识别未衍生化的13—羟化GAs及其葡萄糖苷的单克隆抗体

抗ＧＡ３ 及其葡萄糖苷的ＭＡＢ１０单克隆抗体源于以ＧＡ３ 中的３ 位羟基（３－ＯＨ）为偶联位点,人血清白蛋白（ＨＳＡ）为载体合成的ＧＡ３－３－ＨＳＡ 免疫原． 该抗体对１３－羟化ＧＡｓ（１３－ＯＨＧＡｓ、ＧＡ１、ＧＡ３、ＧＡ５ 等）和ＧＡ３ 葡萄糖苷具有高亲和力． ７ 位羧基的甲酯化可显著降低ＭＡＢ１０ 对１３－ＯＨ ＧＡｓ的亲和力,而３－ＯＨ 的糖苷化却未降低其亲和力． 用该抗体建立的两种分别用于ＧＡ３ 及其葡萄糖苷测定的酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）,其检测线性范围均为０．２～２０ ｐｍ ｏｌ． 借助这两种ＥＬＩＳＡｓ,研究了羊蹄（Ｒｕｍ ｅｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）叶片中ＧＡ３ 及其类似ＧＡｓ和葡萄糖苷的动态变化．结果表明,叶片衰老与游离态ＧＡｓ的糖苷化有关;而６－ＢＡ 延缓衰老则可能与其减缓ＧＡｓ的糖苷化有关     

中药提取物中α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选

目的：从中药中筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂。方法：采用α-葡萄糖苷酶、淀粉酶以及蔗糖酶活性测定方法,对126种经水煮醇沉提取的常用中药进行α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选。结果：在0．28mg／ml反应体系下,24种中药提取物显著抑制α-葡萄糖苷酶活性;在0．1mg／ml反应体系下,5种中药提取物抑制α-淀粉酶活性。大黄、山茱萸、赤芍、五倍子对α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶以及转化酶活性均有抑制作用,与阳性药物拜唐苹比较,这4种中药抑制α-淀粉酶的活性较低,但抑制α-葡萄糖计酶和转化酶的活性明显强于拜唐苹。结论：某些中药提取物能显著抑制α-葡萄糖苷酶活性,如果对其进一步分离、纯化并提取活性部位,可望获得抑制活性更强的中药α-葡萄糖苷酶抑制剂。     

天然来源α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选方法的研究进展

α-葡萄糖苷酶抑制剂(alpha-glucosidase inhibitors,AGI)是一类通过延缓肠道内碳水化合物的水解和吸收从而到达有效控制餐后血糖上升的糖尿病治疗药物,具有控制餐后血糖、保护胰岛细胞功能及改善多种糖尿病并发症等作用。近10年来,α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选方法由传统的筛选模型迅速发展到多种新技术的应用,各种新型筛选模型不断发展应用,从天然资源中寻找新的α-葡萄糖苷酶抑制剂已成为现如今防治糖尿病的研究热点。本文对α-葡萄糖苷酶抑制剂的降糖机制及作用特点、从天然资源中筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂的模型和方法等内容进行整理和归纳,重点对近10年来国内外从天然资源中筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂的新型筛选模型和方法进行总结和比较,探讨各类方法的特点、存在的问题以及研究思路,为寻找和发现天然α-葡萄糖苷酶抑制剂提供基础。     

产碱菌麦芽四糖淀粉酶的底物特异性

产碱菌Ｇ４Ａ仅能水解由α－１,４－葡萄糖苷键连接的麦芽寡糖、淀粉或糖原。淀粉和糖原的水解产物为Ｇ４;麦芽寡糖Ｇ５,Ｇ６和Ｇ７的水解产物分别为Ｇ４＋Ｇ、Ｇ４＋Ｇ２和Ｇ４＋Ｇ３,水解速度为Ｇ５〈Ｇ６〈Ｇ７。直链淀粉的水解限度为１００％,其他淀粉为６０￣７４％,糖原仅３４％,表明该酶为从麦芽寡糖、淀粉或糖原非还原末端顺序切割第４个α－１,４－葡萄糖苷键的外切型淀粉酶。Ｇ４Ａ对Ｇ５、Ｇ６、Ｇ７及直链淀粉、     

细支气管肺泡细胞增生和细支气管肺泡细胞癌内生长因子和蛋白激酶C的表达

表皮生长因子（ＥＧＦ）、转化生长因子－α（ＴＧＦα）、表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）与细胞生长、增殖分化调节和细胞癌变有密切关系。作者用免疫组织化学方法检测了细支气管肺泡细胞增生（ＢＡＨ）和细支气管肺泡细胞癌（ＢＡＣ）的ＥＧＦ、ＴＧＦα、ＥＧＦＲ和ＰＫＣ表达。结果表明：ＢＡＣ中的ＥＧＦ、ＴＧＦα阳性率和阳性强度以及ＥＧＦＲ、ＰＫＣ阳性强度均明显高于ＢＡＨ。ＢＡＨ的重度不典型增生病例,其ＥＧＦ、ＴＧＦα、ＥＧＦＲ和ＰＫＣ均呈高表达。ＴＧＦα、ＥＧＦＲ和ＰＫＣ三者在ＢＡＣ和ＢＡＨ中的表达存在明显相关性。提示：ＴＧＦα及其受体ＥＧＦＲ和ＰＫＣ是细支气管肺泡细胞增生、恶性转化和肺泡癌细胞失控生长的重要因素。     

胸腺肽α_1活性片段和其自旋标记衍生物的合成及免疫活性研究

报道了胸腺肽α_１活性片段Ｔｈｙｍｏｓｉｎα_１［Ｌｙｓ（２３）］（２３－２７）ＯＨ和其自旋标记衍生物的合成及对实验动物免疫功能的影响。其氨基酸序列分别为Ｈ_２Ｎ－Ｌｙｓ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ａｌａ－Ｇｌｕ－ＯＨ,用Ｔｈｙα_１［Ｌｙｓ~（２３）］表示,修饰物为Ｇｌｕ－ＯＨ）,用Ｔｈｙα_１［Ｌｙｓ~（２３）］·Ｒ表示。ＨＰＬＣ测得该肽的纯度在９０％以上,ＥＳＲ谱测定自旋标记衍生物给出氮氧自由基信号,氨基酸组成与预期值相符。实验小鼠腹腔连续注射剂量为０．１、１、１０、１００和１０００μｇ／ｋｇ的该肽１０天后,发现腹腔巨噬细胞吞噬功能、ＥＲＦＣ阳性率及血清溶血素含量明显升高,且最佳剂量在０．１－１０μｇ／ｋｇ范围。实验结果表明人工合成胸腺肽α_１活性片段及其自旋标记衍生物具有显著的免疫促进活性。     

中草药α-葡萄糖苷酶抑制剂研究进展

葡萄糖苷酶抑制剂在控制餐后高血糖方面具有重要的作用。目前已发现的中草药中的α-葡萄糖苷酶抑制剂包括:黄酮类,生物碱类、多糖、酚类等化合物以及一些活性成分尚未确定的中草药。本文对以中药为来源的α-葡萄糖苷酶抑制剂及其体内外抑制作用的评价进行了综述。     

条斑紫菜蛋白酶解产物中α-葡萄糖苷酶抑制剂纯化及特性

以α-葡萄糖苷酶抑制活性为指标,优选出1398中性蛋白酶、碱性蛋白酶和氨肽酶在一定条件下复配酶解条斑紫菜蛋白制备α-葡萄糖苷酶抑制剂。酶解液加入乙醇至终浓度为60%以沉淀去除多糖,上清液为α-葡萄糖苷酶抑制剂粗品。该粗品利用SP Sepharose High Performance阳离子交换层析、Sephadex G-10凝胶层析和Mono Q阴离子交换层析进行分离纯化,获得一种肽类α-葡萄糖苷酶抑制剂(LGI)。LGI经反向高效液相层析测定纯度为62.4%,基本特性分析显示其具较好的温度和pH稳定性,对α-葡萄糖苷酶半抑制浓度IC50值为97.36μg/mL,属于一种非竞争性抑制剂。     

螺旋藻中α-葡萄糖苷酶抑制剂的提取及动力学

研究与开发了钝顶螺旋藻中的α-葡萄糖苷酶抑制剂。采用氯仿-甲醇溶液浸提、大孔吸附树脂脱色、硅胶层析柱,Saphedex LH-20柱层析等步骤分离纯化得到α-葡萄糖苷酶抑制剂;利用紫外及红外图谱分析了所提抑制剂结构;采用双倒数作图法研究其抑制动力学特性。从螺旋藻分离的α-葡萄糖苷酶抑制剂达到了色谱纯,通过多种色谱分析,推测该试样为带有共轭体系的多羟基酯类化合物。对α-葡萄糖苷酶具有较强的抑制效果,抑制剂质量浓度为0.18 g/L时,抑制率达73%;动力学研究表明为典型的非竞争性抑制,为进一步的研究与开发奠定了基础。     

HCG抗原决定簇与乙肝病毒核心抗原的融合表达

利用ＰＣＲ方法获得编码人绒毛膜促性腺激素β链羧端３７肽基因片段（ＨＣＧ－β－３７－ＣＴＰ）,并将其分别和乙肝核心抗原的氨端（第１位）、羧端（第４５４位）、中间（第７５～８３位）以及中间和羧端同时融合,构建Ｔ４个重组融合表达克隆：ｐＣｎ－ＨＣＧ、ｐＣｃ－ＨＣＧ、ｐＣｍ－ＨＣＧ和ｐＣ－ＨＣＧ２,在大肠杆菌中实现了表达。对表达产物中的乙肝核心抗原和ＨＣＧ抗原的抗原性和表达水平、融合蛋白的颗粒性及其免疫原性进行了分析。其中ｐＣｍ－ＨＣＧ和ｐＣｃ－ＨＣＧ能形成颗粒。用ｐＣｍ－ＨＣＧ免疫小鼠能产生高滴度的抗ＨＣＧ抗体,说明核心抗原的中间部位是合适的融合位点。     

山豆根木葡聚糖的研究

研究了山豆根中一种木葡聚糖的结构．用１ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ提取,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５离子交换柱层析,Ｆｅｈｌｉｎｇ试剂分级得到山豆根木葡聚糖组分ＳＳｂ－１ＦＡ,用完全酸水解,甲基化分析,部分酸水解,三氧化铬氧化和１Ｈ,１３ＣＮＭＲ等方法对其结构进行研究．结果表明：ＳＳｂ－１ＦＡ的分子量为２．６×１０４,比旋光度［α］２０Ｄ＝＋１０．９°（ｃ０．２２,Ｈ２Ｏ）,由Ｌ－Ｆｕｃ,Ｄ－Ｘｙｌ,Ｄ－Ｇａｌ和Ｄ－Ｇｌｃ组成,摩尔比为：２．９２９．９７．５５９．８．ＳＳｂ－１ＦＡ由１→４连接的β－Ｄ－Ｇｌｃ残基构成主链,分枝有α－Ｄ－Ｘｙｌ（１→,β－Ｄ－Ｇａｌ（１→２）α－Ｄ－Ｘｙｌ（１→等类型,部分非还原末端由Ｌ－Ｆｕｃ（１→构成．     

α-葡萄糖苷酶抑制剂HW110产生菌的研究

目的:筛选新的α-葡萄糖苷酶抑制剂。方法:采用α-淀粉酶及蔗糖酶抑制试验,从2000株放线菌发酵液中筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂。结果:从淡紫灰链霉菌HW110(Streptomyces lavedulae HW110)发酵液中分离到HW110,其抑酶活性与acarbose相当。结论:利用α-淀粉酶及蔗糖酶抑制试验筛选到deoxynorjirimycin。     

大鼠20α羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的表达

利用谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ　Ｓ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ,ＧＳＴ）融合基因表达系统,大鼠２０α羟类固醇脱氢酶（２０αＨｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄＤｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ,２０αＨＳＤ）在大肠杆菌中得以成功地表达。亲和层析和Ｔｈｒｏｍｂｉｎ消化,可从融合蛋白中回收和纯化重组２０αＨＳＤＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法和酶活性测定显示,重组２０αＨＳＤ具有天然蛋白质相同分子量、相似的抗原性和酶催化活性,其对ＮＡＤＰ的Ｋ＿ｍ值和Ｖ＿（ｍａｘ）分别为９．５μｍｏｌ／Ｌ、３３４ｎｍｏ１／（ｍｉｎ·ｍｇ）,对底物２０α羟孕酮（２０αＨｙｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ,２０αＯＨＰ）的Ｋ＿ｍ值和Ｖ＿（ｍａｘ）分别为５．９μｍｏｌ／Ｌ和３４７ｎｍｏｌ／（ｍｉｎ·ｍｇ）,利用该表达系统大量制备大鼠重组２０αＨＳＤ,为深入研究２０αＨＳＤ的生理活性和功能创造条件。     

重组人MCAF／GM－CSF融合蛋白表达及其生物学活性研究

利用ＰＣＲ技术和ＤＮＡ体外重组方法,把作为导向效应细胞到靶部位的单核细胞趋化激活因子（ＭＣＡＦ）和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）进行基因融合,置于ｐＢＶ２２０载体的λＰＲＰＬ串联启动子下游,构建了ＳＤ序列与ＡＴＧ之间含有不同核苷酸组成的重组质粒ｐＭＧ０１、ｐＭＧ０２和ｐＭＧ０３。ｐＭＧ０１、ｐＭＧ０２和ｐＭＧ０３的翻译起始区都不存在稳定的二级结构,但ＤＨ５α（ｐＭＧ０２、ＤＨ５α（ｐＭＧ０３）的表达水平远远高于ＤＨ５α（ｐＭＧ０１）,ＤＨ５α（ＰＭＧ０１）几乎没有表达。表达产物经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明,它能分别与ＭＣＡＦ和ＧＭ－ＣＳＦ抗体发生特异反应。生物学活性测定表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性和维持ｈＧＭ－ＣＳＦ依赖的ＴＦ１细胞生长的特性,说明ＭＣＡＦ和ＧＭ－ＣＳＦ的生物学功能是相容的．     

炎症介质在内毒素引起大鼠肠系膜血管床降钙素基因相关…

本研究在离体大鼠肠系膜血管床灌流模型上,采用特异放免法测定灌流液中的降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）观察几种常见炎症介质在内毒素引起ＣＧＲＰ释放中的作用,结果显示：前列腺素合成酶抑制剂地塞米松,布洛芬与消炎痛,缓激肽受体Ｂ２拮抗剂ＨＯＥ－１４０,血小板激活因子拮抗剂ＷＥＢ２０８６,组胺Ｈ１受体拮抗剂苯海拉明以及和组胺Ｈ２受体拮抗剂西咪替丁,均能明显抑剂制内毒素引起的ＣＧＲＰ释放,５羟色胺受体拮抗剂ＩＣ     

高效液相色谱法测定灰兜巴对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

研究灰兜巴醇提石油醚萃取、醇提乙酸乙酯萃取、醇提正丁醇萃取、醇提萃取剩余部分和水提部分对于α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用,并通过高效液相色谱检测在药物与酶反应过程中振荡对于α-葡萄糖苷酶抑制率的影响。结果显示,灰兜巴各提取部分均表现出良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,为一种良好的α-葡萄糖苷酶抑制剂,且振荡对其抑制率的影响较大,在反应过程中应使酶与药物充分结合。     

人血管内皮抑素基因的克隆及其在原核中的表达

以人胎肝组织为材料,提取总ＲＮＡ,经反转录和ＰＣＲ扩增,得到血管内皮抑素基因,序列分析表明,与国外文献报道一致。将其克隆到大肠杆菌表达系统ｐＧＥＸ－ＫＧ,分别在ＤＨ５α、ＢＬ－２１菌中以ＧＳＴ－Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ融合蛋白的形式高效表达。     

α-黑色素细胞刺激素的神经免疫调节作用

许多证据表明α－黑色素细胞刺激素（α－ＭＳＨ）是一种内源性的神经免疫调节肽,可抑制发热与主要类型的实验性炎病。在人类,炎性部位的α－ＭＳＨ浓度升高,感染性疾病或内毒素注射后血浆中α－ＭＳＨ浓度也升高。α－ＭＳＨ有拮抗前炎性细胞因子的作用,并可抑制其生成。这种抗细胞因子肽的免疫调节效应经下述途径产生：（１）直接作用于外周巨噬、单核和嗜中性粒细胞等免疫细胞上的α－ＭＳＨ本;（２）作用于脑内神经元上的α     

3个六肽的胰岛素受体结合和体内生物活性

为了研究胰岛素受体结合部位的结构和功能,设计并用固相方法合成了３个六肽．在浓度大于１×１０３ｎｍｏｌ／Ｌ时,ｃｙｃｌｏ（Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ）具有明显的胰岛素受体结合活力;Ｈ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－ＯＨ的这一活力则不明显;而Ｈ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－ＯＨ则增强胰岛素和其受体的亲和性．然而,它们都没有体内生物活性．这表明：环六肽部分模拟了胰岛素受体结合部位的空间构象;胰岛素受体结合部位的疏水性和其中的Ｂ２３Ｇｌｙ－Ｂ２４Ｐｈｅ－Ｂ２５Ｐｈｅ对胰岛素和其受体的结合起重要作用．     

前列腺素F2α对大鼠肾小球系膜细胞DNA合成的影响

本实验应用（＾３Ｈ）胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法测定前列腺素Ｆ２α（ＰＧＦ２α）对大鼠肾小球系膜细胞ＤＮＡ合成的作用,测定系膜细胞合成的二脂酰甘油（ＤＡＧ）及磷酸肌醇（ＩＰ）。结果表明,ＰＧＦ２α促进系膜细胞的ＤＮＡ合成、ＤＡＧ及ＩＰ的生成。提示ＰＧＦ２α使系膜细胞的磷脂酶Ｃ活化,产生ＩＰ及ＤＡＧ,激活蛋白激酶Ｃ,从而促进ＤＮＡ合成及细胞增殖。