利用固定化酵母细胞转化反式肉桂酸生产L-苯丙氨酸

研究了探红酵母(Rhodotorula rubra)的培养基成分、培养固定化及转化条件。实验表明最佳培养基成分(％)：葡萄糖0 5,胰蛋白胨0．5,酵母膏0．5,磷酸二氢钾0．05,L-Phe0．05,pH．0,30℃,20L发酵罐中培养15～17h.最佳固定化条件为：用2．5％卡拉胶包埋18％的湿菌体。最佳转化条件为：1．0％反式肉桂酸,4mol／L铵离子,pH10．5,30℃。用卡拉胶固定化的深红酵母(Rhodotorula rubra)可以将77．7％的反式肉桂酸转化为L-苯丙氪酸。     

瓶栽蛹草子座的方法

蛹草(Cordyceps militaris),也称北冬虫夏草,其药性与传统中药材冬虫夏草(C.sinensis)相近。我们在罐头瓶内多次育成蛹草子座,现将方法介绍如下。 (一)培养基的制作与接种方法普通大米:高梁米=9:1,使含水量达到110-120％,其中含KH_2PO_40.1％,MgSO_4 0.05％,酵母粉0.5％,蛋白质少量。每瓶加入50-100克干重的培养基。灭菌时间:高压1.5-2小时,常压8-10小时。取斜面菌种一小片或米饭培养基菌种一小块,在无菌条件下接种在罐头瓶内。菌种特点:在斜面培养基上菌丝纯白色、粗壮浓密,紧贴培养基生长,边缘清楚;在米饭培养基上容易形成浅桔黄色的色素沉着。 (二)栽培管理菌株接种后,在15℃左右条件下培养。6-10℃生长缓慢,20-25℃有利于子座形成。培养基含水量低于100％以下,生长缓慢;湿度过     

基于响应面分析的高抗原活性猪水肿病大肠杆菌疫苗培养基的研制及效果评价

【背景】猪水肿病大肠杆菌引发的疾病造成了很大的危害,但现有培养基存在培养密度低的问题。【目的】研制出高抗原活性猪水肿病大肠杆菌疫苗培养基。【方法】以常用的市售猪水肿培养基为对照,通过单因素试验、爬坡试验(Plackett-Burman, PB)、响应面(Box-Behnken, BB)试验对猪水肿培养基进行响应面优化,得到猪水肿培养基最优配方。以响应面试验得到的培养基培养猪水肿病大肠杆菌,评价不同培养时间点菌株的抗原活性,制作灭活疫苗,进行动物免疫保护试验。【结果】对研制的培养基进行扩大培养验证,发现扩大培养得到的菌株活菌数可达5×10⁹ CFU/mL以上,约为对照组的2倍。制备的灭活疫苗效价可达1:140 000,并在9 h时抗原蛋白效价达到最高。【结论】本研究研制出的疫苗培养基显著提高了猪大肠杆菌菌体密度,并可提高菌体抗原活性,为猪水肿病灭活疫苗的制备提供了技术指引。     

酒精废液用于单细胞蛋白的生产

本文采用蔗糖蜜生产酒精后得到的蒸馏废液来培养Candida和Paecilomyes菌株,生产单细胞蛋白。报导了用两种菌株进行的小型和大型的试验结果以及细胞材料中有关的化学成分,氨基酸、维生素含量和生理价值的数据。在产糖国家中所得到的酒精废液的数量是相当大的。每立方米酒精废液可生产干酵母约15公斤。 培养基的制备:在1升酒精废液中加入2—3.5克硫酸铵和0.2—0.3克磷酸氢铵。每升加入20克琼脂来制备斜面培养基。调P~H4.5—5。培养温度为30℃。     

转TNF-α基因大肠杆菌培养条件的优化

目的：优化转pMD-489-TNF大肠杆菌的发酵条件,提高菌体产量及TNF-α产率。方法：通过单因素及正交实验,对影响转基因大肠杆菌生长及TNF-α表达的培养液成分、诱导剂浓度、培养温度等工艺条件进行了优化。结果：M9＋LB培养基成分的最优配比为3%葡萄糖、2%蛋白胨、4%酵母粉和1%NH4Cl,诱导剂IPTG浓度为0.5mmol/L,诱导时间4h,培养液初始pH是7.0,于37℃培养。结论：优化后的培养条件促进了菌体的生长和TNF-α的表达,菌体干重和TNF-α表达率比没有经过优化时升高了1.34倍和4.11倍,TNF-α产率从0.113%提高到0.479%,提高了324%。     

GST-SUMO-MT融合蛋白在大肠杆菌中的自诱导表达

旨在考察在大肠杆菌中自诱导表达GST-SUMO-MT融合蛋白的可行性,并对自诱导培养条件及培养基成分进行优化,以提高蛋白产量。采用摇瓶培养,利用单因素和正交实验对工程菌自诱导的培养条件(诱导时间、诱导温度)和培养基组分(蛋白胨、酵母粉、甘油、葡萄糖、乳糖)进行优化,检测菌体浓度、可溶性目的蛋白的表达量。结果表明,自诱导培养基碳氮源的最优配比为:2%蛋白胨、2%酵母粉、0.3%甘油、0.05%葡萄糖和0.3%乳糖。重组菌自诱导表达最优发酵条件为:采用两阶段温度控制,37℃培养3 h,25℃继续培养13 h。此时可溶性目的蛋白的表达量和菌体浓度分别为LB培养基(IPTG诱导)的2.2倍和2.3倍。     

GABAA受体蛋白片段在大肠杆菌细胞表达条件研究*

为了提高GABAA受体a1蛋白片段在大肠杆菌中表达量,研究了重组菌的发酵条件,包括培养基、接种量、温度、摇床转速、pH、诱导培养时间和诱导剂IPTG使用浓度等对GABAA受体蛋白片段表达的影响。结果表明重组菌以LB培养基为发酵基质,按3％接种量,37℃培养细胞3.5h后IPTG 32℃诱导5h,菌体生物量为3.25g/L,目标蛋白表达量达95mg/L。用16L发酵罐进行放大培养,菌体生物量达4.95g/L,发酵周期5.5h,最高目标蛋白表达量达到136mg/L.     

K88大肠杆菌菌毛蛋白发酵工艺条件优化研究

分别采用LB培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、强化营养培养基、玉米浆培养基对大肠杆菌K88进行发酵培养,选出最适于大肠杆菌K88生长的玉米浆培养基;采用正交实验对玉米浆培养基的C／N、K2HPO4／KH2PO4、Mg^2＋的配比进行优化,筛选最适于大肠杆菌K88生长的营养配比;研究生长曲线、接种量以及菌体和菌毛生产量的相关性,根据实验结果优化发酵培养条件,确定菌种的最佳发酵工艺,以收获最多的K88菌毛蛋白。研究表明,K88大肠杆菌在玉米浆培养基C／N、K2HP04／KH2PO4的配比分别为5／11、1／1,Mg^2＋为0．1g/mL,pH值为7．2,转速为200r／min,接种量为4．5％的条件下发酵26个小时,菌体和菌毛生产量均达到高峰,同时得出菌毛蛋白产生量和菌体量成正相关。     

GABAA受体蛋白片段在大肠杆菌细胞表达条件研究

为了提高GABAA受体α1蛋白片段在大肠杆菌中表达量,研究了重组菌的发酵条件,包括培养基,接种量,温度,摇床转速,pH,诱导培养时间和诱导剂IPTG使用浓度等对GABAA受体蛋白片段表达的影响。结果表明重组菌以LB培养基为发酵基质,按3%接种量,37℃培养细胞3.5h后IPTG32℃诱导5h,菌体生物量为3.25g/L,目标蛋白表达量达95mg/L。用16L发酵罐进行放大培养,菌体生物量达4.95g/L,发酵周期5.5h。最高目标蛋白表达量达到136mg/L。     

重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白工程菌的高密度培养

在10L发酵罐中对戊型肝炎病毒衣壳蛋白在重组大肠杆菌中表达发酵工艺进行了研究,用分批培养方法探讨了不同培养基、培养基中磷酸盐浓度和Mg^2＋浓度等因素对菌体生长与重组蛋白表达的影响;用分批补料培养研究了不同的补料工艺对菌体生长与重组蛋白表达的影响,同时对重组菌诱导时期、诱导持续时间以及不同诱导温度表达包含体在尿素溶液中的溶解性进行了研究。结果表明,在优化后的培养基中,磷酸盐浓度、Mg^2＋浓度分别为80mmol/L 与20mmol/L时菌体生长与表达效果较好;分批补料培养中,37℃培养9h菌体达到对数期中期(约45OD600)为适宜诱导时期,加入终浓度为10mmol/L IPTG后诱导5h,OD600达到80以上,重组蛋白表达量达到29.74％,为最适收获菌体时间;37℃表达的包含体80％以上溶解在4mol/L的尿素溶液中,最终浓度达到14mg/mL; 10L发酵罐中确定的发酵工艺参数在30L发酵罐中进行了放大培养,10L发酵罐中确定的发酵工艺参数在30L发酵罐上具有可放大性与重复性, 可以应用于工业生产。     

利用固定化酵母细胞转化反式肉桂酸生产L—苯丙氨酸

研究了深红酵母（Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａｒｕｂｒａ）的培养基成分,培养固定化及转化条件,实验表明最佳基成分（％）葡萄糖０．５,胰蛋白胨０．５,酵母膏０．５,磷酸二氢钾０．０５,Ｌ－Ｐｈｅ０．０５,ｐＨ７．０,３０℃２０Ｌ发酵罐中培养１５～１７ｈ,最佳固定化条件为：用２．５％卡拉胶包埋１８％的湿菌体,最佳转化条件为：１．０％反式肉桂酸,４ｍｏｌ／Ｌ铵离子,ｐＨ０．５,３０℃,用卡拉胶固定化深红酵母（Ｒ     

大肠杆菌发酵生产重组人颗粒溶素

目的:在FUS-50L生物反应器中利用补料分批培养技术培养表达含重组质粒pET28a( )-GNLY的大肠杆菌BL21(DE3)pLysS株,生产重组颗粒溶素(GNLY)。方法:选取含pET28a( )-GNLY的BL21(DE3)pLysS菌株单个克隆分级培养,将制备的二级种子液接种于发酵罐中。在发酵过程中,控制溶氧为30%～50%,温度为37℃;在基础培养基内生长4h后,补加以甘油为碳源的补料,继续生长到11h;加入葡萄糖至终浓度为1%,30℃诱导表达6h;收集菌体,纯化制备目的蛋白。利用Western印迹检测重组蛋白的抗原性,用CFU方法检测其生物学活性。结果:发酵液中最终菌体密度达80g/L;纯化所得重组蛋白约占菌体总蛋白的5%,含量为60mg/L;经鉴定所获重组颗粒溶素有较好的免疫学活性和生物学活性。结论:用含重组质粒pET28a( )-GNLY的大肠杆菌BL21(DE3)pLysS表达系统,可得到具有生物活性的重组颗粒溶素,为大批量生产提供了条件。     

高比活力大肠杆菌磷酸转乙酰酶的纯化

从国内大肠杆菌菌株1.505提取磷酸转乙酰酶(PTA),经数步纯化荻得了高比活力酶制品。该酶制品比粗酶纯化了61倍,比活力达1040单位/mg,经聚丙烯酰胺凝胶电泳检查,仅有两条蛋白质区带。用经过纯化的酶测定辅酶A,其结果6.75单位/10微升酶液在光径1cm时,233nm的吸收值△E_(PTA)<0.009。     

产多聚唾液酸的菌种筛选及产酸条件

通过对40株大肠杆菌进行产多聚唾液酸的筛选,得到一株高产多聚唾液酸菌株C-8,对该菌的一系列培养条件进行了研究。最佳培养基为：山梨醇2.5％,硫酸铵0.5％,磷酸氢二钾90mmol／L,胰蛋白陈1.5％,硫酸镁0.04％,pH7．8。在37℃,250r／min摇床培养65h,可使菌体在每毫升培养液中产多聚唾液酸1200μg。     

恒pH葡萄糖流加方法培养重组大肠杆菌生产人肿瘤坏死因子-α及其动力学研究

研究了一种新型的流加方法──恒pH流加葡萄糖法,用于培养重组大肠杆菌生产人肿瘤坏死因子-α。流加后培养液中菌体OD(600)达到9．0,是在LB培养基培养的15倍,而α-肿瘤坏死因子的比活保持（1．05±0．11）×105u/mg,并建立了菌体生长的动力学方程。     

面包酵母的子囊孢子形态观察

面包酵母是最常见的酵母菌之一,利用市售鲜酵母或干酵母来分离面包酵母菌,并进行纯化得到纯种面包酵母.将分离得到的面包酵母菌在YPD培养基斜面培养后接种葡萄糖-醋酸盐培养基斜面,28℃培养1～2周后产生子囊孢子,在显微镜下观察,可以清楚的看到面包酵母子囊孢子的典型结构.用此法观察子囊孢子方便易行,不需要对菌种进行保藏.     

产姜黄素大肠杆菌工程菌的构建

姜黄素是姜科植物的特征性成分,具有重要的药理活性。文中利用姜黄素生物合成关键酶β-酮酰辅酶A合酶(Diketide-CoA synthase,DCS)基因和姜黄素合酶(Curcumin synthase,CURS)基因构建非天然融合基因DCS::CURS,并将其与4-香豆酰辅酶A连接酶(4-coumarate coenzyme A ligase,4CL)和乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl coenzyme A carboxylase,ACC)基因共同引入大肠杆菌Escherichia coli,构建由阿魏酸合成姜黄素的工程大肠杆菌,利用LB培养基和改良的M9培养基进行两步发酵。通过对生长培养阶段诱导蛋白表达方法和发酵培养阶段接种菌体量、培养基组成及发酵培养时间等条件的优化,并在发酵培养阶段加入大孔吸附树脂降低产物在培养液中的累积等方法,姜黄素的合成产率达到386.8mg/L。本研究首次将非天然融合基因DCS::CURS用于合成姜黄素工程菌的构建,得到了姜黄素产率较高的大肠杆菌菌株,为后续通过进一步复杂的代谢网络优化、构建姜黄素合成能力更强的工程菌提供参考。     

高产纤维素酶热纤梭菌选育及酶活力最适表达条件研究

1材料与方法1.1材料热纤梭菌:法国Institut Pasteur赠送;稻草粉的制备:取无霉变的新稻草粉碎,过标准筛;酶活力基础培养基(质量分数,%):稻草粉、麦麸、MgSO40.05,K2HPO40.4,KH2PO40.4,MgCl2·6H2O0.05,(NH4)2SO40.5,CaCl2·2H2O0.01,FeSO4·7H2O0.01;纤维素平板培养基:CMC培养基;斜面诱导培养基:稻草粉加适量无机盐组成;培养条件:50℃厌氧缸(N2∶CO2∶H2为90∶5∶5)培养3~4d。1.2方法菌株复壮和UV诱变:将菌株接种在平板培养基上培养,挑选生长好的菌落,在斜面诱导培养基上连续传代数次,接种液体酶活力基础培养基,测定酶活力。…     

局限青霉生淀粉水解酶的产生条件及酶一般性质的研究

生淀粉水解酶产生菌局限青霉(Penicillium restrictum)127-2是由土壤中分解得到的,具有较强的降解生淀粉能力,水解1g生淀粉需8.0国际单位酶量.Sasaki等曾报道草酸青霉1-9、变幻青霉的培养液能分解生淀粉,但未报道酶的形成条件;Takao等研究了罗尔伏革菌生淀粉酶的形成条件和酶的一般性质.本文介绍局限青霉127-2生淀粉水解酶的形成条件和酶的一般性质.1 材料和方法1.1 菌种培养1.1.1 斜面培养:用查氏琼脂斜面培养基在28—30℃培养5—7天.1.1.2 三角瓶振荡培养:于250ml三角瓶中加40ml发酵培养基,经1kg/cm~2 30分钟灭菌,冷却后接种,置于28—30℃的摇床(200r/min)振荡培养4—5天.1.2 酶活力测定     

海藻酸盐固定化北京丙酸杆菌丙酸发酵的研究

本文报道利用海藻酸钠固定化北京丙酸杆菌,及其丙酸发酵的最适条件。最适海藻酸钠和菌体的起始浓度分别为2％和I00％(w／v)。菌体和海藻酸盐混合滴入CaCl₂：溶液中得到直径为3—4 mm球形颗粒。将固定化细胞放入25ml厌氧管中5 g颗粒/15ml培养基。其成分为(％)：葡萄糖1,酵母膏0．5,CaCI₂0.1。30℃静置培养产生大量的挥发酸,丙酸对乙酸的比例接近10：1。固定化细胞重复利用发酵30次,保持稳定活性65天。