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相似文献
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1.
木本植物蛋白提取和SDS-PACE分析方法的比较和优化   总被引:2,自引:0,他引:2  
在几种木本植物上对4种常用蛋白提取方法、4种凝胶染色和脱色方法及影响蛋白定量和SDS-PAGE电泳的因素进行了比较研究,发现:利用改良丙酮沉降法提取蛋白,不仅提取效率高,而且杂质干扰少,得到的电泳结果,蛋白条带清晰,数量多;将常规凝胶染色和脱色液中的乙醇改用为甲醇可大大改善染色和脱色效果,获得了没有背景或背景很浅的电泳结果。通过研究确定了一套优化的适用于木本植物的蛋白提取、定量、凝胶制备、电泳、染色、脱色以及干胶制备的方法。利用这一优化方法对胡杨细胞盐胁迫蛋白进行了研究,发现了与高水平盐胁迫有关的66kD蛋白和与盐胁迫和干旱胁迫均有关的28kD蛋白,获得了满意的蛋白SDS-PAGE分析结果。  相似文献   

2.
酵母菌 S H2 发酵产物( 简称 F S H2) ,用 Sephadex G75 凝胶层析和 H P L C 色谱层析分离纯化,收集到一组蛋白。该组蛋白在 P A G E 和 S D S P A G E 电泳上带型一致,无蛋白亚基,分子量范围为52 ~72 k D。凝胶上糖蛋白的特异性染色——— Schiff’s 染色显示阳性染色带;用 Lowry’s 法测蛋白和硫酸酚法测糖,显示蛋白与糖的比例约为3∶1 。该组蛋白与人α干扰素作用,增强干扰素生物学效价分别为1 .6 ~2 .8 倍和1 .4 ~4 .0 倍;经 Sephadex G75 凝胶层析的 F S H2 蛋白洗脱峰增效2 .01 ~5 .68 倍;发酵液增效1 .64 ~6 .86 倍。并证实酵母菌 S H2 增效干扰素的活性成分为52 ~72k D 分子量范围的胞外糖蛋白( 简称 Y E G Ps) 。  相似文献   

3.
不同品种花生种子蛋白质的电泳分析   总被引:14,自引:0,他引:14  
对中国花生(ArachishypogaeaL.)5种不同类型的46个栽培品种的种子蛋白质进行电泳分析。SDSPAGE和IEFSDSPAGE(双向电泳)的结果显示,不同品种的花生种子蛋白多肽组成存在4种类型。与初步纯化的花生球蛋白及伴花生球蛋白的SDSPAGE结果比较,花生种子蛋白组成的主要差异在于花生球蛋白亚基组成的不同,其中类型Ⅰ花生球蛋白主要含有41kD、385kD和2个18kD亚基,类型Ⅱ主要含41kD、385kD、375kD和3个18kD亚基,类型Ⅲ主要含41kD、38.5kD、36.5kD和3个18kD亚基,类型Ⅳ主要含41kD、38.5kD、375kD、36.5kD和3个18kD亚基。不同品种的伴花生球蛋白多肽组成基本一致。对不同类型8个品种种子蛋白的氨基酸组成进行测定,发现类型Ⅰ的含硫氨基酸含量较高。  相似文献   

4.
为了研究多催化功能蛋白酶(multicatalyticalproteinase,MCP)在负氮平衡形成中的作用,以大鼠骨骼肌为原料,提取此酶并制备其抗血清.将大鼠骨骼肌粗提物经45%~65%饱和度硫酸铵分级盐析、阴离子交换层析和凝胶过滤,最后从Sepharose4B层析柱上获得单一活性洗脱峰.酶活性用Carbobenzoxy-Val-Gly-Arg-4-nitrinilideacetate作底物检测.非变性PAGE银盐染色显示单一区带的骨骼肌多催化功能蛋白酶,SDS-PAGE银盐染色显示10条亚基电泳区带,分子量在25~32kD之间.纯化的酶免疫兔8周后,抗血清效价达132,用分级盐析和离子交换层析纯化抗血清,显示单一电泳区带的IgG.Western-blot分析显示只在25~32kD之间出现多条亚基区带.这些结果提示已获得电泳纯MCP及其较高特异性的多克隆抗体.  相似文献   

5.
盐生杜氏藻甘油-3-磷酸脱氢酶的分离纯化及其特性的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
利用PEG分级,DEAE离子交换层析,BlueSepharose拟亲和层析,MonoQ离子交换层析等手段,分离纯化盐生杜氏藻(Dunalielasalina(Dunal)Teod.)甘油三磷酸(G3P)脱氢酶(EC1.1.1.8),得到比活为12.6U/mg的电泳纯的酶,并对此酶的生化特性进行了研究。4%~20%非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得全酶分子量约为270kD,SDSPAGE表明该酶只有一种分子量约为65kD的亚基,据此推测该酶应为同四聚体。酶催化磷酸二羟丙酮(DHAP)还原的最适pH值为7.5,催化G3P脱氢的最适pH值为10。该酶对4个底物还原型辅酶Ⅰ(NADH),二磷酸吡啶核苷酸(DHAP),辅酶Ⅰ(NAD),G3P的表观Km值分别为63μmol/L,272μmol/L,1.53mmol/L,6.52mmol/L。该酶在保存过程中易失活。NADH能降低酶失活的速度,而NAD则不然。低浓度NaCl对酶略有保护作用,但高浓度NaCl加快酶的失活,且浓度越高效应越明显。  相似文献   

6.
圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化和特性   总被引:3,自引:0,他引:3  
圆弧青霉突变株PG37 发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质5 200 u 的碱性脂肪酶, 纯化倍数16 .5 , 得率33.2% , 在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)上均呈现单一蛋白质条带。SDSPAGE 和凝胶过滤分别测得酶的分子量为27.5 kD和29 kD, 表明该酶以单体形式存在。N末端10 个氨基酸的序列测定结果为ATADAAAFPD, 与已知的碱性脂肪酶的N 末端序列没有同源性。酶学特性研究结果表明, 该酶的最适作用温度为25 ℃, 在30 ℃以下稳定,40 ℃处理20 min 仅残留30 % 酶活性;pH 稳定范围在6.5~10.5 , 最适pH 为10 .0 。低浓度的碱性蛋白酶对PG37 碱性脂肪酶活性的影响较小, 可同时添加在洗涤剂中。  相似文献   

7.
昆虫谷胱甘肽S-转移酶分离纯化的新方法   总被引:4,自引:0,他引:4  
谷胱甘肽S-转移酶(glutathioneS-transferases,GST)是一类具有多种生理功能的同功酶.从蜡螟幼虫(Galeriamelonela)的提取液中分离纯化谷胱甘肽S-转移酶的基本方法如下:首先将冷冻的蜡螟幼虫在磷酸缓冲液中匀桨,经10000g和100000g分级离心;取上清液通过QAE-SephadexA-25离子交换柱层析除去部分色素和杂蛋白;然后采用谷胱甘肽-琼脂糖凝胶亲和层析(GSH-QT4),四溴酚酞二磺酸盐-琼脂糖凝胶亲和层析(BSP-QT4),铜离子-琼脂糖凝胶螯合层析(Cu2+-QT4)及PBE94-Sepharose(PBE94)聚焦层析等层析技术进一步分离纯化.将上述方法获得的色谱峰以CDNB和DCNB为底物检测生物活性.具有生物活性部分的蛋白质,通过SDS-PAGE测定其分子量.实验结果表明,采用GSH-QT4亲和层析法获得的活性峰,在SDS-PAGE图谱上呈现出两条带,分子量为24kD,24.5kD左右;Cu2+-QT6螯合层析法分离的活性峰,呈现出一条带,分子量为24kD左右;PBE94-聚焦层析法分离获得三个活性峰:第一色谱峰,呈现出一条带,分子量为23kD左右  相似文献   

8.
长白山白眉蝮蛇蛇毒磷脂酶A2的分离和初步表征   总被引:10,自引:0,他引:10  
东北长白山白眉蝮蛇(AgkistrodonblomhoffiUsurensis)蛇毒经DEAESephadexA50离子交换层析柱,连续3步SephadexG75凝胶过滤柱得到了磷脂酶A2(PLA2)的纯品。SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)以及基质辅助激光解析电离飞行时质谱(MALDI/TOF/MS)表征为单一蛋白,其准确分子量为(14.008±0.007)kD。最适pH范围8.0~9.0,最适的反应温度为45℃。在溶液中有多聚体的存在。  相似文献   

9.
常规聚丙烯酰胺凝胶电泳快速检测胰蛋白酶抑制剂的方法   总被引:3,自引:0,他引:3  
SDS—PAGE- 明胶电泳是检测蛋白酶抑制剂的常用方法,基本原理为:聚丙烯酰胺凝胶中加入SDS和明胶,  SDS使蛋白酶抑制剂发生可逆变性。电泳完毕,用 Triton X- 100恢复凝胶板中蛋白酶抑制剂的活性,凝胶板置于蛋白酶溶液里保温,含蛋白酶抑制剂部位的明胶不被蛋白酶水解而呈现蛋白染色带。SDS-PAGE一明胶电泳检测蛋白酶抑制剂时,在同一块凝胶板上可同时检测酸性、碱性及中性的蛋白酶抑制剂,但电泳后处理(包括复性,酶解,漂洗和染色)时间长(约20h),而且对于同一样品中分子量相近的蛋白酶…  相似文献   

10.
枯草芽孢杆菌B034拮抗蛋白的分离纯化及特性分析   总被引:31,自引:2,他引:29  
枯草芽孢杆菌(Bacilussubtilis)B034分离自水稻叶面,对水稻白叶枯病菌具有较强的拮抗能力。除去菌体培养液以70%饱和度硫酸铵沉淀所得的拮抗物粗提液对热稳定,对胰蛋白酶不敏感,对蛋白酶K、链霉蛋白酶E部分敏感,对氯仿部分敏感,其作用的活性pH范围低至4,高至12以上,比较耐碱性。粗提液经PhenylSepharoseCL4B柱层析、DEAESephacel柱层析和HPLC的Superdex75HR10/30柱层析,得到二个拮抗活性峰:P1和P2。P2经SDSPAGE和PAGEIEF电泳显示为单一蛋白带,分子量503kD,等电点625。自动Edman降解法从P2的N端测出残基序列为IleSerAsnProXIleAspVal  相似文献   

11.
为了解茶树脱水素种类与功能,采用Western-blot技术,研究了不同季节及越冬过程中茶树叶片脱水素蛋白家族的表达模式。结果显示:(1)茶树叶片总蛋白提取采用酚-甲醇/醋酸铵沉淀法,用时短、蛋白浓度高、SDSPAGE电泳条带清晰,背景干净,满足茶树Western-blot技术要求。(2)在不同季节及越冬期中发现14~95kD共9种不同分子量的茶树类脱水素蛋白,其中95、65、48、37、34和14kD等6种蛋白表达量较为稳定,季节与越冬期变化不明显;58kD脱水素仅在冬季表达,越冬期不断上升,2月份增加到最高,表达丰度高;28kD脱水素蛋白在冬季表达量高,越冬期与茶树抗寒力变化规律一致;21kD脱水素在夏季和越冬期后期有较高的表达。研究表明,这3种脱水素可能在茶树抗逆中起着重要作用。  相似文献   

12.
Soluble and thylakoid membrane proteins of jasmonic acid (JA)-treated and salt-stressed barley (Hordeum vulgare L.) seedlings were investigated using 15% sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide slab gel electrophoresis. High JA concentrations induced marked quantitative and qualitative changes in polypeptide profiles concerning mainly the proteins with approximately equal mobility, as in NaCl-stressed plants. The most obvious increase in thylakoid polypeptide band intensity was at 55 to 57 kilodaltons (kD). The relative share of some polypeptides with apparent molecular masses above 66 kD and of polypeptides with lower molecular masses in the region of 20.5 to 15 kD was enhanced. At the same time, one new band at 31 to 31.5 kD was well expressed at 25 and 250 micromolar JA concentrations and became discernible in the 100 micromolar NaCl-treated plants. The intensity of some polypeptides of soluble proteins (molecular masses of 60, 47, 37, 30, and 23.4 kD) increased with increasing JA concentration, whereas the intensities of other polypeptide bands (55, 21.4, and 15 kD) decreased. Enhanced levels of 60-, 47-, 34-, and 30-kD polypeptides and reduced levels of 55- and 15-kD polypeptides were present in NaCl-treated plants. The appearance of one new polypeptide, of 25.1 kD, was observed only in NaCl-treated plants. At 100 millimolar NaCl, an eightfold increase in proline content was observed while at 250 micromolar JA, the proline content was threefold over the control. It is hypothesized that exogenously applied jasmonates act as stress agents. As such, they provoke alterations in the proline content and they can modulate typical stress responses by induction of stress proteins.  相似文献   

13.
逆境蛋白在植物抵抗逆境胁迫中具有重要作用。广泛存在于植物中的磷脂酶 (PhospholipaseC/D, PLC/PLD) 是一种逆境信号传递物质, 在逆境蛋白的诱导表达中具有重要意义。该文探讨了不同胁迫及PLC/PLD抑制剂处理后一种新发现的 6 9.5kD热稳定蛋白的表达情况, 为进一步研究PLC/PLD在逆境蛋白表达中的作用机理提供依据。以玉米 (Zeamays) ‘鲁单 90 0 2’幼苗为材料, 用 2 70mmol·L-1NaCl胁迫处理, 然后进行SDS PAGE (Sodiumdo decylsulfatePolyacrylamidegelelectrophoresis) 电泳, 从受胁迫的玉米幼苗根系中分离出一种新的 6 9.5kD热稳定蛋白, 其表达量随胁迫时间的延长逐渐增加。该蛋白在恢复正常条件后仍然表达, 表明其可能是一种胁迫适应性蛋白 ;2 0 μmol·L-1ABA处理也能引起该蛋白的表达, 但表达量远低于同期的 2 70mmol·L-1NaCl胁迫处理。NaCl+ABA处理后该蛋白表达量低于NaCl处理, 但高于ABA处理。PLC/PLD抑制剂硫酸新霉素 (Neomycinsulfate, NS) 和正丁醇 (n Butylalcohol, BA) 对NaCl、ABA和NaCl+ABA诱导的 6 9.5kD热稳定蛋白表达均有明显的抑制作用, 且对ABA和NaCl+ABA两个处理蛋白表达的抑制作用均随抑制剂浓度升高或处理时间延长而逐渐增强, 但对NaCl处理蛋白表达的抑制作用则表现出复杂性。结果表明, 不同处理诱导 6 9.5kD热稳定蛋白表达的敏感程度不同, 而磷脂酶在不同处理诱导的信号传递途径中的作用机理有一定的差别。  相似文献   

14.
2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) is a hormonal herbicide widely used in the world because of its efficacy in the control of broadleaf and woody plants. In this study we have demonstrated in vivo covalent binding of the phenoxyherbicide 2,4-D to a single protein of 52 kD (from rat liver mitochondrial preparation) detected through immunoblotting studies with the specific antiserum for 2,4-D. The direct involvement of 2,4-D in the formation of the adduct has also been demonstrated in vitro, using liver mitochondrial preparations exposed to 14C-UL-2,4-D. Radiolabeled protein separated by SDS-PAGE and afterwards electroeluted showed a single labeled protein of 52 kD. When mitochondria exposed to radiolabeled xenobiotic were devoid of their outer membrane, the specific activity observed suggest that protein involved in covalent interaction belongs to the inner mitochondrial membrane. We propose that covalent binding of the phenoxyherbicide 2,4-D to a very specific single protein of 52 kD observed in vitro and in vivo may be related to known alterations of the mitochondrial function.  相似文献   

15.
正常和蛙病毒感染后大鲵血清和黏液蛋白图谱比较分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
为了更好地了解大鲵在感染蛙病毒过程中的生理生化及抗病毒反应, 通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 辅以密度分析, 对大鲵正常血清和感染血清、正常黏液和感染黏液的蛋白图谱分别进行测试比较。结果显示: 在正常血清(CS)、包括自然感染血清(NS)和人工感染血清(AS)在内的感染血清中,蛋白带集中在6080 kD, 其含量超过血清蛋白总量的42%; 正常血清在1457 kD 之间有16条蛋白带: 57、53、50、43、40、38、36、31、27、26、25、22、16、15.5、15 和14 kD, 其中正常与感染血清(包括NS和AS)比较, 有10条共有蛋白带: 57、43、40、31、27、26、25、15.5、15 和14 kD和4条差异蛋白带: 53、33、22 和16 kD。正常黏液(CM)和感染黏液(NM或AM)共有11条蛋白带: 116、100、75、57、53、45、27、18、17、16和15 kD, 但感染黏液多出7 条蛋白带: 90、52、43、32、26、20 和13 kD。还有些蛋白带含量出现变化, 如45 kD条带在CM中占总蛋白量的19.3%, 而在AM中仅占总蛋白的3.8%。研究证实蛙病毒感染能导致大鲵黏液和血清蛋白图谱发生变化, 也为深入探寻两栖类抗病毒相关的蛋白生物标记提供了有价值的信息。  相似文献   

16.
Nilima Kumari  Vinay Sharma 《Protoplasma》2010,245(1-4):125-132
The activity and subunit amounts of V-ATPase and V-PPase in various plants of Butea monosperma Taub. (Fabaceae) (ver. Dhak; Palas) growing as a natural inhabitant in varying stress conditions in southeast Rajasthan were studied. Western blot analysis followed by immunological quantification of V-ATPase subunits using specific polyclonal antibodies showed that the subunits A, B, D, E, and c are clearly detectable in all plants, with A, B, and c appearing as intense bands. The other subunits of V-ATPase, viz., C, a, and d, were also detected in majority of the plants. Various subunits exhibited variations in their protein amount in different plants. Besides, a few other clear bands were also detected. Of these, the 30- and 29-kD bands may possibly be Di and Ei. Furthermore, a clear band of V-PPase corresponding to 67–70 kD was also detected. A comparison of the V-ATPase and V-PPase activity revealed that Butea plants in the upper region of the study site showed 70% and 39% higher activity, respectively. Furthermore, the immunological quantification showed that the V-ATPase and V-PPase protein amounts are also higher in the upper Butea plants which have drought stress and, moreover, are also exposed to stronger light intensities for relatively longer duration.  相似文献   

17.
18.
以抗人着丝粒蛋白B的单抗和多抗以及抗CHO细胞动粒蛋白的单抗对源真核生物(archezoa)蓝氏贾第虫(Giardialamblia)和分别代表原细菌的3个枝的3种原细菌(Halobacterium、Thermoplasma、Sulfosphaerellus)作了免疫电泳检查,并以小眼虫和大肠杆菌作为对照。结果表明,3种原细菌都呈阳性反应;而且贾第虫的反应情况显然比纤毛虫、眼虫、典型涡鞭毛虫、尖尾虫(Oxyrrhis)等单细胞后真核生物的更接近于原细菌的情况。这不仅从一个新的方面为真核细胞起源于古代的原细菌的学说提供了新的佐证,而且从着丝粒/动粒蛋白方面证明了源真核生物贾第虫的原始性。本工作还为认识着丝粒蛋白B和动粒蛋白的起源和演化提供了线索。  相似文献   

19.
To investigate wheat (Triticum aestivumL.) responses to Al stress, KCl- and SDS-extracted glycoproteins (covalently bound proteins isolated by cell-wall digestion by cellulysine–pectolase mixture) and extensins (hydroxyproline-containing glycoproteins, HRGPs) were isolated from cell-wall preparations purified from the root apices of Al-sensitive and Al-tolerant near-isogenic lines ES8 and ET8. Under Al stress conditions, two lines differed mostly in their extensins. The untreated plants of two lines were low in covalently bound extensins, although the content of this protein fraction in ES8 was higher than in ET8. When the seedlings were treated with Al, the extensin content increased in both wheat lines and especially in the Al-tolerant ET8 plants. Using two-dimensional electrophoresis, the authors demonstrated the accumulation of polypeptides with mol wts of 22.2 kD (pI 5.5–6.5), 24.5 kD (pI 5.8–6.0), and 33.1 kD (pI 5.25) and polypeptides of 22.2 kD (pI 6.8–7.6) and 40.5 kD (pI 7.6) in the extensin fraction from the cell walls of the Al-sensitive plants. The regulation of cell responses to Al stress may involve extensin expression.  相似文献   

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