与“全红”瓯江彩鲤体色相关的SRAP及SCAR分子标记

利用相关序列扩增多态性(Sequence Related Amplified Polymorphism,SRAP)技术分析"全红"和"粉玉"瓯江彩鲤,筛选与瓯江彩鲤体色相关的分子遗传标记。从88个SRAP引物组合筛选出的12个引物组合共获得扩增条带104个,并筛选出1个SRAP特异扩增带,即"全红"瓯江彩鲤家系SR2,7173 bp带。该条SRAP特异扩增条带经回收、克隆和测序,并将测序结果进行BLAST分析,发现该片段在GenBank中与斑马鱼的POl多蛋白基因和尿红素基因有较高的同源性。根据序列信息分别设计了4对正、反向引物(22—26 bp)。用4对引物分别在"全红"瓯江彩鲤F2和"粉玉"瓯江彩鲤F2群体中进行PCR扩增,仅发现SC-3(154 bp)能够在"全红"瓯江彩鲤群体中特异扩增,而且在"粉玉"瓯江彩鲤F2群体中未出现此扩增带。采用大样本对该SC-3标记进行验证,结果发现,在"全红"瓯江彩鲤群体中呈现阳性,而在"粉玉"瓯江彩鲤群体中为阴性,可以区分这两种群体。因此SC-3标记可以作为"全红"瓯江彩鲤群体一个重要的分子遗传特征指标,为进一步进行分子标记辅助育种奠定了基础。     

花鱼骨 和唇鱼骨 的含肉率及肌肉营养成分分析

利用国内外通用的营养测试方法测定了花[鱼骨]（Hemibarbus maculates）和唇[鱼骨]（Hemibarbu labeo）的含肉率和肌肉营养成分。结果表明：花[鱼骨]和唇[鱼骨]含肉率分别是70.61%7、1.52%;花[鱼骨]肌肉（鲜样）中蛋白质（18.41%）和脂肪含量（2.46%）显著高于唇[鱼骨]的,而花[鱼骨]的灰分含量要显著低于唇[鱼骨];水分含量分别是78.35%、78.51%,两者无显著差异。花[鱼骨]和唇[鱼骨]肌肉中脂肪酸种类丰富,饱和脂肪酸（SFA）4种,不饱和脂肪酸（UFA）7种;其中单不饱和脂肪酸（MUFA）4种,多不饱和脂肪酸（PUFA）3种;其中DHA含量高达5.00%和14.32%。花和唇肌肉中的氨基酸总量分别是63.07%和67.63%,呈味氨基酸分别为25.96%和26.30%。缬氨酸、蛋氨酸和胱氨酸为限制性氨基酸。     

紫苏子提取物对异育银鲫存活、生长以及体生化组成的影响

以初始体重(5.73±0.36)g的异育银鲫(Carassius auratus gibelio)幼鱼为实验对象,在室内水族箱中进行为期8周的摄食生长实验.以基础饲料为对照,分别添加紫苏子提取物100、300、500和800 mg/kg 配制实验颗粒饲料,研究饲料中不同剂量紫苏子提取物(Extractives of Perilla seeds,EPS)对异育银鲫生长、存活和体生化组成的影响.结果显示:基础饲料中添加300 mg/kg的紫苏子提取物的实验C组对异育银鲫有显著的促生长作用.该组(C组)异育银鲫不仅增重率最大(99.5%)、饲料效率和蛋白质效率最高(分别为42.74%和118.72%),而且脏体比最小;添加EPS各实验组与对照组异育银鲫躯体的水分(76%左右)、粗蛋白(16%-17%)和粗脂肪(4%-5%)含量没有显著影响.不过C组与其他各组相比,脂肪含量最低(4.11%), 低于对照组;而其蛋白含量最高(17.03%),高于对照组(16.45%);此外C组的内脏脂肪含量(5.23%)最低,显著低于对照组(9.21%).添加紫苏子提取物能相应提高躯体和内脏的PUFA和HUFA的含量,综合效果以C组添加300mg/kg紫苏子提取物的效果最好.实验表明,在饲料中添加300mg/kg的紫苏子提取物能显著提高异育银鲫的生长和食物利用率.     

唇?bmp2a基因克隆及其与肌间刺骨化相关性分析

骨形成蛋白(Bone morphogenetic protein, BMP)属于转化生长因子β(Transforming growth factor-beta, TGF-β)超家族。在骨形成蛋白家族中, BMP2属于分泌性多功能蛋白, 具有较强的诱导骨细胞形成的能力。为了探究BMP2与肌间刺骨化的相关性,研究通过转录组测序和RT-PCR获得了唇?(Hemibarbus labeo)bmp2a基因cDNA序列。氨基酸序列比对结果显示, 唇?BMP2A和其他鱼类BMP2保守性较高, 都具有一个高度保守的TGFβ结构域, 在该结构域中存在一个N-糖基化位点。此外, 包括唇?BMP2A在内, 鱼类BMP2都具有7个保守的半胱氨酸残基。系统进化树分析表明, 唇?BMP2A与团头鲂(Megalobrama amblycephala)BMP2A最为接近。通过荧光定量PCR检测发现唇?bmp2a基因在所有被检测的组织中均有表达, bmp2a基因在鳃中的表达量最高, 肝脏和肌肉中相对较高, 在心脏中表达量最低。免疫组化结果显示BMP2A分布于肌肉肌隔中。此外, bmp2a基因的表达与肌间刺骨化时机相吻合。综上, 唇?BMP2A与肌间刺骨化存在较高的相关性。研究结果将为进一步调查鱼类BMP2功能以及鱼类肌间刺形成分子机制提供理论依据。     

棘胸蛙致病性蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及病理组织观察

试验从患烂皮病棘胸蛙(Quasipaa spinosa)中筛选出3种致病性菌株BS₁、BS₂和BS₃, 对其进行革兰氏染色、形态观察、生理生化鉴定和16S rDNA序列分析, 鉴定上述3株菌均为蜡样芽孢杆菌。同时观察人工感染棘胸蛙的组织病理切片, 发现经病原菌感染的棘胸蛙肝、肺、舌和肌肉的损伤较严重, 表现出明显变性、坏死和炎症细胞浸润, 且在肺部组织内发现嗜碱性包涵体。药敏试验表明, 在所试的7种抗生素中, 致病性蜡样芽孢杆菌对庆大霉素和链霉素高度敏感, 对妥布霉素、卡那霉素和四环素中度敏感, 对氨苄西林和头孢他啶产生抗药性。实验初步探究了棘胸蛙烂皮病的发病机理, 为棘胸蛙烂皮病的防治提供理论依据。     

瓯江2种(鱼骨)的ISSR分析优化和自然种群遗传多样性的研究

以唇[鱼骨]和花[鱼骨]为材料，对影响PCR反应的主要因子-模板DNA、引物、dNTPs、Mg2＋、Taq酶浓度进行优化，建立了适合唇[鱼骨]和花[鱼骨]基因组DNA的ISSR—PCR反应体系。25灿L的PCR反应液含有的组分和终浓度分别为：约60ng模板DNA、1．2UTaq酶、0．4μmol／L引物、2．0mmol／LMgCl，、0．2mmol／LdNTPs、2％甲酰胺。利用优化反应体系从60个ISSR引物中，筛选出18个稳定性高、重复性好的引物，对25个唇[鱼骨]个体和22个花[鱼骨]个体的DNA进行正式扩增，分别从两个种群分别扩增到168和156条扩增谱带，扩增片段长度在200--1500bp之间。根据扩增结果计算出两个种群的多态位点比例分别为67．52％和53．21％，Shannon多样性指数分别为0．3450和0．2749，Nei’s指数分别为0．2292和0．1837，平均有效等位基因数分别为1．3875和1．3169。两个种群内样本间的平均遗传距离分别为0．2129和0．1529，结果表明两个种群的遗传多态性较高，其中唇[鱼骨]的多样性明显高于花[鱼骨]群体。引物UBC845扩增的610bp带和UBC854扩增的1240bp带为唇[鱼骨]种的特异性谱带。[鱼骨]属鱼类基因组中均含有微卫星DNA序列：（AG）8、（GA）8、（CT）8和（GAA）8。本研究为唇[鱼骨]和花[鱼骨]的种质保护、合理开发利用以及选择育种提供了一些基础数据。     

松阳花鳖与中华鳖四个地理种群形态差异比较研究

通过对松阳花鳖、德清花鳖、黄沙鳖、黄河鳖和洞庭湖鳖5个群体体色、背部花纹和腹部黑斑的观察,同时测量这5个群体的29项生物学外部形态指标,采用聚类分析和主成分分析方法进行统计分析。结果表明:与其他中华鳖群体相比,松阳花鳖在体色上与其他4个群体存在着差异,其背部主要呈青黑色或青褐色,甲壳上雪花样斑点较多且明显,腹部斑块图案较小,颜色较浅呈青色,腹部7个斑块出现的概率均较低,出现无斑块的概率为31.82%。其中斑块1出现的概率最低。聚类分析显示5个中华鳖群体可分为三支,松阳花鳖与黄沙鳖相距最近,聚为一支;黄河鳖和德清花鳖聚为一支;洞庭湖鳖与其他4个群体相距较远,单独聚为一支。主成分分析结果与聚类分析结果一致,且群体间形态差异主要表现在中华鳖背甲周长、裙边宽、头部和尾部的形态变化。其中松阳花鳖、德清花鳖和黄河鳖的后侧裙边宽/背甲长较大,与其他群体差异显著。     

花和唇的含肉率及肌肉营养成分分析

利用国内外通用的营养测试方法测定了花(Hemibarbus maculates)和唇(Hemibarbu labeo)的含肉率和肌肉营养成分。结果表明:花和唇含肉率分别是70.61%7、1.52%;花肌肉(鲜样)中蛋白质(18.41%)和脂肪含量(2.46%)显著高于唇的,而花的灰分含量要显著低于唇;水分含量分别是78.35%、78.51%,两者无显著差异。花和唇肌肉中脂肪酸种类丰富,饱和脂肪酸(SFA)4种,不饱和脂肪酸(UFA)7种;其中单不饱和脂肪酸(MUFA)4种,多不饱和脂肪酸(PUFA)3种;其中DHA含量高达5.00%和14.32%。花和唇肌肉中的氨基酸总量分别是63.07%和67.63%,呈味氨基酸分别为25.96%和26.30%。缬氨酸、蛋氨酸和胱氨酸为限制性氨基酸。     

“全红”瓯江彩鲤不同世代间的遗传结构及遗传分化初步分析

利用ISSR技术对"全红"瓯江彩鲤(Cyprinus car pio var. color)4个世代群体的遗传结构及其分化进行了分析。筛选的15个ISSR引物从4个世代群体中分别扩增到120、118、101和110条扩增谱带,全部扩增片段长度在200—2500bp之间。根据扩增结果,利用POPGENE version 1.31进行分析,结果表明:4个群体的多态位点比例(P)为51.49%—67.80%,Shannon信息指数(Ho)为0.2176—0.2745之间,并随着世代的增加,选育群体的遗传多样性呈现下降趋势。有70%的遗传变异来自于群体内;结合遗传分化指数Gst、UPGMA聚类分析,证实"全红"瓯江彩鲤4个世代间存在一定程度的遗传分化,即任意两个群体间的遗传分化达到较大的水平(Gst均为0.1588—0.2766)。