人CD14基因的克隆及序列测定

采用PCR技术,从佛波酯乙醇刺激的HL-60细胞基因组DNA中扩增获得了1.1 kb的人CD14基因.序列分析表明,有四个碱基发生了突变,其中两处为首次报道.     

人转化生长因子β1成熟肽基因的克隆及序列测定

转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF β1)作为细胞主要的负调控生长因子,参与了哺乳动物各种细胞的病理和生理过程。此外,TGF β1可望应用于创伤愈合、免疫抑制、肿瘤抑制等方面,具有潜在的临床应用前景。我们在完成了人TGF β1基因的克隆及其在真核细胞中的表达后,准备进行其在大肠杆菌中的高效表达研究。     

人转化生长因子β1在大肠杆菌中的分泌表达

为了研究双体形式生长因子的原核基因工程,尝试了人转化生长因子β１（ｈＴＧＦβ１）基因的分泌表达．通过缺失突变,构建了能表达具有天然一级结构的ｈＴＧＦβ１单体蛋白的周质分泌表达质粒．采用双顺反子表达系统,使ＴＧＦβ１在周质中获得了高效可溶性表达．研究了改善转运通路对重组蛋白分泌表达的影响,发现共表达σ３２基因和ｄｓｂＡ基因,可促进周质中ＴＧＦβ１双体分子的形成;而共表达ｓｅｃＥ／Ｙ基因对ＴＧＦβ１的分泌表达则没有明显影响．通过共表达ｋｉｌ基因,使ＴＧＦβ１在胞外培养基中获分泌表达,并在胞外折叠、组装形成具有生物活性的双体分子     

Expression of human transforming growth factor β1 in E. coli (I) --Direct expression in cytoplasm

Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβｓ(ＴＧＦβｓ)ａｒｅａｆａｍｉｌｙｏｆｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｐｒｏｔｅｉｎｓｏｎｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ.Ｔｈｅｙａｒｅａｌｓｏｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎａｌｍｏｓｔａｌｌａｓｐｅｃｔｓｏｆｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｅｓ;ｔｈｅｙｈａｖｅｗｉｄｅｓｐｒｅａｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｎｄｐｒｏｆｏｕｎｄｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｐｏｔｅｎｔ…     

重组人可溶性CD14在昆虫细胞表达系统中的表达

BAC-TO-BAC杆状病毒表达系统是一种快速、高效、便捷的表达系统.将人可溶性CD14(sCD14)基因克隆入pFASTBAC1转移质粒中,重组质粒转化DH10BAC感受态细胞,目的基因通过同源重组插入BacmidDNA中,后者转染sf21昆虫细胞获得重组杆状病毒.利用重组蛋白C-末端的6×His@Tag,经TALON金属螯合色谱将重组病毒感染昆虫细胞获得的无血清培养上清--步纯化得到重组蛋白,计算表明从1L培养基中可纯化到约8mg纯度大于95%的重组sCD14蛋白,免疫印迹结果表明重组蛋白具有与抗6×His单抗和抗CD14单抗结合的抗原性.疑胶迁移实验和细胞活性实验表明重组sCD14蛋白能在体外与LPS结合,并能增强LPS诱导THP-1细胞产生细胞毒性因子.     

人转化生长因子β1在大肠杆菌胞内表达的研究

转化生长因子β(transforming growth factor β,TGFβ)是细胞增殖、分化的重要调节蛋白之一,同时还参与了细胞外基质形成、胚胎发育、骨重建等多项病理和生理过程,并在创伤愈合、免疫抑制、肿瘤抑制等多方面具有广阔的     

人转化生长因子β1在大肠杆菌中的表达——Ⅰ.胞内直接表达

采用PCR技术 ,扩增了人转化生长因子β1 (hTGFβ1 )成熟肽基因 ,并对其进行了全序列测定 .采用DH5α/ pBV2 2 0表达系统 ,使TGFβ1在大肠杆菌胞内的表达达到 1 6 % .通过N端氨基酸序列测定和免疫印迹分析 ,证实重组蛋白为hTGFβ1单体蛋白 .采用谷胱甘肽法或CHAPS/DMSO法 ,使重组蛋白的复性率达到 30 % .通过纯化获得了银染一条带的重组蛋白 ,MTT法对Mv1Lu细胞的测活表明 ,重组蛋白具有较强的生物活性     

人脂多糖结合蛋白基因的克隆及序列测定

采用PCR技术,从人肝cDNA文库中扩增获得了1.5 kb的脂多糖结合蛋白（LBP）的全长基因.序列分析表明,克隆的LBP基因编码的氨基酸序列与文献报道相同.     

多肽生长因子受体的研究进展

多肽生长因子受体是介导多肽生长因子对细胞的调控作用的膜结合糖蛋白．它们在结构上都可分成胞外区、跨膜区和胞内区三个区段．根据这些区域的结构特点,特别是有无蛋白激酶结构域,提出了新的分类方法;并比较了各类生长因子受体信号转导的异同．     

通用真核质粒表达载体的构建

利用真核基因表达调控的原理,以pSV2-dhfr为起始材料,构建了两个通用的真核质粒表达载体pMAML1-dhfr和pMAML2-dhfr,它们包含人巨细胞病毒立即早期启动子/增强子调控元件,由两个转录方向相同或相反的表达单元组成.以荧火虫荧光素酶基因为报道基因,β-半乳苷酶基因为内对照,借助COS-7短暂表达系统,研究了它们对荧光素酶表达的影响,并比较了它们与出发载体pSV2-dhfr的相对强弱.