PCR检测血清HBV DNA

本文利用ＨＢＶ ＤＮＡ基因组ｐｒｅＣ和Ｃ区的一套引物,以ＰＣＲ法检测了２６例健康正常人血清和９５例免疫标志各异、临床症状不同的乙肝或可疑乙肝患者的血清,前者无１例检出ＨＢＶ ＤＮＡ,后者共检出的６６例血 清存在ＨＢＶ ＤＮＡ。该方法特异性强,适用于检测任一亚型的ＨＢＶ ＤＮＡ,一轮ＰＣＲ最低可检出０．１ｐｇ的ＨＢＶ ＤＮＡ。     

乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的同步PCR扩增

介绍了一种从人血清中同步扩增和检测ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＣＶ－ＲＮＡ的方法。ＨＣＶ－ＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ,这种ｃＤＮＡ和从ＨＢＶ中抽提出的ＤＮＡ一起,用根据ＨＢＶ、ＨＣＶ保守区序列设计的特异引物进行同步ＰＣＲ扩增,这种方法对于检测ＨＢＶ和ＨＣＶ重复感染很有用处     

HBV─C基因探针的制备及应用

应用ＰＣＲ技术扩增出ＨＢＶＤＮＡＣ基因片段并与ｐＡＴ１５３质粒重组,转化到Ｅ．ｃｏｌｉＲＲＩ中,经体内扩增,提纯,用光生物素标记,制备了Ｃ基因的重组质粒探针。该探针检测灵敏度在Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹中达１ｐｇ,在点印迹中为５ｐｇ。用此探针以Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹方式配合ＰＣＲ技术检测乙肝病人血清中的ＨＢＶＤＮＡ,在５３例ＰＣＲ产物电泳检测阴性的样品中,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交又检出１８例阳性。     

HBV—C基因探针的制备及应用

应用ＰＣＲ技术扩增出ＨＢＶ ＤＮＡ Ｃ基因片段并与ｐＡＴ１５３质粒重组,转化到Ｅ．ｃｏｌｉ ＲＲＩ中,经体内扩增,提纯,用光生物系标记,制备了Ｃ基因的重组质粒探针。该探检测灵敏度在Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹中达１ｐｇ,在点印迹中为５ｐｇ。用此探针以Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹方式配合ＰＣＲ技术检测乙肝病人血清中的ＨＢＶ ＤＮＡ,在５３例ＰＣＲ产物电泳检测阴性的样品中,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交又检出１８例阳性。     

国产HBVDNAPCR试剂的质量研究

首次利用中国药品生物制品检定所建立的一套国家参考品对国内几个厂家的ＰＣＲ试剂进行检测,检测过程中发现这几家国产ＰＣＲ试剂都是利用原血清直接扩增ＨＢＶＤＮＡ,比较快速,且灵敏度较高,但也存在一些问题需要更深入的研究。同时对这几家ＰＣＲ试剂的临床应用价值做了讨论,并讨论了应注意的几个问题     

HBV－DNA的PCR二步法扩增及其快速检测

ＨＢＶ－ＤＮＡ的ＰＣＲ二步法扩增及其快速检测方勤,吴云涛,蔡宜权（中国科学院武汉病毒研究所,武汉４３００７１）关键词ＨＢＶ－ＤＮＡ,二步温控ＰＣＲ,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,生物素寡聚核苷酸杂交乙型肝炎是危害人类健康的主要疾病之一,其病原常用的检测方法多...     

HCV RNA的检测方法简介

本文讨论了检测丙型肝炎病毒核糖核酸（ＨＣＶＲＮＡ）的样本来源和处理,引物的设计,合成和选择等问题;重点介绍了蛋白酶Ｋ消化法,聚乙二醇沉淀法,异硫氰酸胍一步法,硅凝胶提取法和直接捕获法提取ＨＣＶ　ＲＮＡ的５种方法,以及一步ＰＣＲ法,常规ＲＴ－巢式ＰＣＲ,直接ＲＴ－巢式ＰＣＲ,化学修饰的ＲＴ－巢式ＰＣＲ,联合ＰＣＲ,双温ＰＣＲ和定量竞争性ＰＣＲ等７种ＰＣＲ方法检测ＨＣＶ　ＲＮＡ,用ＰＣＲ检测ＨＣＶ　ＲＮＡ方法的标准化以及检测ＨＣＶＲＮＡ具有非常重要的意义。本文还介绍了一种新型的定量方法－ｂＤＮＡ信号放大技术检测ＨｃＶＲＮＡ。     

用套式多聚酶链反应技术监测乙型肝炎病毒的母婴垂直传播

用套式多聚酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）技术对１６９对ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测。１０３对ＨＢｓＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为７２．８％和３３．０％;６６对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为８６．４％和４３．９％。对５５例ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性产妇产后的初乳进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,结果ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率为３６．４％。结果表明ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率较ＨＢｓＡｇ单阳性的孕妇及其新生儿要高,其初乳中ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率也高。还对１０５例注射了乙肝疫苗及高价乙肝特异性免疫球蛋白的６月龄婴儿的外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,结果有２３例阳性。     

用套多聚酶链反应技术监测乙型肝炎病毒的母婴垂直传播

用套式多聚酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）技术对１６９对ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,１０３对ＨＢｓＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周务中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为７２．８％和３３．０％;６６对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为８６．４％和４３．９％,对５５例ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性产妇产后     

多聚酶链反应技术及其在乙型肝炎病毒研究中的应用进展

随着多聚酶链反应技术的广泛应用,本文据ＰＣＲ在乙型肝炎病毒研究中的一些具体特点,对其在技术方面及其应用所得得的进展作一综述,重点包括ＰＣＲ技术在ＨＢＶ研究中的一些实际应用问题,以ＰＣＲ技术对ＨＢＶ所得到的新认识,ＨＢＶ感染性评价,ＨＢＶ基因分型和变异株的研究,ＨＢＶ的复制和表达机理,传播方式,及与肝细胞肝癌关系的有关进展。     

鼻咽癌Epstein－Barr病毒受体（EBVR／CR＿2）基因的病毒结合区的序列测定

Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒（ＥＢＶ）进入鼻咽上皮细胞的途径,是人们研究ＥＢＶ与鼻咽癌（ＮＰＣ）的病因关系时所必须回答的一个问题。用抗ＥＢＶ受体（ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２）单抗检测上皮细胞中该受体的表达已有报道,但对上皮细胞中ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２的基因结构仍需研究。我们采用ＰＣＲ扩增和不对称ＰＣＲ直接测序法,首次检测了１０例ＮＰＣ及３例正常人胚鼻咽上皮（Ｈｕｍａｎｅｍｂｒｙｏｎｉｃｎａｓｏｐａｒｙｎｇｅａｌｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＨＥＮＥ）组织样本中ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２的ＥＢＶ结合区的编码序列。这一片段的ＤＮＡ序列测定结果显示,人ＮＰＣ细胞和正常ＨＥＮＥ细胞的ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２的ＥＢＶ结合区的编码序列,与正常人Ｂ淋巴细胞的ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２的相应序列完全相同,提示ＥＢＶ感染鼻咽上皮细胞可能与ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２基因的ＥＢＶ结合区结构改变无直接关系。     

中国丙型肝炎病毒基因型研究新进展

为了进一步了解中国丙型肝炎病毒基因型感染状态 ,我们建立了 5′ ＮＣＲＡＢＣ程序酶切分型法 :首先采用ＲＴＰＣＲ技术 5′ ＮＣＲ扩增ＨＣＶＲＮＡ阳性样品中的ｃＤＮＡ ,然后按照ＡＢＣ程序进行分型 ,Ａ应用ＢＨＨ(ＢｓｒＢⅠ ,ＨａｅⅡ ,ＨｉｎｆⅠ )复合内切酶消化 5′ ＮＣＲｃＤＮＡ ,Ｂ应用ＢｓｔＵⅠ消化 ,Ｃ应用ＨａｅⅢ消化 ,电泳检测片段大小。应用该方法对临床采集的ＨＣＶＲＮＡ阳性血清进行分型 ,在国内首次发...     

乙型肝炎免疫指标全阴的原发性肝细胞癌患者体内HBV—DNA的检测…

本文以聚合酶链式反应（ＰＣＲ）对３５例乙型肝炎免疫指标（ＨＢＶｍ）全阴性的原发性肝细胞癌（ＰＨＣ）患者血清,外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）肝活检标本进行乙型肝炎病毒ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,其检出率分别为３４．２９％,６０．００％,６８．５７％,说明一部分血清ＨＢＶｍ全阴性的ＰＨＣ患者血清并非无传染性,ＥＬＳＩＡ法具有一定局限性。ＰＢＭＣ内有相当的ＨＢＶ－ＤＮＡ存在,这对于研究ＰＨＣ患者体内ＨＢＶ的存在情况     

乙型肝炎表面抗原凝难判定血清的研究

用中国药品生物品检定所检定合格的国内外ＨＢｓＡｇＥＩＡ试剂及ＡＢＢＯＴＴ抗－ＨＢｓ、抗－ＨＢｃＥＩＡ试剂,对所收集的１３份ＨＢｓＡｇ疑难判定血清进行检测,并用ＰＣＲ方法检测血清中ＨＢＶＤＮＡ,结果显示国内外ＨＢｓＡｇ试剂对部分ＨＢＶＤＮＡ阳性样品的检出率差异较大,提示这些样品可能为Ｓ基因突变株或ＨＢｓＡｇ含量较低,因此,ＨＢｓＡｇＥＩＡ试剂的敏感度仍有待进一步提高,并应进一步研制检测Ｓ基因突变株的     

HBV套式PCR技术的建立及HBcAb血清的检测

本文实验设计了套式ＰＣＲ引物进行ＨＢＶＤＮＡ诊断。外引物限定ＨＢＶＣ基因的一个６１３ｂｐ片段,内引物限定其内－５０７ｂｐ的片段,扩增后产物被限制性内切酶图谱证明。该技术的特异性强,重复性好,灵敏性达到１－１０ｆｇ,对ＨＢＶ血清可做出明确诊断。应用这项技术,对４２例ＨＢｃＡｂ血清进行了检测,实验表明仅ＨＢｃＡｂ阳性血清同带ＨＢｓＡｇ的ＨＢｃＡｂ阳性血清一样,体内持续进行着大量ＨＢＶＤＡＮ复制。     

乙型肝炎患者HBV复制水平的定量PCR研究

本文采用定量ＰＣＲ方法观察了慢性乙型肝炎患者ＨＢＶ－ＤＮＡ的复制水平。结果表明在ＨＢｅＡｇ阳性患者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率和水平显著高于ＨＢｅＡｇ阴性患者（Ｐ＜０．０１）;血清ＨＢＶ－ＤＮＡ水平的高低与ＡＬＴ异常情况未发现有相关性。     

复制型HBV转基因小鼠的遗传与繁育研究

本文采用类似系祖建系的方法,对复制型ＨＢＶ转基因小鼠模型的１７、２１、２５三个系列进行了繁育,通过ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分子杂交的方法,检测三个系列小鼠尾组织和血清的ＤＮＡ样品,以确定ＨＢＶ基因的整合和复制情况。结果表明,ＨＢＶ基因已稳定地遗传至第五代（Ｆ５）,且各世代小鼠血清中都存在ＨＢＶＤＮＡ,此外,整合阳性小鼠的血清中能测出ＨＢＶＤＮＡ的比率很高,Ｆ１代为９４．４４％（１０２／１０８）,Ｆ２、Ｆ３代为９５．３１％（６１／６４）,故在繁育中可以通过测血清中的ＨＢＶＤＮＡ来确定小鼠是否整合。     

献血员巨细胞病毒感染的研究

用ＰＣＲ法和ＤＮＡ杂交法检测同一献血员的白细胞及血清中的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ,并用ＥＬＩＳＡ法检测血清中的ＨＣＭＶ－ＩｇＭ、ＩｇＧ（测四个不度）,连续两年共检测白细胞和血清样本各２００人份。ＰＣＲ法检测白细胞中的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率分别为６３％和７０％,ＤＮＡ杂交法检测的阳性率为４２％和５０％。ＰＣＲ法检测血清中的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ的阳性率为４９％和５３％,ＤＮＡ杂交法检测的阳性率为３３％和３９％。Ｈ     

应用循环逆转录PCR技术检测丙型肝炎病毒RNA

循环逆转录（ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ,ＣＲＴ）是线性增长逆转录ｃＤＮＡ产量的一种新技术。为了将该技术用于检测ＨＣＶ ＲＮＡ,通过改变ＣＲＴ的循环次数,结合竞争ＰＣＲ,作出标准曲线。采用１６次ＣＲＴ加３４次循环ＰＣＲ检测了１３６例ＨＣＶ ＥＬＩＳＡ阳性、５４例ＨＣＶ ＥＬＩＳＡ阴性和１０８例临床可疑病人全血标本,并与逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）和巢式ＰＣＲ（     

血沉标本中人巨细胞病毒DNA的检出

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和地高辛标记探针（ｄｉｇ－ｐｒｏｂｅ）检测临床血沉标本中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ。结果表明,人群血标本中ＨＣＭＶ－ＤＮＡ携带率较高;ＰＣＲ技术较ｄｉｇ－ｐｒｏｂｅ更敏感、快速、简便,二者检出ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率分别为８３．３％和６０．３％;ＨＣＭＶ－ＤＮＡ检出率、ＨＣＭＶ－ＩｇＭ检出率与血沉值高低之间无相关性。