一种简易的制备和纯化质粒DNA的方法

近年来随着遗传工程的飞速发展,DNA重组技术被广泛应用,许多实验室在制备一定纯度、产量较高、方法简便的质粒DNA方面作了许多工作。国外大多数实验室普遍采用CsCl等密度梯度超离心法,但国内受仪器限制,应用较少。我们比较了PEG沉淀质粒DNA, 羟基磷灰石法制备质粒DNA,快速抽提质粒DNA,以及M.A.K柱制备质粒DNA等方法,它们都各有利弊。本实验室对L.P.Elwell的实验条件稍作改进,温和地制备清亮裂解液并抽提质粒DNA,然后应用Sephacryl S-1000作凝胶过滤,获得了纯度高、产量大,无染色体DNA     

创新霉素产生菌中质粒的研究——Ⅳ.AJP1质粒的物理图谱

用MAK法提纯创新霉素产生菌——济南游动放线菌中天然质粒AJP1,并对其进行了酶解分析。实验表明,限制性内切酶BamHⅠ、BglⅡ、HindⅢ、KpnⅠ、SstⅠ和HpaⅠ不能降解AJP1,XhoⅠ、PsiⅠ、XbaⅠ、EcoRⅠ、PvuⅠ、SinaⅠ和SalⅠ在AJP1上分别有1、1、1、2、3、5,和7个切点。应用双酶解等方法进行酶切位点的定位,绘制了共有20个酶切位点的AJP1物理图谱。     

adr亚型乙型肝炎病毒DNA的酶切图谱分析

<正> 本文报道以pAT153质粒为载体克隆的adr亚型乙型肝炎病毒(HBV)全基因的限制性内切酶图谱。重组质粒已命名为pHBV-NCl。重组质粒的提取和酶解采用常规方法。限制性内切酶为Bio-Labs公司产品。用Sepharcry S-1000纯化得到的质粒,经电泳鉴定都是完整的超螺旋DNA。经过鉴定其BamHⅠ、XhoⅠ、XbaⅠ、SstⅡ、SphⅠ、BglⅠ、BglⅡ、BstEⅡ、AceⅠ、AvaⅠ、HincⅡ、HpaⅠ等12种酶的21个切口已被定位。其中XhoⅠ、XbaⅠ、SstⅡ、     

神经生长因子家族及其受体研究进展

过去几年在神经营养因子、受体和神经元细胞程序性死亡的研究领域中取得了几项引人注目的进展：（１）神经生长因子（ＮＧＦ）基因家族的其他一些成员包括脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、神经营养素－３（ＮＴ－３）、神经营养素－４（ＮＴ－４）、神经营养素－５（ＮＴ－５）的发现;（２）神经生长因子三维结构及功能和进化之关系的阐明;（３）定性了两种神经生长因子受体Ｐ７５＾ＮＧＦＲ和原癌基因ｐ１４０＾ｔｒｋＡ以及相关     

Adr亚型乙型肝炎病毒核心抗原基因的全顺序分析

采用定点克隆与随机克隆相结合的实验设计,用α~(35)S-dATP标记,以末端终止法测定了adr亚型乙型肝炎病毒DNA核心抗原基因的全顺序,包括终止密码子在内基因全长552核苷酸,编码由183氨基酸组成的多肽,计算分子量21000dlt。与日本及上海等实验室报道的adr亚型HBcAg基因比较,核苷酸点突变1.3—1.8％,由点突变导致的错义氨基酸突变有一处,占全部编码氨基酸的0.5％。与adw及ayw亚型比较,核苷酸点突变占全部核苷酸的9.8—10.9％,导致的错义突变占全部编码氨基酸的3.3—4.4％,并对eAg基因的定位进行了讨论。     

超声波辐射对大分子核糖核酸的影响

应用固定条件的超声波处理大鼠肝中的大分子RNA,发现其粘度随超声波处理时同的增长而降低。最低可达到正常粘度的50%左右。经超声波处理后的RNA的沉降系数也降低,由正常的26s及23s降低至12.5s。光学性质,RNA与甲醛的反应量等均未发现有明显的变化。根据试验结果说明,大分子RNA经过超声波处理,分子发生降解,估计分子量由原来的1.3×10~6及1.1×10~6下降至0.34×10~6。降解中并未发现有小分子RNA及寡核苷酸出现。另外大分子RNA虽经降解,但分子内部的氢键并没有明显的改变。     

懒猴高重复顺序DNA的核苷酸顺序分析及其与类α-DNA顺序的比较

为确知懒猴高重复顺序与灵长类类α顺序间的相互关系,我们将懒猴DNA经EcoRI酶切所得到的高重复顺序DNA的最小片段重组到质粒pUC~(12)上,经转化、筛选、鉴定得到含有懒猴高重复顺序片段的克隆,命名为pLS(EcoR Ⅰ)-1,测定其全部核苷酸顺序为641bp,发现该顺序有与类α顺序的相似性,但变异性较大,我们对此进行了讨论。     

乙型肝炎病毒adr亚型NC-1毒株表面抗原基因的顺序测定与结构研究

用内引物法自pHBVNC-1质粒DNA经Sau3A1降解的1.3Kb片段中,快速、连续测定了HBV adr NC-1表面抗原基因全顺序,与其它三株adr亚型S基因比较,顺序同源性为99％,与adw及ayw亚型比较,同源性为94％。不同亚型间的错义突变比同一亚型不同毒株间的错义突变多。比较11株adr亚型、2抹adw亚型与2株ayw亚型的S基因全顺序,发现在第47,110,113,126,160位的密码子在r亚型中有同源性,在w亚型中也有同源性,所以是w/r亚型决定簇的候选部位。第46,68,134,159,168位的密码子在d亚型中有同源性,而在y亚型中也有同源性,所以是d/y亚型抗原决定簇的候选部位。