从线粒体16S rDNA序列探讨绒螯蟹类的系统发生关系

测定了绒螯蟹类各物种的线粒体16SrDNA部分片段的序列,构建了NJ树、ML树和MP树。序列歧异数据比较和各系统发生树都支持新绒螯蟹属(Neoeriocheir)为一个独立的属。在3种系统发生树中,直额绒螯蟹(Eriocheir recta)都是绒螯蟹属(Eriocheir)所有其它成员的姐妹群,并且广东珠江1只直额绒螯蟹标本的16SrDNA部分序列与台湾产台湾绒螯蟹(Eriocheir formasa)的相应序列相同。这些结果不支持平绒螯蟹属(Platyeriocheir)是一个有效的属,并表明E．formosa是E．recta的同物异名。绒螯蟹属(Eriocheir)所有其它成员聚为一个单系的分支,支持中华绒螯蟹、合浦绒螯蟹与日本绒螯蟹属于同一个物种Eriocheir japonica。16SrDNA部分序列的比对表明,产于台湾的日本绒螯蟹的此段序列与合浦绒螯蟹的相同,产于崇明岛的和产于美国旧金山海湾的中华绒螯蟹的此段序列与中华绒螯蟹单元型B的序列相同。     

绒螯蟹属支序分类学的初步分析(甲壳总纲:十足目)

绒螯蟹属Eriocheir是方蟹科Grapsidae中的一个小属,与其近缘的11属同隶于弓蟹亚科Varuninaec该属包括4种:狭颚绒螯蟹E.leptoganthus,直额绒螯蟹E.rectus,日本绒螯蟹E.japonicus,和中华绒螯蟹E.sinensis。分布于我国沿海及台湾岛各省,均为可食种,尤以后两种个体较大为经济蟹类,特别是中华绒螯蟹为我国名贵的水产资源之一。     

关于三种绒螯蟹种名的厘正

原称为绒螯蟹的种类 ,现隶属于甲壳纲、十足目、方蟹科绒螯蟹Ｅｒｉｏｃｈｅｉｒ、新绒螯蟹Ｎｅｏｅｒｉｏｃｈｅｉｒ和平绒螯蟹属Ｐｌａｔｙｅｒｉｏｃｈｅｉｒ 3个属。其中新绒螯蟹属由Ｓａｋａｉ于 1983年以绒螯蟹属中的狭颚绒螯蟹为模式种而建立 ,平绒螯蟹属是Ｎｇ等 (1999)建立 ,所用模式种为台湾绒螯蟹Ｅｒｉｏｃｈｅｉｒｆｏｒｍｏｓａ。有关平绒螯蟹属的有效性 ,作者持否定观点 ,另文详细讨论。到目前为止 ,所有绒螯蟹中有 3个种的学名拼写一直存在混乱 ,应予订正。1　日本绒螯蟹日本绒螯蟹 1835年被ｄｅＨａａｎ命名时归于方蟹属 ,…     

中华绒螯蟹与合浦绒螯蟹两地理亚种的线粒体DNA序列变异

根据线粒体16SrDNA的PCR／RFLP鉴定和对Cyt b基因全序列的分析对中国大陆7水系绒螯蟹地理种群的遗传分化进行探讨。结果表明：中华绒螯蟹与合浦绒螯蟹两亚种在17条Cyt b全序列上以40个固定的碱基变异位点相区别。前者分布在瓯江及其以北的水系;后者主要分布在瓯江及其以南的水系。发现了4种在鸭绿江以南的北方水系中生活的合浦亚种单元型,对这些单元型的形成提出了3种可能的解释[动物学报51（5）：862—866,2005]。     

利用RAPD技术对三种绒螯蟹亲缘关系的研究

采用ＲＡＰＤ技术结合一定的形态学研究手段,对中华绒螯蟹,日本绒螯蟹及其合浦亚种进行亲缘关系的研究,为三种绒螯蟹的种及亚种分析重要资料,三种绒螯蟹的第四步足前节长宽比值,与其分类标本吻合或基本吻合,用一组引物,对每种各１０个个体的基因组ＤＮＡ进行扩增,得到一批特异,可重复的扩增图谱,扩增区带的相似率分析表明,中华绒螯蟹与日本绒螯蟹的亲缘关系远,而日本绒螯蟹合浦亚种与日本绒螯蟹近,最后,对文中ＲＡＰＤ     

中华绒螯蟹MSTN基因SNPs多态性及与生长性状的关联分析

为研究中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)肌肉生长抑制素基因(myostatin, MSTN)的多态性及其与生长性状的相关性, 对中华绒螯蟹3个群体(育种群体、大赛群体、野生群体)共321个个体MSTN基因的多态性进行筛选, 发现该基因的第1外显子存在3个多态性SNP位点(S1: C714T; S2:G729A; S3:G753T), 均为处于Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)的中、高度多态性位点。利用一般线性模型分析3个位点及其基因型组合与生长性状的相关性, 发现S1位点对中华绒螯蟹的体重和壳长等生长性状有显著影响(P≤0.05), 而其余2个位点与生长性状无显著关联性。结果表明S1位点的TT基因型对中华绒螯蟹的生长最为有利, 可作为分子标记辅助育种的候选标记。     

日本囊对虾4个地理群体线粒体16S rRNA序列及遗传结构分析

对我国东南沿海日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)的4个地理群体广东群体(GD)、台湾群体(TW)、福建群体(FJ)和浙江群体(ZJ)的线粒体16S rRNA基因片段进行PCR扩增,对产物进行测序后分析。经比对获得470bp的核苷酸分析序列,发现了16个变异位点,得到了10种单倍型。广东、台湾、福建和浙江群体的核苷酸多样性依次分别为0.0008、0.0010、0.0051、0.0015,各群体均存在独有的单倍型和共有单倍型。群体遗传距离分析表明各群体间保持着一定的遗传差异,其中福建群体与其他群体之间存在着较远的遗传距离并保持了较高的遗传多样性。另外,利用其423bp的16S rRNA同源序列探讨了对虾科6个属共12种对虾的系统进化关系,囊对虾属与沟对虾属亲缘关系较近聚为一支,其他4个属的10种对虾聚为一支。     

中华绒螯蟹两个Sox基因HMG－box的克隆及测序

参照人SRY基因HMG-box保守区的序列设计一对兼并引物,PCR扩增中华绒螯蟹的Sox基因,并对扩增产物进行了克隆和测序。结果表明：在雌雄性个体中筛选出两个不同的Sox基因ESSox3和ESSox22,尽管中华绒螯蟹属甲壳类动物,但所测序列ESSox3和ESSox22的DNA序列和编码的氨基酸序列与人相应SOX基因的相似性分别为84%,85%和97%,81%,表明该基因在进化上具高度的保守性。本研究为探索中华绒螯蟹的性别决定机制以及Sox基因的进化提供了分子资料。     

利用微卫星分子标记分析四个中华绒螯蟹群体的遗传多样性

利用本实验室克隆的16个和国际上发表的8个微卫星标记，对4个中华绒螯蟹群体（江苏、安徽、辽宁、天津）的遗传多样性进行检测。所检测到的扩增片段长度为80—445 bp，在群体间扩增出2—10个等位基因，共计155个等位基因，平均等位基因6.458个。4个中华绒螯蟹群体的平均有效等位基因数(Ne) 为4.3491—4.7234，平均观察杂合度(Ho) 为0.5690—0.6722，平均期望杂合度(He) 为0.7238—0.7546，并通过基因型的P值, 确定了7个座位处于Hardy-Weinberg平衡；同时对4个群体的遗传距离进行了估算, 聚类分析结果表明，安徽、江苏、天津聚为一支，属于长江河蟹类型，辽河种群单独聚为一支。     

闽江水系绒螯蟹的表型性状差异与分子遗传差异的比较与分析

表型性状差异(differentiation in phenotypictraits,PST)和分子遗传差异(differentiation at neutral molecular markers,FST)是近期进化生物学的研究热点之一。闽江水系是我国中华绒螯蟹与合浦绒螯蟹的主要混杂地域,是研究绒螯蟹遗传与进化的理想地之一。为探讨闽江水系绒螯蟹的PST和FST,以2009和2010年度闽江水系的133个绒螯蟹样本为材料,进行了14个表型数量性状差异分析和6个微卫星标记的遗传差异分析。结果发现:除3个表型性状不存在显著差异外,其他表型性状在不同年份间均存在极显著差异(P<0.01);2009年绒螯蟹的平均期望杂合度极显著高于2010年绒螯蟹(P=0.008),而平均等位基因丰富度、观测杂合度和近交系数均不存在显著差异(P=0.136～0.675);年份间的平均FST为0.1429;通过对PST与FST的比较发现,除第二步足掌节长度(F2)性状外,其他表型数量性状的PST值均高于FST值,表明这些性状均受到了较明显的选择压力。该文研究结果为绒螯蟹的分子进化研究积累了资料,也为其他水产生物的PST和FST比较研究提供了参考。     

The First Internal Transcribed Spacer (ITS-1) of Ribosomal DNA as a Molecular Marker for Phylogenetic and Population Analyses in Crustacea

The objective of the present study is to explore the feasibility of using the first internal transcribed spacer (ITS-1) of ribosomal DNA as a molecular marker for studying the interspecific and intraspecific genetic variations among crustaceans. We designed primers that could amplify ITS-1 from a majority of taxonomic groups of crustaceans. The gene was found to exhibit a high degree of length polymorphism among different groups, ranging from 182 bp in the barnacle Balanus amphitrite to approximately 820 bp in the spiny lobster Panulirus japonicus. With respect to differences between congeneric species, it was found that the ITS-1 sequences of 3 mitten crabs, Eriocheir sinensis, Eriocheir leptognathus, and Eriocheir formosa, exhibit 5.4% to 16.3% nucleotide divergence, suggesting that ITS-1 is informative for phylogenetic analysis at the species level. Yet there are extensive (0.9%–2.3%) variations within individual E. formosa, so that phylogenetic analyses could be obscured. ITS-1 was found to vary between 2 geographical populations of the shrimp Penaeus japonicus. The variations involved substitutions as well as insertions/deletions between shrimp from Australia and South China Sea. These results show that ITS-1 is highly divergent among different crustaceans and could be an appropriate marker for molecular systematic studies at the species and population levels, although the presence of intragenomic variation needs to be taken into consideration. Received August 15, 2000; accepted February 9, 2001     

Molecular systematics of the Asian mitten crabs,genus Eriocheir (Crustacea: Brachyura)

To help resolve phylogenetic relationships among the mitten crabs, complete sequences of the nuclear DNA internal transcribed spacer (ITS) and portions of the mitochondrial genome corresponding to the cytochrome oxidase I (COI), were sequenced for all Asian mitten crabs of the genus Eriocheir and seven species of the Grapsoidea. The resulting phylogeny supports the establishment of a separate genus Neoeriocheir, but does not provide justification for the recognition of Platyeriocheir. A female mitten crab specimen from the Zhujiang River, China, was considered to be Eriocheir recta (), a species previously synonymized with Eriocheir japonica (de Haan, 1835). In the ITS analysis, a sequence from Eriocheir formosa (from Taiwan) falls within a well-supported E. recta group, which indicates that E. formosa may have to be synonymized with E. recta. Three previously recognized members of the genus, E. japonica, Eriocheir sinensis, and Eriocheir hepuensis constitute a monophyletic sister group to E. recta in all phylogenetic trees. We provide evidence for the conspecific status of these taxa. Phylogenetic trees based on COI and combined COI and ITS sequences indicate that E. japonica consists of three subgroups. Since the name E. japonica (de Haan, 1835) takes precedence over E. sinensis (H. Milne Edwards, 1853) and E. hepuensis, we suggest that these three subgroups correspond to three subspecies of E. japonica: E. j. japonica, E. j. sinensis, and E. j. hepuensis.     

四种十足目甲壳动物遗传差异的RAPD分析

采用ＲＡＰＤ技术,对分类阶元不同的四种十足目甲壳动物：克氏原螯虾、汉水华溪蟹、日本绒螯蟹合浦亚种和中华绒螯蟹,进行了遗传多态性的研究。四个物种ＤＮＡ库的扩增结果表明,随着亲缘关系由近变远,物种间的相似率依次减小,由５６．１％下降至２２．３％．用ＵＰＧＭＡ方法作聚类分析构建出物种的系统树图、反映出四个物种对应的种、科间、科间以上遗传差异逐步增大,这与以形态标记为主的分类结果相一致。在同工酶分析难以揭     

直额绒螯蟹新模记述(甲壳纲,十足目)

形态学和分子生物学的研究表明:直额绒螯蟹Eri- 物异名.本文为直额绒螯蟹指定了新模,并对此进行了描ocheir recta(Stimpson,1858)足一有效种名,应予恢复.台述.湾绒螯蟹Eriocheir formosa Chan,Hung et Yu,1995是它的同物异名.本文为直额绒螯蟹指定了新模,并对此进行了描述.     

中国沿海日本囊对虾线粒体16S rRNA基因序列变异及遗传分化

对中国东南沿海4个日本囊对虾地理群体16S rRNA基因片段进行了序列测定和分析.在获得的467bp 序列中,共检测到45个变异位点,多态位点比例为9.64%.具有10种单倍型,三亚群体单倍型多样性最高(0.900±0.161).各群体的核苷酸多样性(π)为0.0007～0.0082,其中三亚群体核苷酸多样性最为丰富,远高于湛江、北海和海口群体.群体间遗传分化指数(F_(st))为0.000～0.945.结合已报道的16S rRNA基因序列,构建了NJ分子系统树,中国海域日本囊对虾可分为3支.香港至台湾沿岸所有单倍型聚集为一分支,湛江、海口和北海群体内的所有单倍型聚集成另一分支,两分支分别属于已报道的变种Ⅰ和变种Ⅱ,但三亚群体内的4个单倍型单独聚集成一分支,与前两分支的核苷酸序列差异大(7.95%～8.35%),遗传分化明显,可能为一亲缘关系很远的新种(或变种).研究结果可为日本囊对虾的资源管理和遗传选育提供参考.     

Molecular cloning, characterization and expression analysis of macrophage migration inhibitory protein (MIF) in Chinese mitten crab, Eriocheir sinensis

Macrophage migration inhibitory factor (MIF) as a multi-functional cytokine mediating both innate and adaptive immune responses, however, their function within the innate immune system of invertebrates remains largely unknown. Therefore, we investigated the immune functionality of MIF in Chinese mitten crab (Eriocheir sinensis), a commercially important and disease vulnerable aquaculture species. The full-length MIF cDNA (704 bp) was cloned via PCR based upon an initial expressed sequence tag (EST) isolated from a E. sinensis cDNA library. The MIF cDNA contained a 363 bp open reading frame (ORF) that encoded a putative 120 amino acid (aa) protein. Comparisons with other reported invertebrate and vertebrate MIF sequences revealed conserved enzyme active sites. MIF mRNA expression in E. sinensis was (a) tissue-specific, with the highest expression observed in hepatotpancreas, and (b) responsive in hemocytes, hepatopancreas and gill to a Vibrio anguillarum challenge, with peak exposure observed 8 h, 12 h and 12 h post-injection, respectively. Collectively, data demonstrate the successful isolation of MIF from the Chinese mitten crab, and its involvement in the innate immune system of an invertebrate.     

七种方蟹科蟹类的遗传关系

利用水平电泳方法对方蟹科方蟹亚科粗腿厚纹蟹,弓蟹亚科日本绒螯蟹、中华绒螯蟹、肉球近方蟹、绒螯近方蟹、平背蜞及斜纹蟹亚科齿突斜纹蟹进行遗传分析,计检测了９种同工酶,１２个位点。结果表明,七种蟹类的多态座位比例及平均杂合度分别为：０．１６７和０．００３,０．２５０和０．０３６,０．３３３和０．０６２,０．２５０和０．０１２,０．０８３和０．００２,０．０８３和０．０５９,０．０８３和０．００２。最小遗