黄热病现状及其疫苗的研究与应用

黄热病(yellow fever,YF)是一种经由伊蚊叮咬传播的急性出血性传染病,流行区主要集中在非洲西部、南美洲等热带地区,临床症状包括高热、恶心、呕吐、黄疸、出血等。黄热病的病原体为黄热病毒(yellow fever virus, YFV),是黄病毒科黄病毒属的单股正链RNA病毒。目前,YF治疗尚无特效药物,以对症治疗和支持治疗为主,接种YF-17D减毒活疫苗是最有效的预防方法。尽管YF-17D已被全球认可,但是疫苗接种所致的不良反应时有报道。本文对近年黄热病的流行情况、疫苗研究进展和应用进行综述。     

黄热病病毒检测微阵列的研究制备

目的:制备黄热病病毒寡核苷酸检测微阵列.方法:根据黄热病病毒基因组序列,并应用生物信息学软件设计出寡核苷酸探针用于制备基因芯片,克隆于质粒上的黄热病病毒全长基因DNA经限制性显示技术扩增并标记,完成杂交后对芯片进行扫描和数据分析.结论:微阵列检测技术为检测黄热病病毒提供了一种早期、快速、可靠的方法,具有应用于临床检测的前景.     

嵌合病毒技术在黄热病毒属病毒研究中的应用

嵌合病毒技术是用于RNA病毒研究的一个重要技术,近十年来在黄热病毒属病毒的研究中,构建了一些型内及型间的嵌合病毒,不仅有利于该属病毒的分子机制研究,更重要的是研制出一些新型减毒活疫苗.本文简单介绍该技术的原理、构建、影响因素、应用前景等.     

黄热病毒的一步RT-PCR法检测

自不同稀释度的乳鼠脑病毒悬液中制备总RNA,在自制缓冲液条件下,进行一步RT-PCR法检测。对一步RT-PCR法与常规RT-PCR的敏感性进行比较,并且以基孔肯亚病毒和登革1-4型病毒RNA为模板进行特异性观察。结果表明,本研究建立的一步RT-PCR法可检出2.8×10~3PFU的病毒,敏感性比常规RT-PCR法高10倍,且与基孔肯亚病毒、登革病毒1-4型无交叉反应,具有良好的特异性和敏感性,适用于黄热病毒的病原学检测。     

黄热病毒的基因组及其蛋白研究进展

黄热病毒(Yellowfever virus,YFV)是属于黄病毒科(Flavivirdae)黄病毒属(Flavivirus)的典型代表,为RNA病毒其不仅是第一个被发现的导致人类疾病的"滤过性颗粒",也是第一个被证实通过蚊蜱传播的病毒。黄热病是一种区域性疾病,在南美     

寨卡病毒及其疫苗研究

寨卡病毒与黄热病毒、登革热病毒、日本脑炎病毒、西尼罗病毒等都属于蚊媒传播的黄病毒属病毒。寨卡病毒分离于1947年,但由于分布区域有限,所致寨卡热症状较轻,很长一段时间并没有引起太多的关注。最近一些年,特别是2015年后,巴西的寨卡疫情暴发及其与新生儿小头畸形的关联,引起了全球越来越多的关注。疫苗是应对寨卡疫情的重要手段,目前全球有30余个机构在进行寨卡病毒疫苗的研发。本文综述了寨卡病毒的生物学、流行病学、临床特征以及当前不同类型寨卡病毒疫苗研发现状,同时对其他几种黄病毒属病毒批准和临床阶段疫苗情况进行了概述,以为相关研究人员提供参考。     

上海出入境检验检疫局发现我国首例库波热病毒

针对西非安哥拉回国的不明原因发热病人,筛查其可能携带的传染病病原体。采用荧光PCR的方法对口岸重点关注的黄热病毒、寨卡病毒、登革病毒等病原体进行筛查;采用深度测序的方法,搜索病毒库、细菌库、寄生虫库,进行序列比对筛查各类病原体,采用全基因组测序的方法获得病原体全基因组序列。2017年1月2日凌晨1点,上海出入境检验检疫局国家国境口岸卫生监督检测重点实验室接到一份紧急样本,样本来自1名安哥拉回国的28岁男子。该男子在安哥拉当地医院初筛黄热病阳性,该男子要求自行回国治疗。针对病人的血液样本和尿液样本,开展黄热病毒、登革病毒、寨卡病毒、裂谷热病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒、流行性乙型脑炎病毒、疟原虫等多种虫媒病原体的荧光PCR检测,结果显示阴性。通过对血液样本的深度测序发现,该病人感染了一种新型的弹状病毒,中文命名为库波热病毒,并获得了库波热病毒全基因组序列,与尼日利亚发现的库波热病毒比较,同源性为96%。     

含2A片段的重组黄热病毒17D疫苗表达载体的构建

黄热疫苗是一种减毒的黄热病毒17D(YF-17D)活疫苗,是现有疫苗中最安全、最有效的疫苗之一,适于发展为疫苗载体。用RT-PCR法扩增出覆盖YF-17D全长基因组的3个cDNA片段:5′cDNA(A)、3′cDNA(B)和中间cDNA(C),同时引入SP6增强子序列、酶切位点和重复序列。顺序将A和B同E.coli-yeast穿梭质粒pRS424连接,再与C共转染酵母菌,利用缺少色氨酸和尿嘧啶的选择性固体培养基筛选出含YF-17D全长基因组的cDNA质粒。以该质粒为模板,经过DNA重组和酵母同源重组,获得含有口蹄疫病毒蛋白水解酶2A片段的重组YF-17D表达载体。将该表达载体体外转录后,电击转染BHK-21细胞。间接免疫荧光检测结果表明,RNA转录体在BHK-21细胞中进行了稳定的表达;滴度测定与形态学观察结果表明,重组病毒在细胞中的生长曲线等特征同母本YF-17D十分相似。结果提示,利用酵母菌同源重组在2A部位引入异种抗原基因,重组YF-17D表达载体pRS-YF-2A1具有成为高效活疫苗表达载体的潜力。     

探究黄热病毒NS1蛋白在感染早期的诊断价值

为了探讨黄热病毒(Yellow fever virus,YFV)非结构蛋白1(Nonstructural protein 1,NS1)在感染早期的诊断价值。颅内注射YFV-17D感染乳鼠,每日处死1窝,收集抗凝血。Vero细胞和C6/36细胞感染YFV-17D病毒后,每隔12h收集培养上清。分别采用荧光定量PCR和基于YFV NS1多克隆抗体的双抗体夹心酶联免疫(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测感染后乳鼠血液、C6/36和Vero细胞上清中YFV的扩增情况和NS1蛋白的分泌规律。乳鼠感染YFV-17D后第2d在血清中即可检测到YFV NS1,第3d血液中检测到YFV核酸。敏感细胞株在感染YFV-17D后第36h培养上清中可检测到YFV NS1,而48h后才能检测到YFV核酸。YFV NS1蛋白具有作为YFV感染早期的诊断靶标的潜在价值。     

西尼罗河病毒感染的重新流行

1999年8～9月,美国纽约市及周边地区发生多例脑炎,从病人及其他死亡动物中分离到黄热病属病毒,鉴定为西尼罗河病毒(West Nile virus,WNV).自今年5月25日从巴尔的摩市的一只死亡乌鸦中检出该病毒为止,美国东北部已有9个州区发现了该病毒,包括纽约、新泽西、马里兰、康涅狄格、罗得岛、新罕布什尔、宾州、麻省及哥伦比亚特区.     

重组黄热病毒E蛋白结构域Ⅲ作为亚单位疫苗的抗原性和免疫原性

目的：表达纯化黄热病毒（YFV）囊膜蛋白（E蛋白）结构域Ⅲ,研究其作为亚单位疫苗预防YFV、日本脑炎病毒（JEV）感染的可能。方法：扩增YFVE蛋白结构域Ⅲ（YFDⅢ）的cDNA片段333bp,将其连接到原核表达载体pET-32a（＋）中,构建原核表达载体pET-YFDⅢ,转化感受态大肠杆菌Rosetta（DE3）,IPTG诱导表达重组YFDⅢ;用纯化的YFDⅢ免疫新西兰兔和BALB/c鼠,检测相关抗体滴度。结果：在大肠杆菌中可溶性表达了YFDⅢ融合蛋白,表达量约占菌体蛋白的50%;Western印迹及ELISA分析表明,纯化的YFDⅢ具有良好的抗原性和免疫原性;利用纯化的YFDⅢ免疫新西兰兔,获得了高达1∶4×105滴度的抗YFV抗体和1∶2×104滴度的抗JEV抗体;利用纯化的YFDⅢ免疫BALB/c鼠,获得了1∶7×104滴度的抗YFV抗体和1∶2×103滴度的抗JEV抗体。结论：重组YFDⅢ有较好的免疫原性,具有开发成亚单位疫苗的潜能。     

针对多种强致病性病毒的基因芯片检测方法的建立

为了制备灵敏的可检测多种烈性病毒性病原体的基因芯片,本研究设计了针对21种烈性病毒性病原体的基因芯片检测探针,每种5条,长50 bp.并以甲病毒属的基孔肯亚病毒和黄病毒属的黄热病毒细胞培养物为检测模型,摸索了合适的病毒基因处理与扩增方法.将提取的病毒RNA先用DNase Ⅰ处理,以去除掉其中的DNA分子,然后利用病毒属特异性引物进行反转录,以引导病毒基因组的合成,从而尽可能地减少宿主细胞基因成分的干扰.进行随机PCR扩增后将扩增产物与基因芯片进行杂交,分别出现了4条基孔肯亚病毒探针信号和5条黄热病毒的探针信号,说明所设计的检测探针具有较好的特异性,可用于这2种病毒的特异性检测.这种病毒基因样品的处理和扩增方法也为此基因芯片的临床应用奠定了基础.     

揭秘蚊子如何不受病毒感染影响

在对“黄热病”蚊子（埃及伊蚊）和蚊子传播的辛德毕斯病毒进行研究的一系列实验中,Kevin Myles及其同事发现了导致人类急性疾病的病毒如何无法显著影响其宿主蚊子的健康。     

丝状病毒出血热的血清流行病学调查研究及现状

丝状病毒(包括马尔堡与埃波拉病毒)被发现已有40余年,对其自然流行病学尚不清楚。综述了该病血清流行病学调查结果,丝状病毒出现的频率,地理生态学分布,及病毒生物学特性,为该病流行因素提供了信息与框架。然而,对病毒宿主,传入人类的起源、地理分布、具体区域等流行生态学有待进一步研究。     

疫苗

924368产生黄热病毒prM和E蛋白的重组牛痘病毒防治致死的黄热脑炎〔英〕/pineus,5.…了Virology一1992,157(i)一290一297〔译自DBA,1992,11(11),92一06158〕 为了在HeLa细胞培养物中表达17D黄热病毒 (YFV一17D)开读框不同部分,构建了四种重组牛痘病毒(vP766:表达C、prM、E、NSI、和NSZA,vPs6g:表达prM和E;vP729:表达E、NSI、NSZA和NSZB;vP725:表达NSI和NSZA)。表达PrM和E的vP869在小鼠中诱导高效价的中和抗体和血凝抑制抗体,保护水平与YFV一17D疫苗病毒免疫的保护水平相同。表达E和NSI、C prM、E、NSI或仅NSI的…     

CODEHOP RT-PCR技术在黄病毒属病毒筛查中应用

为了探讨CODEHOP RT-PCR技术在黄病毒属病毒筛查中的应用效果,根据GenBank发表的不同黄病毒多聚蛋白氨基酸序列,利用CODEHOP方法设计合成一对简并引物,用一步RT-PCR对乙型脑炎病毒株JEV1201、登革热病毒株JKD001和黄热疫苗YV6161进行检测,扩增产物测序后进行BLAST同源性比对和系统分生分析。结果显示该方法可以特异的对黄病毒进行扩增,目的片段的大小和序列与预期结果相符,JEV1201与乙脑病毒株YL2009-4/YC2009-3同源性最为接近,位于乙脑病毒株进化树分支。JKD001与登革热病毒株DENV-2/ID/1022DN/1975同源性最为接近,位于登革热病毒株进化树分支。YV6161与黄热病病毒株17D同源性最为接近,位于黄热病病毒株进化树分支。由此可知CODEHOP RT-PCR技术可以被有效的用于对黄病毒属病毒的筛查、种类鉴定和分子溯源。     

病毒疫苗:现有制品的使用及未来发展

<正>引言 病毒疫苗的发展和应用,在现代生物医学中取得了一些重大成就。天花已在全世界消灭,小儿麻痹症在工业发达国家已成为罕见疾病。其它儿童疾病,像麻疹、风疹和流行性腮腺炎在许多国家正在减少。 病毒疫苗的发展史,表现在离体培养病毒和测定病毒生化性方法的建立。最古老的病毒疫苗如抗天花、狂犬病和黄热病疫苗,是在动物体内培养病毒建立起来的。本世纪     

NS3蛋白在黄病毒科病毒生命活动中的作用

黄病毒科病毒包括三个属,即黄病毒属(Flavivirus),瘟病毒属(Pestivirus)和丙型肝炎病毒属(Hepacivirus)。这些病毒均能引起人和动物患严重疾病。黄病毒属黄热病毒(Yellow fever virus,YFV)、登革病毒(Dengue virus,DEN)能引起发烧、出血,患者死亡率极高,瘟病毒属牛腹泻病