中国丙型肝炎病毒基因型研究新进展

为了进一步了解中国丙型肝炎病毒基因型感染状态 ,我们建立了 5′ ＮＣＲＡＢＣ程序酶切分型法 :首先采用ＲＴＰＣＲ技术 5′ ＮＣＲ扩增ＨＣＶＲＮＡ阳性样品中的ｃＤＮＡ ,然后按照ＡＢＣ程序进行分型 ,Ａ应用ＢＨＨ(ＢｓｒＢⅠ ,ＨａｅⅡ ,ＨｉｎｆⅠ )复合内切酶消化 5′ ＮＣＲｃＤＮＡ ,Ｂ应用ＢｓｔＵⅠ消化 ,Ｃ应用ＨａｅⅢ消化 ,电泳检测片段大小。应用该方法对临床采集的ＨＣＶＲＮＡ阳性血清进行分型 ,在国内首次发...     

鸭克隆探针制备和应用研究

自从1980年Mason等报告了在北京鸭血清中检出鸭乙型肝炎病毒(DHBV)颗粒以来,国内外已有数篇文章报告DHBV分子生物学方面的研究,随着人乙型肝炎研究的进展,迫切需要建立乙型肝炎动物模型     

用RT-PCR验证抗-HCV C100和抗-HCV CP检测系统的特异性

本文检测了几种人群中HCV C100抗原的抗体(抗-C100)和HCV核心抗原的抗体(抗-CP)的阳性率。输血后NANB肝炎中抗体阳性率最高(抗-C100:58.7％;抗-CP:71.7％),其次为未知病因NANB肝炎(抗-C100:26.2％,抗-CP:38.5％)和血液病人(抗-C100:15.0％,抗-CP:31.7％);而急性散发性肝炎中的抗体阳性率较低(抗-C100:8.9％,抗-CP:15.5％)。成年人中二种抗体阳性率分别为1.8％和2.8％。在各科人群中抗-CP阳性率明显高于抗-C100,表明抗-CP是检测HCV感染的十分有用的指标。同时本文还用RT-PCR法验证了抗-C100和抗-CP检测系统的特异性,发现抗-CP和HCVRNA有良好的相符性,而抗-C100和HCVRNA的相符性较差,因此推测抗-CP检测系统比抗-C100检测系统有较高的特异性。     

光标生物素HBV-DNA探针及其临床应用

本文报告了应用生物素交联光敏补骨酯素(Bp,Biotin-Psoralen)标记HBV DNA探针的动力学研究和临床应用结果。表明化学合成Bp经366nm光照与DNA发生加成反应。能标记dsDNA,也能标记ssDNA。加热可使Bp-dsDNA变性,强碱则不能使Bp-dsDNA变性。临床DNA检测结果表明,应用Bp-HBV探针杂交,DNA检出率与HBeAg符合率达99.08％,与~(32)P-HBV符合率达98.8％,提示光标记Bp-HBV探针灵敏度接近同位素探针。     

PCR法检测血清HBV-S、HBV-C基因

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR),最早由美国Cetus公司Mullis等人发明的一项体外大量扩增目的基因的新方法,该法非常灵敏能使基因放大200多万倍。几年来,此技术已被广泛地应用于分子生物学、传染病和遗传性疾病的早期诊断。     

鸭和人乙型肝炎病毒DNA体外高效转录体系分子克隆的建立

分子生物学的发展主要在于其所必需技术的发展,体外放射标记出高比活的DNA分子探针,可提高核酸分子检测的敏感性。目前,国内使用的HBV DNA分子探针,均为缺刻转移(Nick Translation)方法标记,敏感性可检出1-2Pg,1984年Melton等报告了依DNA为横板在体外转录合成高比活的单链RNA探针(SSRNA-p)敏感10倍。