MLC_2-糜酶融合基因克隆及转基因小鼠的产生

为研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系,并提高糜酶基因在小鼠心脏中的表达,构建肌球蛋白轻链－２启动子（ｍｙｏｓｉｎｌｉｇｈｔｃｈａｉｎ－２ｐｒｏｍｏｔｅｒ,ＭＬＣ２）－糜酶融合基因并产生转基因小鼠．通过删除糜酶基因启动子序列,构建结构基因克隆,然后与大鼠心脏肌球蛋白轻链－２启动子序列相拼接,构建ＭＬＣ２－糜酶融合基因克隆,回收并纯化融合基因片段,显微注射入小鼠受精卵产生转基因小鼠,经ＰＣＲ扩增、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交和ＰＣＲ扩增产物的测序,筛选和确定转基因鼠．在新出生的４６只小鼠中有２只为转基因阳性鼠,且外源基因能稳定遗传给后代,从而获得了可用于研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系的转基因小鼠模型．     

筛选转基因动物的新方法——PCR及其产物测序法

用特异性引物对肌球蛋白轻链2启动子(myosin light chain-2,MLC₂)-糜酶融合基因的转基因新生鼠鼠尾DNA进行PCR筛选, 低熔点琼脂糖凝胶电泳回收阳性样品PCR所扩出的DNA条带,纯化后用同一对引物中的一个进行单引物PCR测序,与所转外源基因序列比较,进一步确定整合有外源基因的阳性鼠.PCR及PCR 产物测序法检测转基因动物具有操作方便,灵敏度高及特异性强等优点.     

栽培介质、营养液及化学药剂对红掌生长开花的影响

采用泥炭:珍珠岩:沙(1:1:1)、珍珠岩和水3种栽培介质及3个配方的营养液对红掌进行无土栽培,结果表明,以水作为介质,营养液配方为N:P₂O₅:K₂O=4:1:8的培养液对红掌株高、叶片数及植株净重的增加效果最好,但水培对红掌开花无促进作用。以水为介质的红掌经高温(32℃)胁迫后叶片黄化数为零,显著低于其它处理组;而在泥炭:珍珠岩:沙(1:1:1)介质中,则是6-BA处理的叶片黄化数明显低于其它处理组。     

转基因小鼠中外源基因部分内含子序列的缺失及其对转录的影响

利用PCR扩增及PCR测序在显微注射法产生的转基因小鼠中发现,整合在小鼠染色体上的肌球蛋白轻链2启动子(myosinlightchain2promoter,MLC2)-糜酶(chymase)外源融合基因存在两种形式,一种为全长的融合基因,另一种在糜酶结构基因的第一内含子中缺失了213bp的序列。RT-PCR结果表明,缺失了部分内含子序列的外源融合基因不能在转基因小鼠心脏中表达.而全长的外源融合基因则能较高水平地表达,竞争性PCR定量实验表明在200ng心脏总RNA反转录产物中约含5.05(±1.38)×106个糜酶cDNA分子。上述结果表明,糜酶结构基因的第一内含子可能对MLC2-糜酶基因的表达具有调控作用。     

糜酶基因在转染的乳鼠心脏组织细胞中的表达

糜酶基因在转染的乳鼠心脏组织细胞中的表达何泉陈兰英（中国医学科学院、中国协和医科大学,心血管病研究所、阜外心血管病医院,北京１０００３７）ＴｈｅＨｕｍａｎＨｅａｒｔＣｈｙｍａｓｅＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＣｕｌｔｕｒｅｄＮｅｏｎａｔａｌＲａｔＨ...     

高压氧联合低剂量阿替普酶静脉溶栓治疗老年急性缺血性脑卒中的疗效及对患者神经认知功能、凝血指标的影响

摘要 目的：评价高压氧（HBO）联合低剂量阿替普酶（rtPA）静脉溶栓治疗老年急性缺血性脑卒中（AIS）的疗效及对患者神经认知功能、凝血指标的影响。方法：选入我院2020年1月~2022年12月收治的老年AIS患者60例,随机分为对照组和观察组,各30例。对照组予以HBO+标准剂量（0.9 mg/kg）rtPA静脉溶栓治疗,观察组采用HBO+低剂量（0.6 mg/kg）rtPA治疗。评价两组的治疗效果、神经认知功能及凝血指标等,并进行统计比较。结果：两组治疗总有效率无明显差异（P＞0.05）;与溶栓前比较,两组溶栓后24 h、7 d时的NIHSS显著下降、MMSE明显升高（P＜0.05）,但两组之间无明显差异（P＞0.05）;相较于溶栓前,两组溶栓后7 d时PT、APTT、TT、D-D不同程度增加,Fib明显下降（P＜0.05）,而观察组增加/下降幅度较小,与对照组差异显著（P＜0.05）;观察组出血率明显低于对照组（6.67% vs 26.67%,P＜0.05）;两组死亡率无明显差异（P＞0.05）。结论：HBO联合低剂量与标准剂量rtPA静脉溶栓在改善AIS患者神经认知功能、临床疗效及死亡率方面效果相当,但低剂量对血凝功能影响小,同时出血发生风险低。     

糜酶的研究进展

糜酶是一类丝氨酸蛋白酶,主要存在于肥大细胞的分泌颗粒和细胞间质。成熟的酶为一糖蛋白,由２２６个氨基酸组成,分子量为３０ｋＤ,其酶活力能被丝氨酸蛋白酶抑制剂所抑制,而不受血管紧张素Ⅰ转换酶抑制剂的影响。糜酶的ｃＤＮＡ和基因组ＤＮＡ均已被克隆和测序。该酶和神经炎症反应、血管活性肽代谢和细胞外基质代谢等有密切联系,在心脏血管紧张素Ⅱ形成中起重要作用。