苦瓜多糖的提取、分离纯化及组成性质

正交实验确定提取工艺后,用热水提取法得到苦瓜多糖(MCP).对MCP进行DEAE-32离子交换层析分离,得到3个多糖组分MCP1、MCP2和MCP3. 进一步采用Sephacryl S-400凝胶层析进行分离,经凝胶层析和高效液相色谱检测表明,MCP1、MCP2为均一性多糖组分.通过高效液相凝胶色谱法测定了两者的相对分子质量分别为1.16×106和7.45×105.用PMP衍生化法测定其单糖,结果表明: MCP1系由Man、Rham、GlcUA、GalUA、Glu、Gal、Xyl、Ara等单糖组成的杂多糖,摩尔比为1.03:2.93:1.00:14.95:2.16:30.70:2.85:4.50.MCP2系由Rham、GalUA、Gal、Xyl、Ara等单糖组成的杂多糖,对应的摩尔比为1.63:21.88:4.66:1.00:1.29.紫外光谱表明该多糖不含蛋白质和核酸.     

MICA 脱落与肿瘤免疫逃逸：肿瘤免疫治疗新靶标和新策略

MHC Ⅰ类链相关分子（MICA）是自然杀伤细胞和T 细胞上NKG2D 受体的主要活化性配体,在上皮源性肿瘤细胞表面过表达。NKG2D 与MICA 的结合可有效刺激效应细胞对肿瘤细胞的细胞毒作用。然而,临床观察表明,MICA 会在肿瘤的增殖过程中脱落而形成可溶性MICA（sMICA）,这被认为是肿瘤细胞逃脱NKG2D 介导的免疫监视的重要原因。综述在肿瘤细胞中MICA 和NKG2D 的表达与功能、sMICA 的形成与肿瘤免疫逃逸的关联以及介导MICA 脱落的机制,由此探讨肿瘤免疫治疗的新靶点和新策略。     

三聚氰胺胶体金免疫层析试纸条的研制

通过胶体金免疫层析技术建立一种特异、便捷、快速的三聚氰胺抗原检测方法,对奶制品及饲料中的三聚氰胺残留水平监测提供参考。用柠檬酸三钠还原法制备的胶体金,标记纯化的三聚氰胺单克隆抗体,喷于试纸的金标垫。将MEL-OVA(三聚氰胺和卵清白蛋白的偶练物)和纯化的羊抗鼠IgG分别喷于试纸的T(检测线)处和C(质控线)处,通过挑选试纸条材料和调试工艺参数,并最终组装成试纸条。结果显示,制备的试纸监测体系方法检出限为50 g/L。试纸条对牛奶、奶粉和饲料中的三聚氰胺残留的检出限分别为100 g/L、100 ng/g和200 ng/g。将该法与LC-MS/MS法对比检测牛奶、奶粉和饲料样品,在试纸条检测范围内,与LC-MS/MS法检测结果一致性好,从而验证了该方法的有效性。制备的三聚氰胺胶体金检测试纸在常温干燥环境下至少可保质6个月,能够检测出三聚氰胺含量大于50 g/L的样品,适用于现场实际样品三聚氰胺残留水平监测,具有良好的应用前景。     

螺旋藻中α-葡萄糖苷酶抑制剂的提取及动力学

研究与开发了钝顶螺旋藻中的α-葡萄糖苷酶抑制剂。采用氯仿-甲醇溶液浸提、大孔吸附树脂脱色、硅胶层析柱,Saphedex LH-20柱层析等步骤分离纯化得到α-葡萄糖苷酶抑制剂;利用紫外及红外图谱分析了所提抑制剂结构;采用双倒数作图法研究其抑制动力学特性。从螺旋藻分离的α-葡萄糖苷酶抑制剂达到了色谱纯,通过多种色谱分析,推测该试样为带有共轭体系的多羟基酯类化合物。对α-葡萄糖苷酶具有较强的抑制效果,抑制剂质量浓度为0.18 g/L时,抑制率达73%;动力学研究表明为典型的非竞争性抑制,为进一步的研究与开发奠定了基础。     

抗血管内皮生长因子受体2双价单链抗体的构建表达及其活性研究

为了竞争性抑制血管内皮生长因子(VEGF)与其受体(VEGFR-2)的结合,构建表达了能够与VEGFR-2胞外3区(KDR3)特异结合的双价单链抗体(bivalent single-chain Fv,BsFv),并鉴定其生物活性。以KDR3特异结合单链抗体AK404(scFv AK404)基因为模板,设计引物引入中间连接肽(G₄S)₃连接两个scFv片段,将其克隆入原核表达载体pET22b,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物依次经过镍柱亲和层析纯化和透析复性;基于生物膜层表面干涉技术(Bio-Layer Interferometry,BLI)技术的体外亲和力监测实验和VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖实验鉴定表达产物与KDR结合的活性。酶切鉴定和DNA测序结果表明BsFv构建成功;SDS-PAGE显示37 ℃下1 mmol/L IPTG诱导细菌6 h获得包涵体,经镍柱亲和层析纯化和透析复性得到纯度为90%的BsFv;经Western blotting鉴定为目的蛋白;体外结合实验表明:BsFv特异性结合KDR胞外3区的亲合力约为单价抗体AK404的2倍;内皮细胞增殖抑制实验表明:BsFv可剂量依赖性地抑制HUVEC细胞增殖,且其抑制效果强于AK404。上述结果表明:BsFv在抗血管生成活性方面比其scFv具有明显优势,为进一步用于抗血管生成抗肿瘤治疗和肿瘤诊断奠定了基础。     

用于抗体/抗体片段表达的系统及其高表达策略

随着诊断及治疗领域内单克隆抗体及片段的广泛应用,传统的杂交瘤生产技术已很难满足对其日益增长的需求。由于基因重组技术及生物工程技术的迅速发展及日益成熟,大规模生产单克隆抗体/片段已成为可能。对目前常用的载体及表达系统进行列举和比对,这些系统包括大肠杆菌(Escherichia coli, E.coli)系统、酵母表达系统、昆虫细胞表达系统及哺乳动物细胞表达系统。在第二部分,对提高表达产率的策略进行了探讨,其中包括:表达蛋白质本身的修饰(如蛋白融合、定点突变)、表达系统的选择、密码子优化、表达环境的优化和抗体体内表达等。最后,对抗体/抗体片段高表达的前景作了展望,认为生物信息学将在此领域发挥重大作用,并且相信建立高表达平台的时机已经来到。     

肿瘤免疫治疗的研究现状

恶性肿瘤的发病率近年持续走高并已成为威胁人类健康的主要因素。肿瘤免疫治疗是肿瘤治疗领域的新兴方案,引领了肿瘤治疗的重大突破。该方案通过复杂的免疫调节机制靶向攻击肿瘤细胞并防止肿瘤复发,因此众多研究机构以肿瘤免疫治疗为主要研究方向进行深入探讨。近年来多项研究提出了一系列具有肿瘤免疫作用的新型免疫组分且发现治疗方案的联合应用可优化肿瘤治疗效果。本文将就肿瘤免疫治疗的研究现状做一综述。     

葡激酶突变体对高脂喂养大鼠血液常规指标的影响

目的研究葡激酶突变体（SakM）对高脂喂养大鼠血液常规的影响。方法选取60只Wistar大鼠,随机分为高脂药物组、高脂生理盐水组、正常药物对照组、正常生理盐水对照组,静脉注射SakM到大鼠体内,剂量按照0．5mg／kg体重,2d注射一次,连续15次,观察SakM对血液常规的影响。结果SakM对正常动物血液常规指标没有影响,但是能够改善高脂喂养动物的血液常规指标结论SakM长期使用不会影响正常动物血液常规指标,具有使用安全性,同时还能用来调节高脂喂养动物的血液常规指标。     

IGFBP-3高效可溶表达、纯化及生物学活性初步研究

克隆胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)的cDNA片段,构建原核表达载体pET-DsBA-IGFBP3。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS中,诱导表达IGFBP-3融合蛋白(简称D-IGFBP3)。经检测融合蛋白主要以可溶形式表达。表达产物用His亲和层析柱纯化,获得了纯度超过95%的重组IGFBP-3融合蛋白。Western-blot结果表明在相应分子量处有一条特异性条带。细胞活性研究显示它对MCF-7细胞生长具有一定的抑制作用,且在体外具有与IGF-I结合的活性。     

流感病毒疫苗佐剂研究现状

流行性感冒是一类由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。其发病率高、传染性强,因此作为最佳预防手段的流感疫苗关注度日益提升。而佐剂的使用可提升流感疫苗的效果并减少相应抗原的使用量,因此成为研究热点。就应用于流感疫苗中佐剂的研究现状做一综述。