼、中轴骨和附肢骨组成的内骨骼组成。通过比较鼋和中华鳖的骨骼结构, 发现二者在头骨的吻突长度及第三颈椎结构方面有较大差别。鼋眼眶前部至吻突最前端的长度与头骨总长度比为0.082, 而中华鳖为0.570, 显示中华鳖吻突显著长于鼋。鼋与中华鳖的颈椎骨数目均为9枚, 但中华鳖的第三至第九颈椎的横突要更明显, 第七颈椎的椎体向上显著翘起, 且第九颈椎腹面椎体前端为尖状。从整条颈椎上看, 鼋脊椎长度与其背甲长度之比为0.66, 中华鳖为1.07, 表明中华鳖的颈椎更长; 研究结果丰富了鳖科动物的骨骼学基础数据, 也为鼋物种鉴定、龟鳖动物系统演化及生态适应性提供骨骼学理论依据。     

中华鳖性腺的发生与发育研究

为了揭示中华鳖性腺的发生与发育规律,在(32±0.5)℃温度下孵化鳖卵,72h时,从组织切片中可见原始生殖细胞移向中肠附近的内胚层;第5天生殖嵴形成;第13天性腺分化为皮质和髓质;第16天性腺开始分化为精巢或卵巢,至第22天时分化结束,形成精巢或卵巢.胚胎期、稚鳖和1龄鳖的性腺均呈短细管状,表面光滑,无色,胶状透明;2龄、3龄、4龄鳖的精巢呈长椭圆形.稚鳖的卵巢发育至卵原细胞期,组成精巢的曲细精管不明显,管内为精原细胞;1龄幼鳖的卵巢发育至初级卵泡期,精巢的曲细精管内精原细胞的数量增加;2龄和3龄鳖的卵巢处于生长卵泡期,3龄末的卵巢内可见到成熟卵泡,2龄鳖的曲细精管内出现初级精母细胞,3龄末的曲细精管开始出现精细胞和精子;4龄鳖的卵巢发育至成熟卵泡期,曲细精管内由管壁向管腔依次为精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和精子.结果表明,在(32±0.5)℃温度下,鳖胚发育至22d时,精巢或卵巢形成;在自然条件下,中华鳖至4龄时,性腺才完全发育成熟.     

维生素E对中华鳖幼鳖生长、肝脏维生素E以及血清皮质醇含量的影响

为探讨维生素E(VE)对中华鳖(Pelodiscus sinensis)幼鳖的生长、肝脏VE和血清皮质醇的影响，通过特定生长率、高压液相色谱法和放免法，我们测定了中华鳖幼鳖的生长、肝脏VE和血清皮质醇含量。发现VE添加量为1000和5000mg／kg的两组，能明显降低中华鳖幼鳖的生长。维生素E添加量为500、1000和5000mg／kg的三组，肝脏维生素E含量明显高于对照组，VE添加量在0—1000mg／kg的范围时，肝脏VE的含量随着饲料中VE含量的增加呈指数式增加，并且在VE添加量为5000kg／kg的一组基本达到饱和。维生素E添加量为0和50mg／kg的2组，其血清皮质醇的平均值明显高于维生素E添加量为250、500、1000和5000mg／kg的4组的平均值。上述结果表明：高剂量的VE降低了中华鳖幼鳖的生长和血清皮质醇的含量；在一定剂量范围内，肝脏VE随着饲料中VE含量的增加而升高。     

不同产地中华鳖的线粒体控制区序列分析及结构比较

采用PCR特异引物,扩增了两产地中华鳖（Pelodiscus sinensis）个体的mtDNA控制区（CR）及其邻近片段,测序获得了长度分别为1830bp和1630bp的序列。结合GenBank中已发表的韩国产中华鳖mtDNA的CR区序列,比较了3个产地中华鳖的CR区结构。分析显示：中华鳖不同产地mtDNA CR区DNA中的A＋T含量分别为60.5%、63.6%和64.8%,它们的5′、3′末端以及CSB1-CSB2之间均存在丰富的可变数目串联重复序列（variable numbers oftandem repeats,VNTR）。基于mtDNA CR区序列和结构分析,显示中华鳖不同产地的野生个体中存在丰富的遗传多样性。     

中华鳖GHSR基因SNPs的筛选及生长性状的关联分析

为探究GHSR基因多态性对中华鳖(Pelodiscus sinensis)生长相关性状的影响,采用直接测序法在GHSR基因5'侧翼和3'侧翼上筛选SNPs位点,共检测到5个单核苷酸多态性位点:A335T、G397T、A527G、A13482C和T13526A。随机选取同批繁殖的1冬龄200只中华鳖用直接测序法进行SNPs位点的分型,并分析与生长性状的相关性。检测结果显示,所有SNP位点均符合Hardy-Weinberg平衡状态(p>0.05)。方差分析显示,A336T位点的AT、TT基因型的体重、背甲长、背甲宽和裙边宽4项生长数据均显著高于AA基因型。A13482C位点的AC基因型的体重、背甲长、背甲宽和裙边宽4项数据均显著高于AA基因型(p<0.05)。研究表明,本实验在GHSR基因上获得的这些SNP位点可能影响着中华鳖的生长性状或与之紧密连锁,可为中华鳖分子辅助育种提供助力与参考。     

基于微卫星的中华鳖(Pelodiscus sinensis)选育世代遗传多样性监测

本研究利用微卫星技术,对选育的中华鳖F3、F4、F5代群体的遗传多样性进行了监测,并与日本鳖群体进行了比较。结果显示,在筛选的15个微卫星位点中,4个群体共218个个体共检测到等位基因数138个,平均等位基因数(Na)为7.2~8.4,平均观测杂合度(Ho)为0.512 3~0.626 5,平均期望杂合度(He)为0.574 9~0.646 1,平均多态信息含量(PIC)为0.534 6~0.604 9,表明这些中华鳖群体有较丰富的遗传多样性。中华鳖选育群体F3、F4、F5代及日本鳖群体的遗传多样性参数Na分别为8.400、7.733、7.200、7.200,Ho分别为0.626 5、0.527 4、0.478 7、0.512,He分别为0.646 1、0.639 8、0.642 0、0.574 9,PIC分别为0.604 9、0.598 2、0.594 9、0.534 6,显示中华鳖群体随着选育进程,遗传多样性逐渐下降,但仍然比日本鳖群体高,还可以进行进一步的选育。中华鳖选育群体在聚类分析中聚为一支,而日本鳖群体单独聚为一支,这说明人工选育对生物进化与地理分化的历史局面没有产生影响。     

仿生养殖鳖与温室养殖鳖形态特征的比较

对体重为531－615g仿生养殖鳖与体重575－613g的温室养殖鳖进行形态观测,结果表明,在等背甲长、宽时,仿生养殖鳖的体高显著较温室养殖鳖为小,裙边宽显著较温室养殖鳖为大,呈更扁平的体型;仿生养殖鳖的爪型较尖,温室养鳖的爪尖圆钝;在等体重的鳖中,温室养殖鳖组织中的成形脂肪块重和肝脏重均显著高于仿生养殖鳖（P＜0．01）,表明温室养殖鳖可食部分中脂肪含量增加,同时发现温室养殖鳖往往有脂肪肝异变现象。     

汉寿中华鳖线粒体细胞色素b基因克隆及其遗传多样性分析

本文以汉寿中华鳖为研究材料,比较分析中华鳖线粒体细胞色素b基因(Cytb)与瑞鳖、砂鳖等的差异,为探讨其进化与遗传分子标记奠定实验基础。采用PCR技术,克隆汉寿中华鳖Cytb基因的序列,并检测其在不同组织以及不同生长发育时期的表达模式,最后通过分子进化树分析中华鳖与砂鳖的亲缘关系。通过克隆发现中华鳖细胞色素b基因的mRNA开放阅读框含有1 140 bp,其碱基组成为A+T的含量(61. 1%)高于G+C(38. 9%),编码379个氨基酸残基的序列。与山瑞鳖和砂鳖氨基酸序列比较发现,中华鳖与瑞鳖和砂鳖均存在一定差异; Cytb基因在中华鳖不同组织和各个不同发育时期中均有表达,且在精巢组织中表达量最高,在不同时期阶段呈"低-高-低"曲线表达模式;分子进化树分析发现汉寿中华鳖与砂鳖具有较强的亲缘关系,但是在Cytb中仍存在差异,所以能够很好的把它们区分开来。此外汉寿中华鳖与哺乳动物、鱼类和爬行类均存在巨大差异。结果表明,Cytb基因在探讨汉寿中华鳖的进化与遗传分子标记中具有重要意义,可作为分析中华鳖种属进化系统发育特性和群体遗传多样性的标记基因。     

完全或部分的食物剥夺对中华鳖(Pelodiscus sinensis)幼体补偿生长反应的影响:生长率的时间变化模式与体组成的变化

为了探究中华鳖（Pelodiscus sinensis）幼体的补偿生长能力,我们对中华鳖幼鳖（平均湿重9．56g）进行如下6种处理：饥饿0（对照）、1、2、3、4周,或者食物限制4周,即只投喂体湿重百分之一的食物;然后对各组进行饱食处理直到10周的实验结束为止。结果发现在饱食期的第一周各饥饿处理组的特殊生长率均显著高于对照组（P〈0．05）,但是终体重均没有赶上对照组。当饥饿或食物限制结束时,脂肪含量随着饥饿期的延长而降低,灰分和水分则表现出相反的变化趋势：脂肪含量显著低于对照（P〈0．05）,而灰分和水分则显著高于对照（P〈0．05）。蛋白含量则没有显著变化（P〉0．05）。实验结束时,除了灰分外（P〈0．05）,其他个体组成指标均恢复到对照组的水平。以上结果表明中华鳖幼体在饥饿胁迫下首先利用脂肪作为主要能源以维持生存,以及在该研究条件下完全的食物剥夺可以诱发其部分补偿生长反应．而部分食物剥夺则不能诱发此反应。     

日粮水平对中华鳖稚鳖生长的影响

于2001年12月购买当年繁殖的中华鳖(Trionyx sinensis)稚鳖(28．66-53．37g),在30℃水温下进行摄食-生长实验(实验时间为56d),设饥饿、1％、2％、4％和饱食5个日粮水平,研究了摄食水平对中华鳖稚鳖生长和转化效率的影响。方差分析表明：摄食水平对中华鳖稚鳖的特定生长率和转化效率均有显著影响。稚鳖的湿重、干重、蛋白质和能量的特定生长率均随摄食水平的增加呈二次曲线增加,摄食率(RL)-干物质特定生长率(SGRd)的关系模型可表示为：SGRa=-0．0832RL^2 1．0795RL-1．8779(n=25,r^2=0．906．F=105．46);当摄食率为6．97％、6．49％、6．08％和6．34％时,稚鳖湿重、干重、蛋白质和能量的特定生长率分别达到最大值。1％组的各项转化效率均显著低于2％和4％组,干重和能量转化效率显著低于饱食组;2％组的干重和能量转化效率显著高于4％和饱食组。     

光周期对中华鳖稚鳖摄食、生长和能量转换的影响

在水温２９±１℃,光照强度５００ｌｘ的条件下,研究了不同光周期对中华鳖稚鳖的最大日摄食量、最大日摄食率、特定生长率、同化效率、消化时间和生长效率的影响。结果表明,光周期对中华鳖稚鳖的上述各指标均无显著影响。随体重的增加,中华鳖稚鳖的最大日摄食量逐渐增大,而最大日摄食率则逐渐减少。在人工养殖中华鳖稚鳖过程中,光照周期的选择是次要的     

三峡库区汞污染的化学生态效应

测定长江三峡库区江段鲤、铜鱼、鲇、长吻中的砷、镉、铜、汞、铅、硒、锌等元素的含量。比例匹配分析表明,样品或元素间无显著相关。铜鱼、鲤、鲇及长吻对汞的富集系数分别为8．0×103、1．5×104、3．3×104、8．4×104（L／kg）。这表明鱼体汞元素含量与鱼类在食物链营养级的位置密切相关,食物链越长,汞的富集系数越高。鲤、鲇及长吻的肌肉、肝、肾和牌间的汞含量比值约为6：2：1,而铜鱼为1：1：2．5。三峡库区降低鲤、鲇及长吻的肌肉有机汞含量占总汞含量的84％－92％,肝、肾和脾的有机汞占总汞的55％－77％。但铜鱼脾中的无机汞约占总汞的89％。并且有机汞与总汞含量间具有显著地线性关系：肌肉：Hg－o＝－0.001094＋0．9101Hg-gP＜0．01这表明鱼体肌肉是储存有机汞主要组织。并且鱼体肌肉汞元素含量C与鱼的体长L或体重W间满足经验方程：LnC＝A＋BLnLLnC＝A'＋B'LnW三峡库区江段因受川东高汞背景的影响,鲤肌肉汞含量高于长江水系鲤汞含量的背景水平。