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细支气管肺泡细胞增生和细支气管肺泡细胞癌内生长因子和蛋白激酶C的表达 总被引:4,自引:0,他引:4
表皮生长因子(EGF)、转化生长因子-α(TGFα)、表皮生长因子受体(EGFR)和蛋白激酶C(PKC)与细胞生长、增殖分化调节和细胞癌变有密切关系。作者用免疫组织化学方法检测了细支气管肺泡细胞增生(BAH)和细支气管肺泡细胞癌(BAC)的EGF、TGFα、EGFR和PKC表达。结果表明:BAC中的EGF、TGFα阳性率和阳性强度以及EGFR、PKC阳性强度均明显高于BAH。BAH的重度不典型增生病例,其EGF、TGFα、EGFR和PKC均呈高表达。TGFα、EGFR和PKC三者在BAC和BAH中的表达存在明显相关性。提示:TGFα及其受体EGFR和PKC是细支气管肺泡细胞增生、恶性转化和肺泡癌细胞失控生长的重要因素。 相似文献
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hEGF和hTGF—αN结构域与C结构域的功能差异 总被引:4,自引:0,他引:4
用PCR的方法将人表皮生长因子和人转化生长因子-α(hTGF-α)的N结构域和C结构域互换,构造了两个嵌合分子E-TGF(EGF1-32-TGF-α34-50)和T-EGF(TGF-α1-33-EGF33-53)。野生型和嵌合分子基因在大肠杆菌phoA系统表达并纯化定量。各重组体的受体竞争结合活性大小为hEGF〉hTGF-α和E-TGF〉T0-EGF,它们的促细胞生长活性的大小为hTGF-α和E- 相似文献
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人α-肿瘤坏死因子基因的高效表达 总被引:2,自引:0,他引:2
用人工合成的α-肿瘤坏死因子(TNF-α)基因构建了五个不同的表达质粒,它们不同之处是SD序列与起始密码子ATG间距离(D)各异。计算机模拟计算出翻译起始区域(TIR)中二级结构的最小生成自由能,以(D)为6个核苷酸时最小(绝对值)。它的表达效率也最高,产物TNF-α可达菌体总蛋白的60%。密码子的选用对表达效率有很大的影响,故人工合成TNF-α基因(选用大肠杆菌偏爱的密码子)的表达效率高于sc- 相似文献
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报道了23碱基组成的TGFa反义寡聚核苷酸和对照寡聚核苷酸对人膀胱移行细胞癌BIU87细胞增殖及其TGFamRNA表达的表用,结果表明:TGFa反义寡聚核苷酸抑制抑体外培养的BIU87细胞的增殖,DNA合成和TGFamRNA的表达,进一步证明了TGFa在BIU87细胞恶性增殖中的重要作用。 相似文献
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一种新型人肿瘤坏死因子突变体在大肠杆菌中的高效表达 总被引:10,自引:2,他引:8
采用多位点突变引物和PCR方法对合成的人肿瘤坏死因子进行了突变,通过这一突变,人肿瘤坏死因子的第二位精氨酸的密码子CGT被变为赖氨酸密码子AAA,将突变后的基因插入表达载体pSB-92的PL启动子下游得到重组质粒pSB-TNF-K2,并在大肠杆菌中进行表达。突变体[Lys2]hTNF-α的表达产率达到菌体内总蛋白质的60%以上,且为一可溶性蛋白质并易于纯化。同野生型hTNF-α相比,[Lys2]hTNF-α具有稍低的毒性,但对于某些人肿瘤细胞株表现出高于数十到数百倍的抑制活性. 相似文献
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通过计算机模拟比较十种理论上柔性较好的接头在 5′ I L6 T N FΔ融合蛋白中对 I L 6 和 T N FΔ空间结构的影响情况,从中选择了 S A P G T P接头.以 S A P G T P 作为接头的 5′ I L6 S A P G T P T N FΔ和以 P G 为接头的5′ I L6 P G T N FΔ空间结构预测结果相似. D N A 序列分析两种蛋白的接头序列均与设计的一致.5′ I L6 S A P G T P T N FΔ和 5′ I L6 P G T N FΔ蛋白的大肠杆菌表达产物经初步分离、纯化及鉴定后,生物学活性及对高表达 I L 6 受体肿瘤细胞的杀伤作用比较结果显示:在 L929细胞上,前者的生物学活性是后者的 27 倍;在 U937 细胞上,前者对肿瘤细胞的抑制率是后者的13 倍.它们对高表达 I L 6 受体的 U937 细胞杀伤作用分别是同样突变位点的人 T N Fα衍生物的37 和 29 倍.实验表明, S A P G T P作为接头构建的 5′ I L6 S A P G T P T N FΔ融合蛋白优于以 P G 作为接头构建的 5′ I L6 P G T N FΔ融合蛋白. 相似文献
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hTNFα—hTGF3融合蛋白的基因构建及表达 总被引:4,自引:0,他引:4
采用基因工程技术,将能与表皮生长因子受体(EGFR)特异结合的人转化生长因子(hTGFα)第三环区17肽通过一个柔性手臂间人肿瘤坏死因子羧端连接,成功hTNFα-hTGF3融合蛋白基因。该融合蛋白基因在PL启动子控制的温控表达载体pSB92中,于42℃诱导表达,可得50%-60%的表达产物,95%为包含体。 相似文献
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转化生长因子β是一种细胞多功能调节肽,目前研究认为其和促癌过程有密切关系。本文利用Northern印迹分析技术研究了TGF-βmRNA在促癌笺佛波酯刺激的小鼠表皮和化学性诱发的小鼠二阶段皮肤肿瘤中的表达情况。结果证明,巴豆油2-20μL和TPA 5-40mmol一次局部涂用于小鼠皮肤,均可明显增加小鼠表皮TGF-βmRNA,呈较好的浓度依赖性。TGF-βmRNA表达在二甲基苯蒽和巴豆油诱发的二阶段 相似文献
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利用脑炎心肌炎病毒的内核糖体进入位点连接人TNF-αcDNA和选择基因NeoR基因,使TNF-α及NeoR基因均受控于病毒LTR启动子,将两基因同时转录至同一mRNA,从而构建成人TNF-α双顺反子逆转录病毒载体pGCEN/TNF-α.在LipofectAMINE介导下将其导入包装细胞PA317,G418筛选得单克隆,病毒滴度为106CFU/ml重组病毒分泌的细胞株.经PCR证明外源基因已整合至细胞基因组,Northern印迹显示出单一LRT转录本.持续G418筛选能明显促进目的基因TNF-α的表达.用重组病毒上清感染小鼠成纤维细胞NIH3T3,G418筛选获得的混合抗性克隆持续高表达TNF-α,40Gyγ线照射后能维持高效表达至7d.实验结果表明,含IRES的双顺反子逆转录病毒载体将是一个很好的基因转移载体. 相似文献
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T7启动子作用下抗人TNF—α单链抗体的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
基因工程技术构建的抗人TNF-α单链抗体克隆人表达载体pET15b-Etag中,在T7启动子的作用下,经0.1mmol/L IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,其表达量占菌体总蛋白的38%,表达产物大部分以包涵体形式存在,而一小部分以有活性的可溶性形式出现于细菌的外周质中。 相似文献
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《生物技术通报》2003,(1)
030 0 0 1血管生成抑制因子TSF的设计、表达及其对血管生成的抑制效应〔中〕/沈先荣… / /科学通报 .- 2 0 0 1,46 (13) .- 10 74~ 10 80PF4的C 末端 13肽和TSP1的 42 9~ 45 9片段 31肽通过Gly Pro Gly肽桥设计为融合蛋白TSF。采用pGEX 2T载体在E .coliJM10 9中获得了TSF蛋白的高效表达。采用MTT方法、损伤细胞迁移实验、鸡胚绒毛尿囊膜实验和小鼠移植肿瘤抑制实验 ,测定了TSF及其相关物GST TSF ,PF4(5 8~ 70 ) ,TSP1(42 9~ 45 9)等对血管生成和肿瘤生长的抑制效应。结果显示TS… 相似文献
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重组人肿瘤坏死因子α(hTNFα)衍生物发酵条件的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
本文对一种新型重组人肿瘤坏死因子衍生物(命名为hTNFD)的发酵条件进行了初步研究。通过实验优化选择了适宜该衍生物表达的培养基、IPTG使用浓度、诱导时期以及诱导时间的长短等,并在50L发酵罐进行了中试规模的放大培养,菌体的收获量湿重可达1643g/L,hTNFD表达量占总蛋白的60%,纯化的衍生物比活为101×1010U/mg,比原型hTNFα提高了465倍,具有潜在的临床应用价值。 相似文献
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细胞增殖必伴有染色体的一分为二及细胞质的增生,β微管蛋白则参与细胞的增殖过程.正性和负性调节因子对β微管蛋白的表达及细胞增殖间的相关性研究显示,不同生理剂量的正性调节因子IGFⅡ、T3/T4处理UMR106细胞12h,Northernblot实验发现它们在促进细胞DNA合成的同时,可使β微管蛋白mRNA表达增加,呈剂量依赖关系.而负性调节因子TNFα则相反地在抑制细胞DNA合成的同时,使β微管蛋白mRNA表达降低,也呈剂量依赖关系.Westernblot实验进一步表明,IGFⅡ可使β微管蛋白表达增加,而TNFα使β微管蛋白表达降低.由此可见,β微管蛋白的合成与细胞增殖间存在着一定的相互联系. 相似文献
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利用PCR技术和DNA体外重组方法,把作为导向效应细胞到靶部位的单核细胞趋化激活因子(MCAF)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)进行基因融合,置于pBV220载体的λPRPL串联启动子下游,构建了SD序列与ATG之间含有不同核苷酸组成的重组质粒pMG01、pMG02和pMG03。pMG01、pMG02和pMG03的翻译起始区都不存在稳定的二级结构,但DH5α(pMG02、DH5α(pMG03)的表达水平远远高于DH5α(pMG01),DH5α(PMG01)几乎没有表达。表达产物经Westernblot检测表明,它能分别与MCAF和GM-CSF抗体发生特异反应。生物学活性测定表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性和维持hGM-CSF依赖的TF1细胞生长的特性,说明MCAF和GM-CSF的生物学功能是相容的. 相似文献
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老年大鼠单核/巨噬细胞分泌和表达肿瘤坏死因子增多 总被引:2,自引:0,他引:2
为研究老年时肿瘤坏死因子(TNF-α)分泌及表达的改变,在内毒素(LPS)1.0μg/ml刺激大鼠单核/巨噬细胞后,用酶联免疫法(ELISA)测定培养液中TNF-α含量,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCK)测定TNF-αmRNA。同时测定培养液中一氧化氮(NO)和前列腺素I2(PGI2)的含量。结果显示:老年鼠TNF-α分泌量及其mR-NA明显高于青年鼠。NO产量在老年鼠与青年鼠之间无明显差异。老年鼠PGI2分泌明显低于青年鼠。由于PG能抑制TNF-α释放,从而推测,PGI2产生能力的降低可能是老年大鼠单核/巨噬细胞TNF-α分泌量明显高于青年鼠的原因之一。 相似文献
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人转化生长因子β1cDNA在COS—7细胞中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
在测定了TGFβ1全长序列的基础上,构建了两个TGFβ1的表达载达pCMVβ和pSVLβ;分别从转录水平和翻译水平检测了这两个载本在COS-7细胞中的表达。同时利用COS-7短暂表达系统,建立了TGFβ1的生物测活法;并分别研究了上清收获时间、表达载体、转染方法对TGFβ1表达的影响。 相似文献
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可溶性55kD人肿瘤坏死因子受体(shTNFR55)在变铅青链霉菌中的分泌表达 总被引:1,自引:0,他引:1
从 He La 细胞中提取总 R N A,采用反转录 P C R 技术,从该总 R N A 中扩增了约 530 bp 的sh T N F R55 基因的 c D N A,并克隆至质粒 p U C m el中酪蛋白酶 m el Cl 分泌信号肽编码序列的下游,构建成含融合基因 m el/ T N F R 的重组质粒 p U C m el/ T N F R.把融合基因 m el/ T N F R 插入链霉菌表达质粒 p I J459 的多克隆位点,使之位于 erm 强启动子的下游,得到重组表达质粒 p I J459 m el/s T N F R.经 Southern 杂交证明重组质粒 p I J459 m el/s T N F R 插入了 s T N F R55 基因片段.对重组菌株 Streptom yces lividans(p I J459 m el/s T N F R)的发酵液进行 S D S P A G E、受体配基杂交( Ligand blot)分析、对 T N F 敏感的 L929 细胞的细胞毒性中和试验表明,可溶性肿瘤坏死因子受体 s T N F R55 在链霉菌中得到了分泌表达,表达产物具有生物学活性.表达产物的分子量约在 26~28 k D 之间. 相似文献