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1.
本实验比较了不同卵龄的小鼠卵母细胞受酒精人工刺激后的激活率和体外受精率,以探讨卵母细胞激活和受精的机制。向NIH雌鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)7.5单位,48小时后注射人绒毛膜促性激素(HCG)7.5单位,于不同时间杀小鼠,取卵母细胞与卵丘细胞的复合体(OCC)。从注射HCG后到取OCC的时间视为卵母细胞的卵龄。将OCC置于含8%酒精的M2中7分钟,再在M16中培养5小时后,用0.3mg/mL的透明质酸酶去卵丘细胞。卵母细胞形成原核或速即卵裂为激活的标志。将OCC加入已获能的精子悬液中,5小时后将从卵丘细胞中释放出来的卵母细胞转移到M16中,次日发生卵裂为卵母细胞体外受精和激活的标志。小鼠卵母细胞卵龄为20h,其激活率为81.6%,速即卵裂率为48.0%;而卵龄进一步增加到24h,激活率和卵裂率转为下降(Table1)。而卵母细胞受精子激活和受精则不同,卵龄为15h,卵母细胞的体外受精率为45.4%;随着卵龄的进一步增加,体外受精率则下降(Table2)。Fig.1显示:新排出的卵母细胞容易被精子激活而受精;卵龄较大的卵母细胞较易被酒精的人工刺激而激活。可能是卵母细胞从成熟到老化过程中,细胞的结 相似文献
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斑马鱼卵细胞的体外成熟及成熟卵的受精发育 总被引:1,自引:0,他引:1
采用体外培养的方法,研究斑马鱼卵母细胞的成熟过程。Ⅵ时相初级卵母细胞在0.5μg/ml 17a-羟基孕酮的EM-199培养液中,80%氧气,25℃的体外培养条件下,在40min内,胚泡逐渐由卵母细胞中央至动物极边缘1/2处移到动物边缘,进入Ⅴ时相卵母细胞。30min后胚泡破裂,胚泡破裂率为59%,此种卵母细胞继续培养2h才完全成熟,成熟卵不能不滤泡膜中自然排出。冷开水中剥离其外边的滤泡膜后加入具有 相似文献
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鸡胚血液中原始生殖细胞的分离及其培养的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
从孵化48~55小时鸡胚中抽取血液,每只胚胎可获血液2~6μl左右。一步法离心分离原始生殖细胞,可使其浓度由0.1%以下提高到50%以上。将多余血细胞用微量吸管移走后,加入添加10%胎牛血清的TCM—199做为培养基,37.5℃,5%CO2,95%空气,饱和湿度下培养,原始生殖细胞可成活24小时左右。 相似文献
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昆明白小鼠1细胞胚胎体外培养系统的研究 总被引:7,自引:0,他引:7
研究发现在有或者没有磷酸盐的条件下,葡萄糖均抑制昆明白小鼠l-4细胞期胚胎的体外发 育。在不含葡萄糖和磷酸盐的HECM-l中,桑椹率为40.05%(74/168),而对照G-HECM-1仅为 8.14%(7/86);不含葡萄糖含有磷酸盐的CZB中,桑椹率为67.11%(93/152),而对照TALP仅 6· 67%(6/90)。用不含葡萄糖而含有1. 0mmo1/L谷氨酸肢和0. 11mmol/L EDTA的CZB液,与兔输 卵管上皮单层培养细胞(ROEC)协同培养小鼠1细胞胚,73.33%(110/150)胚胎发育至桑椹胚, 但没有观察到囊胚形成、用上述CZHROEC系统培养小鼠1细胞胚48小时(3-4细胞),再移入 TCM199+10%FCS+ROEC系统,有76.74%(67/86)胚胎发育至桑椹胚,96/小时后,40.70% (35/86)发育至囊胚。 相似文献
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将体外成熟、体外受精的绵羊卵子,在体外培养至桑椹胚—襄胚期并进行冷冻保存,观察了培养卵的体外发育和冷冻保存效果。从采自屠宰场的绵羊卵巢中抽取卵母细胞,用含有10%FCS(或NSS)、HCG、E_2和Hepes的M199培养24—26小时,再以经Ionophore A23187诱导获能的新鲜精子进行授精。授精后6—8小时移入发育用培养基内进行培养,发育用培养基为含有10%FCS(或NSS)、丙酮酸钠、Hepes的M 199。授精72小时后,FCS组和NSS组的卵裂率分别为36.9%和45.2%,后者显著高于前者。继续培养7—10天后,桑椹胚~囊胚的发育率分别为11.6%和23.4%,两者间差异极显著。将桑椹胚和囊胚冷冻保存于PBS+20%FCS+10%乙二醇冷冻液内,解冻后的胚胎形态正常率分别为82.0%和71.9%。 相似文献
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6—DMAP对小鼠卵母细胞减数分裂启动及孤雌发育作用 总被引:3,自引:0,他引:3
小鼠卵泡卵母细胞体外培养过程中加入2mmol/L6-DMAP可抑制卵母细胞自发的染色持浓缩和生发泡破裂(GVBD)。源自超排的MⅡ期卵母细胞则能为6-DMAP所激活。hCG注射后18-19h的卵母细胞置于2mmol/L6-DMAP的CZB溶液中培养0.5h、1h、2h、3h,卵母细胞的激活率分别为26.1%、75.2%、75.8%、77.3%、卵裂率分别为88.2%、73.2%、67.0%、58. 相似文献
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牛胚胎在BRL/mTCM199和HECM-6/mTCM199培养体系中发育潜能的探讨 总被引:3,自引:0,他引:3
在两种培养体系下对牛胚胎早期发育进行了比较研究。把屠宰场收集的牛卵本外培养至成熟,然后进行体外受精。将受精卵置于下列两种培养体系中进行体外培养:①Buffalo rat liver细胞与改进的TCM199培养液共同培养系统(BRL/mTCM199);②半确定培养液两步培养系统「无血清的金黄地鼠培养液与改进的TCM199培养液(HECM-6/mTCM199)」。结果表明:后者的囊胚率(50%)明显高 相似文献
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本文报告一种为适于杂交瘤细胞生长“无血清”培养基-适量的成牛血清低分子成分超滤液、10mg/L转铁蛋白(T)、10mg/L胰岛素(I)、20μmol/L乙醇胺(E)、40nmol/L硒酸钠(S)等诸补充成分替代胎牛血清加到基础液中-也完全适用于培养肿瘤细胞,且观察到与之相似的规律性结果,癌细胞在本“无血清”培养若的生长水平达到在含胎牛血清培养基中生长的水平。对于癌细胞的生长,LMW-CS与T、I、 相似文献
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卵母细胞成熟过程中伴随有多种蛋白质的合成与磷酸化,蛋白质的合成对卵细胞的成熟具有重要作用。本实验较系统地阐述小鼠卵母细胞体外成熟培养的不同阶段蛋白质合成对卵母细胞成熟的影响。放线菌酮是肽链延伸的抑制因子。将生发泡(GV)期的卵母细胞分别于T6成熟培养液中培养0、4、6、9小时后,转至含有10mg/ml放线菌酮的T6成熟培养液继续培养1215小时。固定、染色、观察卵母细胞。结果如Table1。0小时实验组:抑制处理4小时,其生发泡破裂(GVBD)发生率与对照组无明显差异。表明:卵母细胞GVBD所需蛋白质(如:成熟促进因子MPF等)是在卵巢的卵泡卵母细胞生长过程中完成的。4、6小时实验组:笫一极体的释放被完全抑制,卵母细胞不能达到MI期,染色质处于凝集状态(Fig.3&4)。表明:GVBDMI期间所需蛋白质的合成对卵母细胞MI期中期纺缍体的形成与维持具有重要作用。9小时实验组:可能由于卵母细胞发育速度存在个体间的差异。没有进入MII期的便停滞于MI期以前。进入MI期的则能排出笫一极体。因此,笫一极体的释放总体上呈不完全抑制状态,其释放率低于对照组。但是,后者虽然弪过恢复培养至15小时,可能由于微管蛋白的合成 相似文献
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采用体外培养的方法,研究斑马鱼卵母细胞的成熟过程。Ⅳ时相初级卵母细胞在o.5μg/m1 17a-羟基孕酮的EM-199培养液中,80%氧气,25℃的体外培养条件下,在40min内,胚泡(GV)逐渐由卵母细胞中央至动物极边缘l/2处移到动物极边缘,进八V时相卵母细胞。30min后胚泡破裂(GVBD),胚泡破裂率为59%。此种卵母细胞继续培养2h才完全成熟。成熟卵不能从滤泡膜中自然排出。冷开水中剥离其外边的滤泡膜后加入具有受精能力的精子,即能使成熟卵受精,受精膜举起,胚盘在动物极形成。其后受精卵的分裂、发育等与自然成熟受精卵相同。以发育至囊胚为受精标准,这种体外成熟卵受精率为78%。这是斑马鱼卵母细胞体外培养成熟的首例报道。鱼类卵母细胞体外成熟技术的建立,为外源基因卵母细胞胚泡内转移奠定了基础。 相似文献
12.
化学修饰对反义寡核苷酸稳定性及抗流感病毒活性的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
为了探讨 A S O D N 化学修饰形式与 A S O D N 稳定性,体外细胞毒性以及抗流感病毒活性之间的关系,合成了 7 种不同化学修饰形式的 A S O D N:硫代 A S O D N 及其 3′端分别磷酸化和胆固醇修饰;3′与 5′端硫代,中间为天然结构的混合骨架 A S O D N;天然结构 A S O D N 及其 3′端分别磷酸化和胆固醇修饰等.测定了 7 种修饰体在小鼠血清, M D C K 细胞裂解液,含 2% 胎牛血清的 D M E M培养液以及水中的稳定性,体外细胞毒性和在细胞水平抗流感病毒活性.结果表明,混合骨架 A S O D N,硫代 A S O D N 及其 3′端接磷酸和胆固醇的修饰形式在小鼠血清, M D C K 细胞裂解液与含2% 胎牛血清的 D M E M 培养液中稳定性相对较高,作用 24~48 h 仅混合骨架 A S O D N 与硫代 A S O D N 发生部分降解;天然结构 A S O D N 及其 3′端接磷酸和胆固醇修饰体在 24 h 内大部分降解.所有 A S O D N 修饰体在水中具有很高稳定性,48 h 内未见降解作用.7 种 A S O D N 修饰形式在 M D C K 细胞中未表现明显的细胞毒性.硫代 A S O D N 及其 3′端接磷酸和胆 相似文献
13.
以存活率(SR)、复苏运动度(RM)、SPA为精子活力检测指标,对四种冷冻程序PSF、H3P、LP、MDP和卵黄的、无卵黄的冷冻稀释保存液进行了藏酋猴(Macaca thibetana)精液冻存比较研究。 PSF的SR为90.1±1.9%,RM为63.8±2.8%,显著高于其他三种冷冻程序(P<0.01)。卵黄冷冻稀释保存液(MDM)的SR(95. 4±1.3%)和RM(88.0±10.2%)显著高于无卵黄防冻液(FCS-G/TH)的SR(90.1±1.9%)和RM(63.6±2.8%),但前者在复苏一小时后,RM(12.5±1.6%)明显低于后者的RM(54. 7±2. 2%)。用 FCS~G/TH冻存的精液经 SPA检测,其穿透率为新鲜精子的 51. 9%。结果提示:1)慢速降温冷冻程序适于藏酋猴精液冻存;2)卵黄冷冻稀释保存液能较好地保存藏酋猴精液的活动度;而无卵黄防冻液则有利于延长其冷冻精子的运动寿命。这可能与两者的稀释液及所含的脂蛋白不同有关。 相似文献
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本研究以兔为实验材料,对细胞核移植过程中显微操作、电融合、电活化以及移核胚的培养等基本问题进行了研究。对兔进行PMSGhCG超数排卵,收集成熟卵母细胞和16细胞胚;后者经胰蛋白酶消化,去除胶膜和透明带,在不含Ca2+、Mg2+的分离液中分成单个卵裂球;然后,分别对两者做CB预处理;首次尝试采用Wiladsen法,去除卵母细胞核、并将单个卵裂球注入透明带,同时、与McGrathSolter法进行比较;通过电融合使供体核进入去核的卵母细胞内;将所得移核胚在体外或在中间受体内培养并观察。结果表明:一、Wiladsen法与McGrathSolter法比较,核移植操作的成功率及以后的电融合率均无明显差异(Tab.1)。相对于后者,Wiladsen法更简便、易于掌握并提高去核率。二、hCG超排注射后13~15h,观察卵母细胞发现:其中,678%保留有第一极体。此时的卵子若去除1/3胞质量,去核率可以达到583%。若推迟去核时间,笫一极体退化,失去去核标志。三、比较不同电脉冲条件,发现强度为063kv/cm,持续160μs的一次电脉冲可获较高移核胚的融合率(70.8%)(Tab.2);并可使611%的成熟 相似文献
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乳鼠外周神经雪旺氏细胞的体外培养和纯化的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
本文取5~7天SD新生大鼠坐骨神经剪碎,用0.25%胰蛋白酶及0.03%胶原酶在37℃消化45分钟,吹打分散后接种于培养瓶。培养基为含10%胎牛血清的F10。接种后48小时,加入阿糖胞苷(Ara-c,Sigma)10-5mol/L处理,48小时后换每毫升含神经生长因子(NGF)100μg的培养液,刺激雪旺氏细胞(SC)生长5~7天。此时根据成纤维细胞去除的情况,可再次加入Ara-C1~2天或转为无血清培养基一周。这种抗有丝分裂法结合无血清培养法,既能有效去除成纤维细胞,又能减少对SC的损伤,获得的SC纯净度可达98%。 相似文献
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小鼠年龄及卵丘—卵母细胞间联接的解离对卵母细胞体外成熟的影响 总被引:4,自引:3,他引:1
实验研究了小鼠卵母细胞体外过程中卵丘-卵母细胞间的相互作用。实验小鼠为雌性B6D2杂交一代。激素处理48小时后分离出卵后天和卵母细胞复合体,并培养在含有次黄嘌呤的培养液中。24小时后检查卵母细胞核成熟情况。 相似文献
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本研究采用Fos蛋白免疫组化染色方法观察了胎牛血清对原代培养鸭肾上皮细胞c─fos表达的刺激作用及褪黑素的阻断作用。以每一视野Fos染色阳性细胞的百分比为指标,每组实验观察14至17个视野。实验结果显示,正常对照组平均每视野Fos染色阳性细胞为44.31±2.77%,胎牛血清刺激组为63.07±3.93%,明显高于对照组(P<0.01),胎牛血清加10 ̄(-6)mol/L褪黑素组为35.29±3.22%,明显低于单纯胎牛血清刺激组(P<0.01),但与对照组无明显差异(P>0.05)。该结果表明褪黑素可以抑制原代培养鸭肾上皮细胞c─fos表达。 相似文献
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本实验比较了不同卵龄的小鼠卵母细胞受酒精人工刺激后的激活率和体外受精率,以探索卵母细胞激活和受精的机制。向NIH雌鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)7.5单位,48小时后注射人绒毛膜促性激素(HCG)7.5单位,于不同时间杀小鼠,取卵母细胞与卵丘细胞的复合体(OCC)。从注射HCG后到取OCC的时间视为卵母细胞的卵龄。将OCC置于含8%酒精的M2中7分钟,再在16中培养5小时后,用0.3mg/mL的透明质酸酶去卵丘细胞。卵母细胞形成原核或速即卵裂为激活的标志,将OCC加入已获能的精子悬液中,5小时后将从卵丘细胞中释放出来的卵母细胞转移到M16中,将日发生卵裂为卵母细胞体外受精和激活的标志。小鼠卵母细胞卵龄为20h,其激活率为81.6%,速即卵裂率为48.0%;而卵龄进一步增加到24h,激活率和卵裂率转为下降(Table1)。而卵母细胞受精子激活和受精则不同,卵龄为15h ,卵母细胞的体外受精率为45.4%;随着卵龄的进一步增加,体外受精率则下降(Table2)。Fig.1显示:新排出的卵母细胞容易被精子激活而受精;卵龄较大的卵母细胞较易被酒精的人工刺激而激活。可能是卵母细胞从成熟到老化过程中,细胞的结构、功能及对外界刺激的敏感状态都在发生一些规律性的变化,而激活和受精的机制不完全,还不能精对卵龄的要求要严格。 相似文献