| 神经营养因子GDNF编码顺序的克隆及表达产物的纯化 |
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| 引用本文： | 陈燕,张瑛,李金照,邓巍,夏另朝,邱蓉.神经营养因子GDNF编码顺序的克隆及表达产物的纯化[J].中国生物化学与分子生物学报,1998,14(4):382-385. |
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| 作者姓名： | 陈燕 张瑛 李金照 邓巍 夏另朝 邱蓉 |
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| 作者单位： | 中国科学院生物物理研究所，中国科学院视觉信息加工开放实验室 |
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| 摘 要： | 根据基因库中的顺序，设计了胶质细胞源神经营养因子（ＧＤＮＦ）基因的ＰＣＲ引物，以此从人基因组ＤＮＡ中扩增并克隆了ＧＤＮＦ的编码序列，经ＤＮＡ测序确认后，该片段克隆到表达质粒ｐＥＴ－３ａ中，转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）．培养的重组菌经ＩＰＴＧ诱导，在Ｔ７启动子调控下表达出ｈＧＤＮＦ蛋白．经电泳分析表明ＧＤＮＦ主要存在于细菌包涵体中．从培养菌中制备包涵体，经充分洗涤，溶解于含８ｍｏｌ／Ｌ尿素的变性缓冲液中．经ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱层析分离，梯度洗脱，以１５％ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检查含ＧＤＮＦ的部分．将含单体ＧＤＮＦ部分进行复性，再次用ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子柱分离同源二体ＧＤＮＦ．最后经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ制备电泳纯化，纯度大于９５％．经Ｎ端测序表明序列正确．经测定，每升培养菌可得约１０ｍｇ纯化的ＧＤＮＦ．
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| 关 键 词： | GDNF编码顺序 PCR方法 GDNF的表达 rhGDNF的纯化 |
| 收稿时间： | 1998-08-20 |
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