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采用RT-PCR,从Hela细胞的mRNA中扩增人sTNFR1基因,构建含有目的片段的T载体克隆及原核表达载体pMAL-c2x重组质粒亚克隆,转化入大肠杆菌,测序证实其序列与基因数据库中sTNFR1基因一致。经异丙基-β-D半乳糖苷酶（IPTG）诱导表达,淀粉树脂亲和层析法纯化,得到融合蛋白sTNFR1-MBP。结果显示：经Western-blotting检测,sTNFR1-MBP具有免疫活性;MTT检测目的蛋白可有效地封闭TNFα对QSG7701的细胞毒性作用;流式细胞术检测目的蛋白对TNF-α诱导QSG7701凋亡有抑制作用;sTNFR1-MBP具有良好的生物活性,为今后的研究打下了基础。 相似文献
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为探究血清PIVKA-Ⅱ与AFP检测在原发性肝细胞癌诊断中的优劣性,对237例患者的血清PIVKA-Ⅱ与AFP进行检测,其中乙肝病毒相关性原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)患者115例、乙肝携带者(asymptomatic carrier, As C) 55例、乙肝病毒相关肝硬化(liver cirrhosis, LC)患者47例、非肝癌肿瘤患者20例。检测结果显示:肝癌组PIVKA-Ⅱ的中位表达量高于非肝癌组(包括As C组、LC组、非肝癌肿瘤组), P均小于0.05;使用AFP、PIVKA-Ⅱ和AFP+PIVKA-Ⅱ诊断肝癌的灵敏度分别为67.8%、81.7%和90.4%,对应的ROC曲线下面积为0.881、0.945和0.962, PIVKA-Ⅱ检测肝癌的cut-off值为32 m AU/m L。已有研究报道以40 m AU/m L为PIVKA-Ⅱ的cut-off值,本研究根据PIVKA-Ⅱ是否≥40 m AU/m L将HCC组分为PIVKA-Ⅱ≥40组、PIVKA-Ⅱ40组,对两组患者的性别、年龄、病毒载量、肿瘤分期、癌结节数目、肿块直径和是否抗病毒治疗进行比较,采用logistic回归分析两组患者的差异性指标,结果显示病毒载量[OR=1.150, 95%CI (1.022, 1.295), P=0.02]为PIVKA-Ⅱ检测肝癌的独立影响因素。相关分析表明PIVKA-Ⅱ与肝癌肿块直径呈正相关。此外, AFP、PIVKA-Ⅱ的cut-off值分组结果表明, PIVKA-Ⅱ≥32且AFP20组的肝癌肿块直径大于PIVKA-Ⅱ32且AFP≥20组(P=0.035)。因此, PIVKA-Ⅱ是优于AFP筛查肝细胞癌的血清学肿瘤标志物,其表达量与肿瘤肿块直径呈正相关。 相似文献
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采用RT-PCR,从Hela细胞的mRNA中扩增人sTNFR1基因,构建含有目的片段的T载体克隆及原核表达载体pMAL-c2x重组质粒亚克隆,转化入大肠杆菌,测序证实其序列与基因数据库中sTNFR1基因一致.经异丙基-β-D半乳糖苷酶（IPTG）诱导表达,淀粉树脂亲和层析法纯化,得到融合蛋白sTNFR1-MBP.结果显示：经Western-blotting检测,sTNFR1-MBP具有免疫活性L流式细胞术检测目的蛋白对TNF-α诱导QSG7701凋亡有抑制作用,这为今后的研究打下了基础. 相似文献
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以He1a细胞的总RNA为模板,用RT—PCR方法扩增sTNFR1全编码区基因片段,构建含有目的片段的T载体克隆及真核表达载体pcDNA3．1（-）重组质粒亚克隆,将重组质粒和脂质体共同转染NIH3T3细胞系,G418筛选稳定转染细胞株．经核苷酸序列测序和酶切鉴定,成功构建了pcDNA3．1（-）-sTNFR1真核表达质粒,脂质体法建立了高效表达sTNFRI的稳定转染细胞系,并经RT—PCR和Western Blotting鉴定．人sTNFR1基因能在NIH3T3细胞系中稳定表达,为今后的研究打下了基础． 相似文献
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