葡萄糖氧化酶免疫酶染色检测硝酸纤维膜印染的病毒抗原或抗体

<正>近十年来,由于引进了下列技术,包括聚丙烯酰胺凝胶电泳后免疫沉淀、等电聚焦及将样品转移到支持基质的印染技术,分析复杂抗原混合物和其抗体反应的能力显著地提高了。人们已综述了蛋白质印染的一般技术。研究了影响样品经电泳转移到硝酸纤维素(NC)膜上的许多条件。可用同位素或免疫酶方法检测蛋白质印迹。同位素方法很敏感,但较昂贵而配置有些问题,并且有效使用期短。由于同位素法有上述缺点,导致了免疫酶方法的建立。     

通用引物PCR分离登革病毒2型cDNA及其插入方向鉴定

逆转录后采用聚合酶链反应(RT/PCR)扩增登革病毒2型中国海南98株(DEN_2HN98)部分包膜糖蛋白(E)基因,PCR产物钝端插入pUC18质粒,获得重组质粒pDEⅡ305。用pUC/M13测序用通用引物,PCR方法又从pDEⅡ305扩增分离DEN_2 E cDNA片段。通过一侧通用引物和另一侧DEN_2 E特异引物配对,引导酶促DNA扩增反应,鉴定了pDEⅡ305中cDNA片段的插入方向,结果与序列分析一致。本文首次报道通用引物PCR方法的建立,实验结果表明该技术可用于pUC/M13系统中插入片段的分离及其方向鉴定。     

核酸杂交技术及其在登革病毒中的应用

<正>一、引言 核酸杂交技术是一种发展很快、应用极广的分子生物学方法。它利用核苷酸碱基互补配对的原理,通过一段已知特异性的核酸分子,标记上特定的示踪物质作为探针,在液相或固相中与待测标本中的特异性核酸反应,探针与标本核酸的互补单链经氢键作用而形成双链。然后,通过一定的程序显示杂交双链的存在、状态、大小或数量进行检测。故核酸杂交亦称分子杂交(moiecular hybridization)。     

通用引物PCR技术的应用概况

通用引物ＰＣＲ技术的应用概况陈火胜（中山医科大学微生物学教研室,广州５１００８９）ＵｎｉｖｅｒｓａｌＰｒｉｍｅｒＰＣＲＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ＡＧｅｎｅｒａｌＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ￥ＣｈｅｎＨｕｏｓｈｅｎｇ（ＳｕｎＹａｌｓ...     

用套式多聚酶链反应技术监测乙型肝炎病毒的母婴垂直传播

用套式多聚酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）技术对１６９对ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测。１０３对ＨＢｓＡｇ阳性孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为７２．８％和３３．０％;６６对ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为８６．４％和４３．９％。对５５例ＨＢｓＡｇ及ＨＢｓＡｇ／ＨＢｅＡｇ阳性产妇产后的初乳进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,结果ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率为３６．４％。结果表明ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ双阳性的孕妇及其新生儿外周血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率较ＨＢｓＡｇ单阳性的孕妇及其新生儿要高,其初乳中ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率也高。还对１０５例注射了乙肝疫苗及高价乙肝特异性免疫球蛋白的６月龄婴儿的外周血清进行了ＨＢＶ－ＤＮＡ检测,结果有２３例阳性。     

黄病毒的分子生物学——进展与展望

1984年国际病毒分类委员会(ICTV)建议将黄病毒属从披膜病毒科(Togaviridae)划出来成为新的病毒科——黄病毒科(Flaviviridae)。Westaway等给黄病毒科作了如下的定义:由一组有包膜的单链RNA病毒组成,直径为40—50nm。包膜通常含糖蛋白;RNA有传染性,RNA的分子量约为4×10~6Dalton,3′末端缺乏多聚腺苷酸(PolyA)。体外实验中,病毒基因组RNA可翻译出结构蛋白,无亚基因组(Subgenomic)mRNA合成。成熟病毒颗粒的形态发生位于改变了的内浆网小池(cisternae)中。黄病毒科目前仪由黄病毒属(Flavivirus)组成,黄病毒属大约包括70种病毒,其代     

应用DNA-RNA斑点杂交法检测登革病毒核酸

新近制备了大量纯化的pEH920 DNA,该质粒DNA插入了登革病毒2型核酸片段的互补DNA。以[a-~(32)P]dCTP按缺口转译法标记pEH 920 DNA作为探针,以感染病毒的蚊细胞c_6/36培养上清作标本,应用DNA-RNA斑点杂交法检测了登革病毒核酸。结果显示同位素标记探针(pEH 920)与登革病毒2型标本反应最强,具有一定的型特异性。但与其它血清型登革病毒也呈一定交叉反应。初步探讨了探针的敏感性,至少可检出TCID_(50)625的登革病毒2型核酸。     

病毒核酸和蛋白分析的原理

<正> 病毒是由核酸和蛋白质两种基本成份所构成的一类最简单的特殊生物。它们严格地寄生于细胞内,以基因复制的方式进行繁殖。因而又有“分子生物”或“寄生分子”之称。 病毒学作为一门相对独立学科的历史还不到40年,进展却比较迅速。这与现代分子生物学方法的运用是分不开的。由于核酸和蛋白是病毒的主要功能成份,所以,在病毒学研究中,对核酸和蛋白的分析显得特别重要。病毒学的各个研究领域都涉及病毒核酸和蛋白的分析。