应用酵母双杂交系统筛选与CIKS(151-574)相互作用的蛋白质

CIKS(ConnectiontoIKKandSAPK JNK)是最近发现的细胞蛋白 ,能激活IKK和SAPK JNK。应用酵母双杂交系统 ,将CIKS(15 1 5 74)插入载体pAS2 1作为诱铒 ,筛选人HeLa细胞MATCHMAKERcDNA文库 ,以期为阐明NFκB及JNK活性调控的分子机理提供新的线索。筛选得到 6个阳性AD 文库质粒 ,并用酵母双杂交实验验证了阳性AD 文库质粒与CIKS的相互作用。将阳性AD 文库质粒测序并对测序结果做BLAST分析 ,发现它们分别是RIKENcDNA 473340F0 3,PLAC8,CD2 7BP (Siva 1) ,CDC5L ,SnRNPsmB ,DVL2。CIKS能与这些功能各异的蛋白质相互作用 ,表明CIKS在细胞的多种生理活动中发挥作用。     

应用酵母双杂交系统筛选hTNFα特异性结合肽

肿瘤坏死因子（TNFα）是一种多功能细胞因子,目前已知许多病理性反应与之有关,如类风湿性关节炎、脓毒性休克、慢性心衰等。TNF的生物学功能是通过结合到细胞表面相应的受体（TNFR）来实现的,因此在炎症区引入可溶性TNF受体或TNF抗体,与膜上受体竞争性结合TNF,可以抑制TNF介导的生物学活性。在临床上,Enbrel、Infliximab和eralizumab等TNF拮抗剂,     

重组人肿瘤坏死因子α(hTNFα)衍生物发酵条件的研究

本文对一种新型重组人肿瘤坏死因子衍生物（命名为ｈＴＮＦＤ）的发酵条件进行了初步研究。通过实验优化选择了适宜该衍生物表达的培养基、ＩＰＴＧ使用浓度、诱导时期以及诱导时间的长短等,并在５０Ｌ发酵罐进行了中试规模的放大培养,菌体的收获量湿重可达１６４３ｇ／Ｌ,ｈＴＮＦＤ表达量占总蛋白的６０％,纯化的衍生物比活为１０１×１０１０Ｕ／ｍｇ,比原型ｈＴＮＦα提高了４６５倍,具有潜在的临床应用价值。     

嵌合蛋白sTNFR II-IgG Fc的克隆、表达与活性分析

肿瘤坏死因子是一种重要的炎性细胞因子,目前已知许多免疫疾病与之相关,为了抑制TNF的生物学活性,将可溶性TNFR Ⅱ(sTNFR Ⅱ）和人IgG Fc分子通过柔性短肽相连,构建成一个嵌合蛋白,在大肠杆菌中进行表达,并获得了纯化蛋白。实验证明该嵌合蛋白能够自发形成聚合体,识别并结合TNF蛋白,同单体sTNFR Ⅱ相比,对TNF的中和活性得到了较大的提高。     

肿瘤坏死因子受体生物学功能及其临床应用研究进展

肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor,TNF）的生物学功能是由其受体（TNF receptor,TNFR）介导的,可溶性TNF受体（Soluble TNF receptor,sTNRF）从膜上脱萍下来,不再负责信号传递,但能与TNF结合,中和TNF的生物学活性。sTNFR与IgG Fc组成的嵌合蛋白能有效治疗成人类风湿性关节炎和几童多发性关节炎,对其他与TNF相关免疫性疾病的治疗目前正在处于临床研究阶段。     

抑制肿瘤坏死因子-α的DNA适配子的筛选与鉴定

应用SELEX技术筛选能与TNF结合的DNA适配子。化学合成随机寡聚DNA库,以TNF为靶蛋白,经过12轮SELEX筛选,将所得产物克隆、测序。根据所测序列化学合成寡聚DNA适配子,用生物素_亲和素_辣根过氧化物酶显色系统检测适配子与TNF的结合活性;用鼠L929细胞检测适配子拮抗TNF活性。结果显示,所筛选到的寡聚DNA能与TNF-α高亲和力结合,并能在细胞培养中拮抗TNF-α的细胞毒活性。     

可溶性人肿瘤坏死因子受体Ⅱ（sTNFRⅡ）在大肠杆菌中的表达及其活性检测

肿瘤坏死因子（TNF）是一种多功能性的细胞因子,与许多重大疾病有关。为了抑制TNF的生物学活性,将TNF受体Ⅱ胞外区在大肠杆菌中进行了可溶性表达,并通过金属螯合层析柱纯化重组蛋白。结果表明,纯化的重组蛋白能够识别并结合TNF,同时能中和TNF的生物学活性,抑制其对细胞的杀伤作用,具有潜在的临床应用前景。     

TNF受体（P55）胞外区基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

TNF与多种疾病密切相关。为了获得大量具有生物学活性的可溶性TNF受体用以拮抗TNF的毒性作用,在原核表达系统中表达了TNFR（P55）的胞外区与TrxA的融合蛋白。将TNFR（P55）胞外区去信号肽的前三个结构域基因克隆入融合蛋白表达载体pET-32a,在大肠杆菌BL21（DE3）中高效表达了TrxA-TNFR融合蛋白。表达产物以包涵体形式存在,经过变性和复性,并经镍金属鳌和柱亲和层析纯化,得到了纯度较高的可溶性受体蛋白的初纯品。免疫学实验及L929细胞体外实验均表明：该蛋白具有TNFR（P55）特异的抗原性、与TNF结合的活性以及良好的抑制TNF的TNF生物学活性。     

应用酵母双杂交系统筛选与CIKS（151-574）相互作用的蛋白质

CIKS（Connection to IKK and SAPK/JNK）是最近发现的细胞蛋白,能激活IKK和SAPK/JNK。应用酵母双杂交系统,将CIKS（151574）插入载体pAS21作为诱铒,筛选人HeLa 细胞MATCHMAKER cDNA文库,以期为阐明NFκB及JNK活性调控的分子机理提供新的线索。筛选得到6个阳性AD/文库质粒,并用酵母双杂交实验验证了阳性AD/文库质粒与CIKS的相互作用。将阳性AD/文库质粒测序并对测序结果做BLAST分析,发现它们分别是RIKEN cDNA 473340F03,PLAC8, CD27BP (Siva-1), CDC5L, SnRNP smB,DVL2。CIKS能与这些功能各异的蛋白质相互作用,表明CIKS在细胞的多种生理活动中发挥作用。