脑源神经营养因子基因转染神经断端促进切断坐骨神经再生

为了研究体内表达的脑源神经营养因子（Ｂｒａｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄＮｅｕｒｏｔｒｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ,ＢＤＮＦ）对脊髓运动神经元存活及切断神经再生的作用,我们将人ＢＤＮＦｃＤＮＡ克隆到真核表达载体ｐＣＢ６中,使ＢＤＮＦ基因在ＣＭＶ启动子控制下表达。在雏鸡出生后３小时内及第二天直接将ｐＣＢ－ＢＤＮＦｃＤＮＡ·ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ混合物注射到坐骨神经预切断位点附近肌肉内。第二天切断坐骨神经,神经切断１０天后进行实验检测,观察到,ＢＤＮＦｃＤＮＡ转染阻止了切断神经一侧的腰脊髓内（Ｌ４－Ｌ６）运动神经元的大量死亡。并显著的促进了切断坐骨神经的再生。这些结果表明直接注射含ＢＤＮＦｃＤＮＡ的质粒对损伤的神经进行基因治疗,具有良好的前景;ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导重组质粒进行基因转染是导入外源基因到体内的一个可行方法。     

人脑源性神经营养因子cDNA在COS7细胞中的表达及活性研究

本文从质粒Ｍ１３ｍｐ１８－ｈＢＤＮＦ中酶切回收人脑源性神经营养因子（ｈＢＤＮＦ）全长基因,构建真核表达载体ｐＣＭＶ４－ｈＢＤＮＦ。利用脂质体的方法转染ＣＯＳ７细胞,对转染后的ＣＯＳ７细胞提取ＲＮＡ进行狭缝杂交分析和免疫细胞化学反应,分别从转录及翻译水平上检测ＢＤＮＦ基因在ＣＯＳ７细胞中的表达。实验还证实在ＣＯＳ７细胞中表达的ｈＢＤＮＦ蛋白可分泌至胞外并可促进中脑黑质细胞的发育和生长,具有良好的生物学活性。     

人脑源性神经营养因子cDNA在COS7细胞中的表达及活性…

本文从质粒Ｍ１３ｍｐ１８－ｈＢＤＮＦ中酶切回收入及源性神经营养因子（ｈＢＤＮＦ）全长基因,构建真核表达载体ｐＣＭＶ４－ｈＢＤＮＦ。利用脂质体的方法转染ＣＯＳ７细胞,对转染后的ＣＯＳ７细胞提取ＲＮＡ进行狭缝杂交分析和免疫细胞化学反应,分别从转录及翻译水平上检测ＢＤＮＦ基因在ＣＯＳ７细胞中的表达。实验还证实在ＣＯＳ７细胞中表达的ｈＢＤＦ蛋白可分泌至胞外并可促进中脑黑质细胞的发育和生长,具有良好的生物学     

胶质细胞源性神经营养因子GDNF和Neurturin的新受体: TrnR2

胶质细胞源性神经营养因子ＧＤＮＦ和Ｎｅｕｒｔｕｒｉｎ的新受体：ＴｒｎＲ２最近,Ｎｅｕｒｔｕｒｉｎ（ＮＴＮ）———一种与胶质细胞源性神经营养因子（ＧＤＮＦ）相关的神经营养因子被发现,于是产生了一个由ＧＤＮＦ和ＮＴＮ所组成的转化生长因子（ＴＧＦ）β相关...     

胶质细胞源神经营养因子

胶质细胞源神经营养因子陈哲宇何成王成海（第二军医大学神经生物教研室,上海２００４３３）关键词胶质细胞源神经营养因子多巴胺能神经元运动神经元神经营养因子是指能够促进神经细胞存活、生长和分化的一类蛋白质。胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ）,因其最初从大鼠...     

人脑源性神经营养因子基因的克隆及在大肠杆菌中表达

人脑源性神经营养因子基因的克隆及在大肠杆菌中表达何晓龙,路长林,王成海（第二军医大学神经生物学教研室,上海２００４３３）关键词神经营养因子;基因克隆脑源性神经营养因子（ｂｒａｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｒｏｔｉｃ…ｉ。血。ｔｏｒ,ＢＤ贾助是Ｂａｄｅ等人...     

小鼠胶源神经营养因子基因的克隆及其性质研究

本文从成年小鼠脑基因库中克隆了两种独特的胶源神经营养因子转录产物。ＧＤＮＦ－β除了在开放阅读框架区有７８ｂｐ的缺失外,其余与ＧＤＮＦ－α相同。由小鼠ＧＤＮＦ－α基因推导得的氨基酸顺序与大鼠和人的氨基酸顺序具有高度同源性。对小鼠不同组织的反转录ＰＣＲ实验表明在这些组织中广泛存在这两种形式的ＧＤＮＦ。     

胶质细胞衍生的神经营养因子与神经退行性性疾病

胶质细胞衍生的神经营养因子（ＧＤＮＦ）是多巴胺神经元及运动神经元的营养因子,对由于损伤引起的多巴胺神经元及运动神经元的变性有保护及修复作用,因而可能用于临床治疗ＰＤ和ＡＬＳ这类神经退行性疾病。     

胶质细胞源神经营养因子研究进展

叙述了新近纯化的胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ）的生物功能及其在鼠胚胎的分布,着重介绍了该因子对损伤的多巴胺能神经元及运动神经元促进存活,修复损伤及再生的活性。     

GDNF及BDNF对受损运动神经元的长期修复

为了研究胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ） 及脑源神经营养因子（ＢＤＮＦ） 对切断轴突的新生运动神经元的长期维持存活及促进神经再生的作用, 我们选用出生时单侧切断坐骨神经的雏鸡模型, 用裸ＤＮＡ 转染方法, 在损伤神经附近的肌肉中转染ＧＤＮＦ ｃＤＮＡ 和ＢＤＮＦ ｃＤＮＡ 的真核表达载体,观察在体表达的神经营养因子对损伤的修复作用。结果显示,在体表达的ＧＤＮＦ 在８ 周内能使切断坐骨神经的腰脊髓运动神经元近９０ ％ 维持存活。切断的坐骨神经从断端向远体端再生,最长再生达９ ．５ｍ ｍ 。表达两个因子比单独表达ＧＤＮＦ 对运动神经元的存活无显著性差异。而两个因子协同作用对坐骨神经的再生更为有效,坐骨神经再生最长的可达１５ ．４ｍ ｍ 。     

GABA减缓缺氧引起的神经营养素mRNA表达量的变化

γ－氨基丁酸是中枢神经系统中的一种内源性抑制递质。近年已有实验证据揭示ＧＡＢＡ具有抵抗中枢神经元缺氧或缺血损伤的作用,但其机制尚不清楚。脑源性神经营养因子ＢＤＮＦ,神经生长因子ＮＧＦ和神经营养素－３是同一家族的成员,它们在海马脑区均有表达。为研究ＧＡＢＡ抗缺氧作用的机制,我们以培养的海马ＣＡ１神经元为材料,采用原位杂交的方法检测了缺氧后ＢＤＮＦｍＲＮＡ,ＮＧＦｍＲＮＡ和ＮＴ－３ｍＲＮＡ表达量的变化以及ＧＡＢＡ对这种变化的影响。结果显示,缺氧使ＮＧＦｍＲＮＡ和ＢＤＮＦｍＲＮＡ的表达量迅速上调且前者的变化极为剧烈,而ＮＴ－３ｍＲＮＡ的表达量显著下降;用２０μＭ的ＧＡＢＡ处理细胞后,上述缺氧引起的神经营养因子ｍＲＮＡ表达量的上升或下降幅度均被减缓,其中对ＮＧＦｍＲＮＡ表达量变化的影响最为显著。这些结果表明,ＧＡＢＡ具有稳定缺氧后ＢＤＮＦｍＲＮＡ,ＮＧＦｍＲＮＡ和ＮＴ－３ｍＲＮＡ表达水平的作用。推测这种作用与ＧＡＢＡ增加氯电导,维持钙稳态以及提高神经元的抗缺氧能力的效应有一定联系     

马来熊脑源性神经营养因子基因编码区的克隆与序列分析

参照人脑源性神经神经生长因子（ＢＤＮＦ）基因序列设计出一对引物，利用聚合酶链式反应，首次从马来熊基因组ＤＮＡ中扩增和克隆到ＢＤＮＦ基因的编码区。对该基因所作的序列分析表明，马来熊和人ＢＤＮＦ基因编码区的核苷酸序列同源性为９４％，而与大熊猫ＢＤＮＦ基因的核苷酸序列同源性高达９９％。在推导的多肽序列中，除在前导肽区有两个氨基酸的差异外，马来熊ＢＤＮＦ的成熟区与人和其他已报道的哺乳动物ＢＤＮＦ成熟区的氨     

发现一种新的神经营养因子

以往人们只知道神经生长因子(NGF)可刺激神经发育和修复。在过去的几年中,至少有六种以上的神经营养因子被发现,如脑源性神经营养因子(BDNF),纤毛神经营养因子(CNTF)用胰岛素样生长因子(IGF)等。最近美国Synergen生物工程公司的研究人员发现了一种被称为胶质细胞神经营养因子(glial cell—de-     

神经营养因子GDNF编码顺序的克隆及表达产物的纯化

根据基因库中的顺序,设计了胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ）基因的ＰＣＲ引物,以此从人基因组ＤＮＡ中扩增并克隆了ＧＤＮＦ的编码序列,经ＤＮＡ测序确认后,该片段克隆到表达质粒ｐＥＴ－３ａ中,转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）．培养的重组菌经ＩＰＴＧ诱导,在Ｔ７启动子调控下表达出ｈＧＤＮＦ蛋白．经电泳分析表明ＧＤＮＦ主要存在于细菌包涵体中．从培养菌中制备包涵体,经充分洗涤,溶解于含８ｍｏｌ／Ｌ尿素的变性缓冲液中．经ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析分离,梯度洗脱,以１５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检查含ＧＤＮＦ的部分．将含单体ＧＤＮＦ部分进行复性,再次用ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子柱分离同源二体ＧＤＮＦ．最后经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ制备电泳纯化,纯度大于９５％．经Ｎ端测序表明序列正确．经测定,每升培养菌可得约１０ｍｇ纯化的ＧＤＮＦ．     

神经营养因子在阿尔茨海默病中的作用及应用现状

神经营养因子是一类机体内分泌的,为神经元发育、生长及分化所必需的蛋白质。在整个生命过程中,神经营养因子对中枢及周围神经系统中神经元功能特性的表达、维持突触的生长及可塑性、防止神经元受损及凋亡及改善已受损神经元修复均具有重要的调控作用。结合神经生长因子与脑源性神经生长因子研究现状,主要介绍神经生长因子与脑源性神经生长因子在阿尔茨海默病中的作用及机理研究进展,总结神经营养因子在阿尔茨海默病临床应用的现状,最后分析预防和治疗阿尔茨海默病新手段的研究方向。     

神经生长因子家族及其受体研究进展

过去几年在神经营养因子、受体和神经元细胞程序性死亡的研究领域中取得了几项引人注目的进展：（１）神经生长因子（ＮＧＦ）基因家族的其他一些成员包括脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、神经营养素－３（ＮＴ－３）、神经营养素－４（ＮＴ－４）、神经营养素－５（ＮＴ－５）的发现;（２）神经生长因子三维结构及功能和进化之关系的阐明;（３）定性了两种神经生长因子受体Ｐ７５＾ＮＧＦＲ和原癌基因ｐ１４０＾ｔｒｋＡ以及相关     

脑源性神经营养因子与抑郁症的研究进展

脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)是人体内含量最多的神经营养因子,在神经系统的发育和功能维持中起至关重要的作用.研究表明,抗抑郁剂通过提高BDNF表达来促进神经细胞的生存,增加突触可塑性及神经发生.     

脑源性神经营养因子及其临床研究进展

脑源性神经营养因子 (BDNF)是继神经生长因子 (NGF)后发现的第二个神经营养因子 ,在神经系统的发育、功能维持和神经元群的成形性上起重要作用。国内外正积极开发 BDNF用于神经损伤的治疗。本文就 BDNF的结构、功能、信号传导以及临床研究等作一综述     

脑源性神经营养因子前体蛋白生物学效应研究进展

神经营养因子是一类分泌性多肽类生长因子,可促进中枢和外周神经元的生长、存活以及分化,但其前体分子却具有不同的生物学活性,也有着不同的受体以及细胞内信号通路。本文对近年来关于脑源性神经营养因子前体蛋白的研究予以综述,着重讨论其在神经损伤与情绪障碍和神经退行性变疾病模型中的作用。     

人睫状神经营养因子突变体基因克隆及高效表达

为了提高人睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）的生物学活性,用ＰＣＲ方法获取Ｎ端缺失１４个氨基酸的ＣＮＴＦ基因片段,经酶切鉴定、核酸测序证实突变体的核苷酸序列,将其重组至表达质粒ｐＢＶ２２０,构建了ＣＮＴＦ突变体表达载体ｐＢＶ－ＣＮＴＦΔ．用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其表达水平,鸡胚背根节无血清培养法检测表达蛋白的生物学活性．结果表明,ｐＢＶ－ＣＮＴＦΔ能表达生物学活性高于天然ＣＮＴＦ的约２６ｋＤ蛋白质,表达水平达３０％．为今后通过基因工程方法获得ＣＮＴＦ突变体,从而制备高效的ＣＮＴＦ制剂创造了条件．