基于宏基因组学的猪群样本病毒探测方法的建立

极其多样的病毒广泛存在于我们周围的环境和动物体内,其中很多病毒是人类所未知的,而发现未知病毒常常受制于病毒常规检测技术的局限性.[目的]构建未知病毒检测技术平台.[方法]应用病毒宏基因组学的理念,结合新型分子诊断技术,首先利用过滤和核酸酶处理去除样品宿主核酸干扰,然后随机PCR扩增潜在的病毒宏基因组,最后通过大规模测序及序列分析获取病毒核酸信息.[结果]利用此技术我们对猪瘟病毒(CSFV)细胞培养物和猪圆环病毒2型(PCV2)感染猪病料进行了分析,分别检测到序列总长度1680 bp,占基因组13.7％的CSFV序列和序列总长度834 bp,占基因组47.2％的PCV2序列;利用此检测技术平台研究一未知病原细胞培养物,通过测序和序列分析,结果显示56条序列中有26条为副流感病毒5型(PIV5)同源序列,覆盖了其基因组全长的16.4％;此外,应用本研究建立的方法结合新一代高通量测序,我们在混合的7份病原未知的病猪组织样品中检测到了1.1％的病毒序列,包括CSFV、PCV2、猪细环病毒(TTSuV)、猪bocavirus (PBoV)和人腺病毒6型(Ad6)等的部分基因序列.[结论]本研究建立的基于病毒宏基因组学的未知病毒的检测方法突破了传统病毒研究方法的缺陷,对于猪群样本中病毒的检测具有较高的敏感性,有望为新发、突发感染性疾病的诊断和监测提供技术支持.     

草鱼(Ctenopharyngodon idellus)线粒体DNA控制区及其两侧tRNA基因的克隆与结构分析

动物线粒体ＤＮＡ控制区是线粒体基因组复制与基因表达的最主要的调控区．采用杂交和测序的方法对草鱼线粒体ＤＮＡ控制区进行定位、克隆并测定了控制区及其旁侧的ｔＲＮＡＰｈｅ、ｒＲＮＡＰｒｏ和ｒＲＮＡＴｈｒ三个基因的序列,与多种脊椎动物的相应序列进行了比较,并进行了结构分析．草鱼线粒体控制区全长９２７ｂｐ,含有与酵母和爪蟾线粒体启动子相似的序列,其ＣＳＢⅠ、ＣＳＢⅡ和ＣＳＢⅢ序列与其他几种动物的ＣＳＢ比较相当保守,ＴＡＳ与其回文基序可形成稳定的茎环结构,成为Ｈ－链复制的终止信号．草鱼线粒体ｔＲＮＡＰｈｅ、ｔＲＮＡＰｒｏ和ｔＲＮＡＴｈｒ可折叠成三叶草形二级结构,其基因具有许多不同于细胞质ｔＲＮＡ基因的结构特点,可能反映了线粒体ｔＲＮＡ与线粒体核糖体具有不寻常的作用方式     

In vitro Oocyte Maturation in the Zebrafish Brachydanio rerio and Fertilization and Development of the Mature Egg

Maturation process of zebrafish oocyte was investigated using in vitro incubation.In medium EM-199 containing 0.5 μg/ml of 17α-hydroxyprogesterone incubated under 80％ O_2 and at 25°C,germinal vesicles(GV)of oocytes in stage Ⅳ migrated from midway between the center and theperiphery ofoocytes to the periphery in 40 minutes and the oocytes went into stage V.Half an hourlater,the oocytes underwent germinel vesicle breakdown(GVBD)with a breakdown rate of 59％.Two more hours were needed for such oocytes to complete their final maturation.The mature eggscould not come off from the follicle layer surrounding them by themselves(ovulation).By removingthe follicle and adding active sperms for insemination,we could make the mature eggs fertilized.Thechorion was elevated and blastoderm formed on the animal pole.The cleavage and development ofthese fertilized eggs followed the same course as the naturally matured and fertilized eggs.Usingblastula formation as a marker of successful fertilization of the in vitro matured egg,the fertilizationrate was 78％.This is the first report on the successful in vitro incubation of mature oocytes inzebrafish.The establishment of this in vitro oocyte maturation technology has laid the foundationfor further investigation of the transfer of foreign genes in the germinal vesicles of oocytes.     

中国十一个少数民族的皮纹研究 Ⅱ.掌纹

研究了中国11个少数民族(其中回族两个群体)5013人的掌纹样本,计算出了a—b脊线数、atd角、掌褶纹类型、掌纹真实花样、掌纹主线各个项目的基本参数,比较了不同民族、性别、左右侧以及人种间的差异。各民族的掌纹各具特点而又显示出蒙古人种的一般特征。     

一株李氏禾内生细菌去除Cr(Ⅵ)的特性

李氏禾(Leersia hexandra)是中国境内发现的第一种铬超积累植物,该文对李氏禾内生菌及其除铬性能进行了研究。采用添加Cr(VI)的牛肉膏蛋白胨固体平板培养方法,从李氏禾根部分离筛选获得一株具有较强Cr(VI)抗性的内生细菌G04,分子生物学鉴定结果表明该菌株属于阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)。采用摇瓶培养方法,以Cr(VI)去除率、总Cr(铬)的去除率以及菌体生物量为指标,考察了pH、温度、底物浓度、装液量、接种量、摇床转速以及反应时间等因素对Cr(VI)去除率、总铬去除率和菌株生长的影响。结果表明:在牛肉膏蛋白胨液体培养基中,菌株E. cloacae G04去除Cr(VI)的较优反应条件为初始pH5. 0、温度37℃、Cr(VI)浓度为100 mg·L~(-1)、装液量80 mL(250 mL三角瓶)、接种量15%、摇床转速为120r·min~(-1)、反应时间48 h。在此条件下,菌株E. cloacae G04对Cr(VI)和总铬的去除率分别为84%和8%。根据Cr(VI)去除率和总铬去除率的结果推测该菌株去除Cr(VI)的机制可能是以还原为主、吸附为辅。这表明李氏禾内生细菌E. cloacae G04菌株具有较好的应用潜力,既有可能直接用于土壤、水环境铬污染的修复,也有可能作为促植物修复铬污染的后备菌株,另外可为深入研究李氏禾的铬积累作用机制提供参考。     

mRNA差异显示技术在动物早期胚胎发育相关基因研究中的应用

动物从卵裂开始的早期胚胎发育始终伴随着ｍＲＮＡ不断的合成与降解。最初受着受精卵内母体ｍＲＮＡ的控制。当这些ｍＲＮＡ在发育过程中逐渐被降解时,有些动物（如小鼠）在比较早的时期已有新基因的转录;而有些动物（如鱼类、两栖类）迟到囊胚中期以后,合子核的基因才开始转录新的ｍＲＮＡ。ｍＲＮＡ这种有规律的代谢活动控制着细胞的分化、胚层的形成以及模式形成（ｐａｔｅｒｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）。所有这些ｍＲＮＡ水平上的变化都可以用ｍＲＮＡ差异显示法（ｍＲＮＡｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ）检测出来并进而获得与早期胚胎发育有关的基因。ｍＲＮＡ差异显示法是由Ｌｉａｎｇ和Ｐａｒｄｅｅ于１９９２年建立起来的,用于显示两种不同组织之间ｍＲＮＡ差异的方法。基于绝大多数ｍＲＮＡ有一个ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴,选用一个较特殊的３’端引物─５’Ｔ１１ＭＮ３’,其中Ｍ可以是ｄＡＴＰ,ｄＣＴＰ,ｄＧＴＰ之一,而Ｎ可以是ｄＡＴＰ,ｄＴＴＰ,ｄＣＴＰ,ｄＧＴＰ之一,进行逆转录时,１／１２的ｍＲＮＡ可被逆转录为ｃＤＮＡ。这种ｃＤＮＡ第一链被用来ＰＣＲ扩增,所使用的３’端引物与逆转录引物相同,而５’端引物为１０个碱基的一段寡核苷酸,这类任意（ａｒｂｉｔｒａｒ     

中国十三个民族的初潮年龄

用现状法和回忆法调查了15个民族的初潮年龄。汉族平均初潮年龄(MMA),以北京(12.77±0.14岁)与广州(12.81±0.16岁)为最小,四川布拖县城镇汉族(14.48±1.28岁,回忆法)居中,农村样本最大。农村居民中,北京郊区的MMA最小(14.91±0.71岁),江西吉水县次之(15.29±0.26岁),而偏僻山区湖北郧县最大(16.04±0.52岁)。少数民族中用现状法得MMA最早的是黎族(13.62±0.16岁),其余的人群是:朝鲜族15.82±0.14岁,藏族14.30±0.32岁,达斡尔族14.64±0.29岁,海南崖县回族15.08±0.24岁,临夏回族15.19±0.33岁,羌族15.57±0.29岁,东乡族16.39±0.14岁和保安族17.23±0.46岁。又用回忆法得出了5个民族的MMA:蒙族14.97±1.60岁,苗族15.50±1.54岁,彝族16.80±1.58岁,以及北京市的满族14.34±1.69岁和回族14.38±1.63岁。     

中国十一个少数民族的皮纹研究 Ⅰ.指纹

研究了中国11个少数民族(12个群体)5013人的指纹花样和指纹脊线数,计算出各项基本参数,比较分析了不同性别、左右侧、不同民族和人种间的差异以及指纹花样和指纹脊线数在不同手指上的分布特点。分析表明,这些民族的指纹具有各自的特点又具有蒙古人种的一般特性。