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1.
MLC_2-糜酶融合基因克隆及转基因小鼠的产生 总被引:2,自引:0,他引:2
为研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系,并提高糜酶基因在小鼠心脏中的表达,构建肌球蛋白轻链-2启动子(myosinlightchain-2promoter,MLC2)-糜酶融合基因并产生转基因小鼠.通过删除糜酶基因启动子序列,构建结构基因克隆,然后与大鼠心脏肌球蛋白轻链-2启动子序列相拼接,构建MLC2-糜酶融合基因克隆,回收并纯化融合基因片段,显微注射入小鼠受精卵产生转基因小鼠,经PCR扩增、Southern印迹杂交和PCR扩增产物的测序,筛选和确定转基因鼠.在新出生的46只小鼠中有2只为转基因阳性鼠,且外源基因能稳定遗传给后代,从而获得了可用于研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系的转基因小鼠模型. 相似文献
2.
酿酒酵母与粟酒裂殖酵母属间原生质体融合选育降解苹果酸强的葡萄酒酵母 总被引:17,自引:0,他引:17
采用赖氨酸缺陷型酿酒酵母(Saccharomyces cerenisiae)L1原生质与肌醇缺陷型粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)PM-5原生质体事例选育了葡萄酒发酵性能良好且具有降解苹果酸能力的酵母菌株。对融合子菌落形态、遗传稳定性、降解苹果酸能力和葡萄酒发酵性能进行了研究。结果表明:用促融合剂「30%聚乙二醇(MW6000)、0.02mol/L CaCl2和1 相似文献
3.
利用微丝(microfilament,MF)解聚药物细胞松驰素B(cytochalasinB,CB)处理G_0期小鼠C_3H_(10)T_(1/2)成纤维细胞,对G_0至S期DNA合成,胸腺嘧啶核苷激酶(thymidinekinase,TK)活性、TK基因表达、钙调素(calmodulin,CaM)水平和一些细胞周期早期基因的表达进行了观察,G_0期细胞经3mg/LCB处理2h,促MF解聚增强了血清对S期细胞TK活性、TK基因表达和DNA合成的刺激作用,并促进细胞提前进入S期.血清刺激G_0期细胞进入晚G_1期和S期时,CaM水平明显升高,而CB预处理则使CaM含量进一步增加,特别是CB处理促使S期CaM增加向核内转移.CB处理明显增强血清对c-jun、c-fos和c-myc基因表达的刺激作用,而PKC抑制剂H_7则抑制CB处理对这些基因转录的刺激作用,说明CB使G_0期细胞MF解聚刺激c-jun、c-fos和c-myc的转录活性与PKC的作用有关.结果表明G_0至S期早期MF的重组可促进细胞进入S期,增强DNA合成. 相似文献
4.
竹节花黄斑驳病毒启动了在棉花维管组织中是一个强启动子 总被引:1,自引:0,他引:1
用竹节花黄斑驳病毒(Commelina Yellow Mottle Virus,CoYMV)启动子-gus嵌合基因和CaMV35S-gus嵌合基因通过根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens(Smith et Townsend)Conn)LBA4404介导分别转入棉花(Gossypium hirsutum L.cv.Jingmian7,J7G),诱导再生了棉花转基因植株。G 相似文献
5.
二种重组α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产中降低双乙酰的作用 总被引:3,自引:0,他引:3
利用已构建的含有短芽孢杆菌(Bacillus brevis)和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase, α-ALDC)基因的工程菌株,并使它们分别在大肠杆菌中高效表达,获得重组α-ALDC。在实验室,用 2L体积的麦芽汁进行啤酒生产试验,添加 2种重组α-ALDC后,使啤酒中的双乙酰含量快速下降到或始终保持在0.1mg/L以下。证明得到的重组a-ALDC能有效地降低啤酒中双乙酰含量。 相似文献
6.
拟南芥LFYcDNA的克隆及转化菊花的研究 总被引:22,自引:0,他引:22
以野生型拟南芥(Arabidopsisthaliana(L.)Heynh.)为材料,克隆并测序了Leafy(LFY)基因的全长cDNA;同时构建了LFYcDNA以CaMV35S为启动子的植物表达载体,并转化菊花(Chrysanthemummorifolium(Ramat.)Tzvel.)。该cDNA全长1263bp,共编码420个氨基酸残基,Southern杂交结果表明,LFYcDNA整合到菊花染色体组中。跟正常植株相比,转基因植株中有3株分别提早65、67、70d开花,2株分别推迟78、90d开花。 相似文献
7.
将马铃薯Y病毒普通系(PVY0)的外壳蛋白基因克隆到表达质粒pMALc2中,构建这一基因在大肠杆菌中的表达载体pMALc2PVY0CP。SDSPAGE及Westernbloting检测结果表明,这一表达栽体在E.coliDH5α中经IPTG诱导可表达分子量为71.8kDa的特异性融合蛋白。以amyloseresin亲合柱层析纯化这一融合蛋白为抗原,免疫家兔制备了效价为1∶1024的特异性抗血清。用该抗血清可通过对流免疫电泳、免疫双扩散及Westernbloting对PVY进行检测 相似文献
8.
表达barstar基因及bar基因的转基因油菜的研究 总被引:30,自引:0,他引:30
从细菌Bacilusamyloliquefaciens染色体DNA中克隆了barnase抑制剂barstar的基因,构建了带有TA-29基因5′调控区(-1300-+3)与barstar基因编码区、CaMV35S启动子与除草剂抗性基因bar两个表达框架的植物表达质粒pBBS。以“双低”油菜“5-4”的子叶柄为受体,通过农杆菌介导的遗传转化,获得了在含有10mg/L卡那霉素和20mg/LPPT的筛选培养基上再生的转基因植株。PCR分析结果表明,barstar基因已整合到油菜染色体上;Northernblot检测表明,barstar基因及bar基因在转基因植物中得到了正确的调控与表达。以转基因油菜“5-4”为父本授粉给表达barnase基因的雄性不育植株,不育株能正常结实。 相似文献
9.
外源钙调素(CaM)对粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)细胞增殖的影响。实验结果表明外源CaM能明显抑制粟酒裂殖酵母细胞的增殖,其作用方式是延长了粟酒裂殖酵母细胞生长的延滞期,抗粟酒裂殖酵母CaM抗体,TFP及Phenyl-SepharoseCL-4B能降低CaM对细胞生长的抑制作用,而Ca^2+及Ca^2+螯合剂EGTA对CaM的抑制作用均无影响。以上结果提示,外 相似文献
10.
用5-Fu治疗MT/p210bcr-abl转基因小鼠的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以5-氟脲嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)腹腔注射治疗了12只携有金属硫蛋白(Metalothionein,MT)启动子和增强子序列、bcr-ablcDNA(p210)序列及SV40剪切和Poly(A)信号序列的转基因慢粒白血病(chronicmyeloidleukemi-a,CML)MT/p210bcr-abl小鼠,于治疗的第5d及第10d从不同脏器提取总RNA、DNA及蛋白质,分别进行PCR分析、RT-PCR检测被转移基因的表达水平及免疫沉淀法分析p210bcr-abl转基因产物的激酶活性.结果表明,被转移基因在脾脏和骨髓中表达水平较高,胸腺和肾脏中呈低水平表达.5-Fu活体治疗10d后,被转移基因的表达水平及其表达产物的激酶活性均被明显抑制 相似文献
11.
转基因烟草中Bt毒蛋白基因的表达行为 总被引:9,自引:0,他引:9
构建了高效植物表达载体pBinMoBc,该载体携带超强表达复合启动子OM及Ω因子控制下的CryIA(c)基因。采用根癌土壤杆菌(Agrobacterum tumefaciens(Smith et Townsend)Conn)介导的方法转化烟草(Nicotiana tabacum L.),ELISA检测表明,大多数转基因烟草中CryIA(c)基因表达量均超过0.1%,最高可达0.255%;转基因烟草 相似文献
12.
电镜细胞化学观察揭示,不抗寒的玉米(Zea mays L.ev. Black Mexican Sweel)和抗寒的小偃麦(Triticurn seet.Trititrigia mackey)细胞在26℃悬浮培养时,标志Ca^2+定位的锑酸钙沉淀物主要分布在液泡内,细胞质和细胞核中很少见到Ca^2+沉淀;标志Ca^2+-ATPase活性的反应的磷权沉淀物丰富地分布在质膜上,显示这两种植物物质膜Ca^ 相似文献
13.
从线粒体细胞色素b探讨长臀?属三个种分类与进化的关系 总被引:4,自引:0,他引:4
本研究测定了长臂Ba属(Mystacoleucus Guenther)中的3个种:月斑长臂Ba(M.chilopterus Fowler)、长臂Ba〔M.marginatus(Cuvrier et Valenciennse)〕和细尾长臂Ba(M.lepturus Huang)共22个个体的线粒体细胞色素b部分基因片段,其序列为408bp,并选用Pang Pi(Rhodeus sinensis Cu 相似文献
14.
本实验用普通小麦“中国春”和八种异细胞质“中国春”(Aegilops vavilovii)CS,(Ae.juvenalis)CS,(Ae.crassa)CS,(Ae.comosa)CS,(Ae.uniaristata)CS,(Ae.speltoides.M.)CS,(Ae.kotschyi)CS.(T.timopheevi)CS分别与八倍体小偃麦(Trititrigia 8x)“远中2”、“远中4 相似文献
15.
利用已构建的含有短芽孢杆菌(Bacillus brevis)和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)α-乙酰乳酸脱羧酶(α-acetolactate decarboxylase, α-ALDC)基因的工程菌株,并使它们分别在大肠杆菌中高效表达,获得重组α-ALDC。在实验室,用 2L体积的麦芽汁进行啤酒生产试验,添加 2种重组α-ALDC后,使啤酒中的双乙酰含量快速下降到或始终保持在0.1mg/L以下。证明得到的重组a-ALDC能有效地降低啤酒中双乙酰含量。 相似文献
16.
氧化修饰高密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞细胞周期蛋白D_1基因表达的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
动脉平滑肌细胞(sm ooth m uscle cell,SMC)是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)斑块中的主要细胞,它的增殖在AS形成过程中极其重要.利用体外培养的人主动脉SMC,观察了天然高密度脂蛋白(native high density lipoprotein,N-HDL)及氧化修饰HDL(oxidized HDL,OX-HDL)对培养人主动脉SMC cyclin D1(细胞周期蛋白D1)基因转录表达的影响.结果表明:(1)N-HDL对SMCcyclin D1基因表达无影响(P> 0.05);(2)OX-HDL使SMCcyclin D1基因表达显著增强(P<0.01),其表达量随时间(2、12、24 h)延长而增加.上述结果表明,OX-HDL的致AS作用可能与其刺激SMCcyclin D1基因表达增加有关. 相似文献
17.
在脉冲电泳(pulsed-field gel elctrophoresis,PFGE)研究中,经常使用的分子量标记有啤酒酵母(Saccharomyces cereveslae)和粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)的染色体完整DNA。其中,啤酒酵母(如菌株YNN295)有16条染色体,分子量变化范围为0.25Mb~2.2Mb(McCluskeyelal,1990),适于作为小于2.2Mb的染色体DNA的分子量标记;粟酒裂殖酵母(如菌株972h-)有3条染色体,分子量… 相似文献
18.
神经节苷脂(Gangliosides)是红细胞膜Ca~(2+)-Mg~(2+)ATPase的一种激活剂,这种激活作用也是依赖于Ca~(2+)存在。在200μmol/LCa~(2+)存在的反应体系中,100μg/mLGangliosides对Ca~(2+)-Mg~(2+)ATPase的激活作用最大,为基本酶活性的150%以上。实验还发现CaM拮抗剂三氟拉嗪(TFP)、粉防已碱(Tet)等也同样抑制Gangliosides的这种激活作用。其抑制的IC_(50)值为25μmol/L和30μmo1/L;而此浓度下抑制剂存在的反应体系中,对Ca~(2+)-Mg~(2+)ATPase的基本活性影响不大。 相似文献
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本工作观察了体外环境中不同水平的维生素E和微量元素Se对人肝癌细胞株(SMMC-7721)生长,分经和其癌基因(N-ras,c-myc)表达水平的影响,实验结果表明:高水平维生素E(2.4、9.2、24:0nmol/L)和Se(0.15,0.30,0.60nmol/L)对肝癌细胞的集落形成率具有明显的抑制作用;生化分析显示高水平维生素E微量元素Se均可明显抑制环境中脂质过氧化的水平,Se对癌细胞甲 相似文献
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耐热芽孢杆菌E2菌株纤维素酶基因克隆的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
用质粒pBR322作载体,大肠杆菌E.coli DH5αF’作受体,克隆到耐热孢杆菌E2菌株的羧甲基纤维素酶基因。重组质粒PBG3从产生CMCase的转化子中分离得到。克隆到的CMCase基因位于4.0kbHindⅠⅠⅠ片段上。功能状态CMCase基因被亚克隆到2.4kbDNA片段上。 相似文献