Fas/Fas L 凋亡作用机制

Fas(又称APO-1,CD95)及其配体Fas L,诱导编程性死亡的细胞表面分子,参与机体免疫调节.本文主要讨论了Fas/Fas L 相互作用诱导细胞凋亡的可能机制,包括表达调控,特异结合蛋白,蛋白水解链等.     

Fas介导细胞凋亡及相关免疫调节作用

Fas/CD95作为肿瘤坏死因子(TNF)/神经生长因子(NGF)分子受体超家族成员,在细胞凋亡及体内免疫调节方面发挥重要的作用。细胞在接收到经Fas传递的凋亡信号后,主要经胞浆caspase和线粒体两种途径引发细胞程序性死亡。Fas介导T/B淋巴细胞的凋亡,在这些细胞的早期分化发育和维持机体免疫平衡中起主要作用。CTL和NK等杀伤细胞也通过Fas-FasL介导的细胞凋亡而发挥对靶细胞的杀伤效应。因此,Fas-FasL系统在肿瘤、自身免疫性疾病、艾滋病等疾病过程中发挥重要的作用。     

人重组Fas配体体外诱导细胞周期特异性凋亡模型的建立及其意义

以Molt-4、Jurkat细胞株和外周血淋巴细胞(peripheralbloodlymphocyte,PBL)为靶细胞,检测细胞膜上Fas的表达。人重组Fas配体(recombinanthumanFasligand,rhFasL)诱导细胞6～36h后用改良后的API等方法检测细胞凋亡及诱导凋亡过程中细胞周期蛋白的变化,探讨Fas介导的细胞凋亡与细胞周期的关系。结果显示:rhFasL诱导Molt-4、Jurkat细胞株和植物血凝素刺激进入细胞周期的PBL的凋亡具有细胞周期特异性并始动于G1期;而G0期PBL的细胞膜上虽然也有Fas的表达,但不能诱导细胞凋亡。研究还发现rhFasL诱导细胞凋亡时G1期的细胞周期蛋白D3明显升高,细胞周期蛋白E明显下降。以上结果表明rhFasL体外诱导的细胞凋亡发生在晚G1期,细胞凋亡的发生与细胞是否通过限制点进入细胞周期有关,细胞凋亡发生于晚G1期是G1期细胞周期蛋白E的下降和检测点的监督导致DNA受损的细胞不能通过G1/S交界的结果。     

曲普瑞林对人乳腺癌细胞Fas/FasL基因表达的影响

为了观察GnRH激动剂曲普瑞林对人乳腺癌细胞生长的影响,探讨药物处理后细胞中Fas和Fas L基因的表达情况及其与细胞生长的关系,本研究采用了形态学显微镜观察、MTT检测和Real-time PCR技术,对曲普瑞林处理后乳腺癌细胞的生长增殖情况及Fas和Fas L基因表达的变化进行了研究。结果显示,曲普瑞林可抑制乳腺癌细胞MCF-7的生长并表现出了剂量依赖性,药物浓度越大对肿瘤细胞的抑制作用越强。随着药物浓度的增大、抑制作用增强,肿瘤细胞中Fas基因的表达量逐渐增大,而Fas L基因的表达量却逐渐下降。推测曲普瑞林在作用过程中可能通过促进肿瘤细胞中Fas的表达,诱导了Fas所介导的细胞凋亡途径的恢复,达到抑制肿瘤细胞生长的目的。     

促凋亡蛋白Bid诱导肝细胞凋亡的机制

为研究促凋亡蛋白Bid对肝细胞凋亡过程中的调节机制 ,在体内和体外分别用TNF α或抗Fas抗体诱导小鼠肝细胞凋亡 .免疫荧光染色观察Bax转位和构象变化 ;采用ELISA检测caspase 3和 8的活性 ;Western印迹测定Bid和Bax的裂解活化及Bax的转位和插入 .结果显示 :TNF α或抗Fas抗体通过激活Bid导致Bax转位和构象变化 ,使Bax得以插入线粒体膜诱导肝细胞凋亡 .阻断Bid的作用 ,则Bax的转位和插入明显被削弱 ,肝细胞的凋亡受到抑制 .提示由死亡受体诱导的肝细胞调亡可能受Bid调节 ,Bax转位和插入依赖于Bid .     

Fas与FasL的分子生物学研究进展

Fas是细胞表面诱导凋亡的分子,是I型膜蛋白,属TNF受体家族成员。而Fas配体（FasL)是Ⅱ型膜蛋白,属TNF家族成员。Fas与FasL结合,可向细胞传递死亡信号,引发细胞凋亡。Fas在人体中表达及功能正常与否,对人体免疫调控起重要作用。     

人sTNFR1基因原核表达及体外抗肝细胞凋亡的活性研究

采用RT-PCR,从Hela细胞的mRNA中扩增人sTNFR1基因,构建含有目的片段的T载体克隆及原核表达载体pMAL-c2x重组质粒亚克隆,转化入大肠杆菌,测序证实其序列与基因数据库中sTNFR1基因一致.经异丙基-β-D半乳糖苷酶（IPTG）诱导表达,淀粉树脂亲和层析法纯化,得到融合蛋白sTNFR1-MBP.结果显示：经Western-blotting检测,sTNFR1-MBP具有免疫活性L流式细胞术检测目的蛋白对TNF-α诱导QSG7701凋亡有抑制作用,这为今后的研究打下了基础.     

内耳免疫反应诱导Fas和FasL表达与凋亡的关系

目的研究内耳免疫反应过程中是否存在细胞凋亡,以及细胞凋亡是否与Fas和FasL信号转导有关.方法选用雌性白色豚鼠16只,随机分为实验组和对照组各8只,以钥孔虫戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)全身免疫后,实验组以相同抗原进行内耳免疫,对照组内耳注射等量的磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate buffered saline,PBS),在内耳免疫5d后处死动物,取内耳免疫侧耳蜗做石蜡切片.通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL)检测内耳凋亡细胞,免疫组化检测内耳Fas和FasL的表达.结果实验组豚鼠内耳Corti器毛细胞,血管纹的缘细胞和螺旋神经节细胞存在TUNEL染色阳性细胞,而对照组动物切片仅在支持细胞、血管纹和螺旋神经节细胞中发现极少数TUNEL染色阳性细胞.免疫组化染色实验组Corti器、螺旋神经节细胞、血管纹和螺旋韧带Fas和FasL蛋白表达阳性,而对照组只有螺旋神经节细胞和血管纹有较弱的Fas蛋白表达,FasL蛋白表达阴性.结论内耳免疫反应可诱导细胞凋亡的发生,Fas-FasL途径是参与此过程重要的信号转导途径之一.     

调亡蛋白：特异性触发肿瘤细胞死亡的蛋白质

凋亡蛋白 (ａｐｏｐｔｉｎ)是近年来发现由鸡贫血病毒 (ＣＡＶ)ｖｐ3基因产生的蛋白质 ,主要引起鸡淋巴细胞凋亡[1、2 ] 。进一步研究发现 ,凋亡蛋白具有一种抗肿瘤细胞特异性 ,即仅仅诱导肿瘤细胞或转化细胞凋亡 ,而对正常细胞或二倍体细胞不起作用。更让人感兴趣的是 ,凋亡蛋白诱导的凋亡不依赖功能性Ｐ5 3的生成 ,也不被ＢＡＧ 1、Ｂｃｒ ａｂｌ的生成所抑制 ,甚至不受凋亡抑制因子Ｂｃｌ 2过分产生的影响[3、4] 。这些特性预示 ,凋亡蛋白可被用作一种治疗因子 ,只要它在体内能被大量传递给肿瘤细胞 ,就可选择性地将它们根除。这一诱人的…     

天府肉鸭胸腺发育中Fas、Fas-L和P53蛋白表达的动态研究

凋亡相关因子(Fas)、凋亡相关因子配体(FasL)和磷蛋白53(P53)是细胞发生凋亡的重要调控因素。本文研究了天府肉鸭(Anas platyrhynchos domestica)胸腺发育过程中Fas、FasL和P53蛋白的动态表达,旨在更深入地认识胸腺细胞自然凋亡的调控机制。将65羽天府肉鸭分为13组,即22、24、26天胚龄,胚后0(新生雏)、3、5、8、14、17、20、26、29、32周龄。分别采取各组鸭的胸腺组织,4%多聚甲醛固定,常规石蜡切片,Fas、Fas L及P53蛋白免疫组织化学染色,镜检并进行阳性细胞计量分析。结果显示,Fas阳性反应见于胸腺淋巴细胞,其阳性率在22~26天胚龄无明显变化;新生雏显著升高,随后趋于恒定,直到17周龄,20周龄以后呈上升趋势。Fas L阳性反应见于胸腺淋巴细胞及上皮细胞,在胚胎及胚后发育过程中,其淋巴细胞阳性率无明显变化。P53阳性反应见于胸腺皮质淋巴细胞和胸腺上皮细胞,其淋巴细胞阳性率在各组中无显著性差异。结果说明Fas,Fas L和P53蛋白在天府肉鸭胸腺发育中呈现出不同表达规律。     

SN38对Fas介导凋亡效应的影响

为探讨SN38与Fas介导凋亡的相互关系,并进一步探讨脂筏（富含鞘磷脂）在该过程的作用,本实验拟单独或者联合应用SN38和CH11作用于脂筏阴性和脂筏阳性的淋巴瘤细胞株WR／Fas—SM（－）细胞和WR／Fas—SMS1细胞,通过流式细胞术、DNAladder等实验方法观察SN38能否促进Fas介导的凋亡以及对2细胞的效应差异。结果显示,SN38与CHll联合应用与单独应用SN38相比,可以诱导WR／Fas—SMS1细胞更加明显凋亡现象的发生,但对WR／Fas—SM（-）细胞凋亡的促进作用不明显,提示脂筏在SN38促进WR／Fas-SMS1细胞Fas介导凋亡过程中起到一定作用。     

线粒体与细胞调亡

线粒体不仅是动物细胞内的主要产能中心,有理 在细胞凋亡中还承担着主开关的角色。作为细胞生死开关的线粒体,其通透性转变孔的开放,可让细胞色素c、凋记发诱导因子,Ca^2 以及膜间隙中的胱冬肽酶原（procaspase)等凋亡因子被释放到细胞质中,它们或激活凋亡蛋白家族的主要成员－－胱冬肽酶（caspase）,或独立地破坏核染色质,或作用于其它Ca^2 －依赖性蛋白,从而使细胞的整体结构破坏、功能紊乱、最终变成泡状凋亡小体而凋亡。弄清线粒体在细胞凋亡中的调控机制,不仅具有重要的理论意义,而且在开发研制以线粒体为靶目标的各种药物以治疗癌症、老年性痴呆和帕金森综合症等方面也具有重要的实践价值。本文谨以对线粒体及细胞凋亡的最新研究进展为基础,对线粒体在决定细胞生列中所起的关键作用做一综述。     

Desmosdumotin-C A环衍生物TEP诱导HL-60细胞凋亡作用机制研究

本研究主要探讨毛叶假鹰爪素C(Desmosdumotin C)A环衍生物TEP诱导人急性白血病HL-60细胞凋亡作用及机制。流式细胞技术检测TEP诱导细胞凋亡及其对凋亡细胞中Fas、Fas L、Bax、Bcl-2表达率的影响,透射电镜观察凋亡细胞形态学改变。结果显示40μg/m L TEP作用细胞24 h后,细胞可呈现典型的凋亡形态学变化;40μg/m L TEP可明显提高凋亡细胞中Fas、Fas L、Bax的表达(P0.05),并可明显降低抗凋亡细胞Bcl-2的表达(P0.05)。以上实验结果表明毛叶假鹰爪素C(Desmosdumotin C,Des C)A环衍生物TEP可有效地诱导HL-60细胞凋亡,其作用机制可能与上调Fas、Fas L、Bax表达以及下调Bcl-2表达有关。     

Fas/FasL系统与类风湿关节炎发病机制的研究进展

类风湿关节炎是机体对自身滑膜发生免疫反应的疾病,其主要病理特征是滑膜增生和多种炎症细胞的浸润。滑膜增生的有关机制仍不清楚,目前认为可能是滑膜细胞和炎症浸润细胞数量增加及凋亡相对减少,即细胞凋亡程度不及增殖程度所致。Fas/FasL系统是细胞凋亡的重要途径之一,通过影响滑膜细胞的Fas/FasL表达可以诱导其凋亡。本文对Fas/FasL的性质、结构、功能、Fas/FasL与RA发病机制及RA治疗的关系进行综述。     

一种小鼠可溶性Fas cDNA的克隆与表达

为获得调节鼠Fas Fas配体系统诱导凋亡的作用 ,根据GenBank中小鼠Fas基因碱基序列 ,设计扩增可溶性Fas(solubleFas ,sFas)引物 ,用RT PCR方法从幼鼠胸腺组织中克隆出与人可溶性Fas类似的新的鼠sFas (FasC)cDNA序列 .该序列缺乏Fas基因的跨膜区片段 ,但不改变其阅读框 .采用定向克隆的方法将之插入pUC19中间载体 ,DNA序列测定证实该片段序列与预期序列完全一致 .利用亚克隆的方法将鼠FasC的cDNA片段克隆到真核表达载体pCA13上 ,构建出重组载体pCA13 FasC ,通过脂质体LF2 0 0 0转染至 2 93细胞 .RT PCR和Western印迹证实 ,鼠FasC在 2 93细胞获得高效表达 .凋亡诱导实验表明 ,鼠FasC的表达可阻断Fas诱导凋亡的作用 ,证实了所转染鼠FasC的生物活性 .     

辛伐他汀对动脉粥样硬化大鼠凋亡相关基因Fas及FasL蛋白表达的影响

目的通过研究辛伐他汀对动脉粥样硬化大鼠血管壁中细胞凋亡相关基因Fas及FasL蛋白表达产物的影响,探讨其在预防动脉粥样硬化发生中的可能机制。方法复制动脉粥样硬化大鼠模型,以辛伐他汀干预,取胸主动脉,观察其斑块变化,采用免疫组化Elivision法测定动脉粥样硬化血管壁中Fas、FasL蛋白表达。结果Fas蛋白表达在实验组明显高于对照组及干预组(P<0.01,P<0.05),实验组FasL蛋白表达也明显高于对照组及干预组(P<0.05)。结论Fas及FasL基因通过促进细胞凋亡作用而诱发动脉粥样硬化过程,辛伐他汀可通过调节细胞凋亡过程发挥抗动脉粥样硬化作用。     

诱导凋亡:脊髓灰质炎病毒致细胞病变的机制

用脊髓灰质炎病毒(Poliovirus)减毒活疫苗株(中Ⅲ-2)感染人二倍体胚肺成纤维细胞株(KMBl7)后,细胞形态变化分为两个阶段第一阶段是致CPE过程,导致形态学上特有的细胞圆缩、体积缩小等CPE特征,经光学显微镜、荧光显微镜、细胞流式仪、电子显微镜、DNA凝胶电泳分析,证明该疫苗株诱导的细胞病理改变具典型的凋亡特征细胞圆缩、细胞核浓缩破裂、核染色质凝缩后分布于核膜边缘、绝大部分细胞出现在凋亡区域、DNA断裂。表明脊髓灰质炎病毒诱导的CPE本质是一个诱导细胞凋亡过程;第二阶段是Poliovirus诱导细胞坏死。进一步提示有可能通过抑制细胞凋亡提高脊髓灰质炎减毒活疫苗的产量。     

宫颈癌SiHa细胞中丛生蛋白、存活素和Fas的表达的研究

目的:Clusterin、Survivin和Fas与肿瘤细胞凋亡密切相关.本研究拟通过检测宫颈癌SiHa细胞中上述这些蛋白的表达水平,以及羟基喜树碱对这些蛋白表达的影响.方法:SiHa细胞分别在普通培养基和舍有羟基喜树碱的培养基中培养,检测细胞死亡,annexin V和PI染色检测细胞凋亡,Western-blotting方法检测Cluste血、Survivin和Fas表迭水平.结果:我们的结果表明,在羟基喜树碱培养的细胞中,在浓度为0.5和3umol/L的培养基培养24小时后凋亡和死亡的肿瘤细胞数量增多,明显高于无化疗药的培养基中的细胞.Western结果显示经过羟基喜树碱处理的细胞Clusterin水平和fas蛋白水平明显高于未经过处理的细胞.在经过0.5和3umol/L的化疗药处理的SiHa细胞Survivin表达下降.结论:与survivin相比,clusterin在对化疗药物抵抗的过程中发挥的作用更大.     

江浙蝮蛇蛇毒蛋白诱导K562细胞调亡的研究

目的：研究江浙蝮蛇蛇毒蛋白诱导K562细胞调亡。方法：通过电镜观察蛇毒蛋白作用后K562细胞的形态变化;MTT检测蛇毒蛋白对细胞增值的影响,同时应用流式细胞仪检测细胞凋亡数及其对细胞周期的影响;采用琼脂糖凝胶电泳观测凋亡片断。结果：蛇毒蛋白作用K562细胞后,能显著抑制细胞增值;LC50为4．96μg／mL,电镜可观察到凋亡形态学改变;电泳呈现典型的阶梯状条带,流式细胞仪检测到凋亡峰。结论：江浙蝮蛇蛇毒蛋白可诱导K562细胞调亡。     

一氧化氮诱导细胞调亡

一氧化氮(NO)参与体内众多的生理病理过程,最近发现NO与细胞凋亡关系密切,可诱发多种细胞发生凋亡,并与其他活性氧自由基(ROS)的凋亡传导途径之间存在对话效应,NO诱导凋亡促进p53基因表达,其分子作用机理正是目前的研究重点。