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为了提高长效组织纤溶酶原激活剂(LAtPA)在转基因小鼠乳腺中的表达水平,将受控于羊β乳球蛋白(BLG)的LAtPA表达载体BLGLAtPA与小鼠乳清酸蛋白(WAP)基因片段进行共注射,采用此方法建立的转基因小鼠,经PCR筛选和Southern印迹鉴定,获得3只LAtPA和WAP共整合阳性鼠,并在阳性母鼠乳汁中检测到有溶纤活性的LAtPA表达,表达水平达到10μg/mL。 相似文献
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通过PCR方法从羊肝总DNA中获得了羊-β乳球蛋白(BLG)基因第一和第二内含子,以羊β-乳球蛋白基因(BLG)5’区5kb为调控序列,构建了乳腺表达组织纤溶酶原激活剂突变体载体。对540枚小鼠受精卵进行显微注射,经PCR和Southern blot检测,获得6只整合有人La-tPA的转基因小鼠,整合率为32%。同时研究了转基因在小鼠体内的表达。Northern blot分析表明,在一些转基因鼠乳 相似文献
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用羊β-乳球蛋白基因(BLG)5’区5*10^3b(10^3b,旧称kb)为调序列,构建了乳腺表达组织纤溶酶原激活剂突变体载体。对540枚小鼠受精卵进行显微注射,经PCR和Southernblot检测,获得6只整合有人La-tPA的转基因小鼠,整合率为32%。 相似文献
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为了提高长效组织纤溶酶原活剂(LAtPA)在转基因小鼠乳腺中的表达水平,将受控于羊β-乳球蛋白(BLG)的LAtPA表达载体BLG-LAtPA与小鼠乳清酸蛋白(WAP)基因片段进行共注射,采用此方法建立的转基因小鼠,经PCR筛选和Southern印迹鉴定,获得3只LAtPA和WAP共整合阳性鼠,并在阳性母鼠乳汁中检测到有溶纤活性的LAtPA表达,表达水平达到10μg/mL。 相似文献
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利用所构建的乳腺表达组织纤溶酶原激活剂突变体(La-tPA)载体.对540枚小鼠受精卵进行显微注射,经PCP和Southernblot检测,获得6只整合有人La-tPA转基因小鼠.为了精确研究转基因在小鼠体内的表达,采用RT-PCP方法测定转基因鼠在泌乳期1~20dLa-tPA基因的转录,结果表明,在转基因鼠乳腺的La-tPAmRNA水平在10~15d最高,在20d时降为最低.外源基因在转基因小鼠乳腺的表达规律研究为未来利用转基因动物生产La-tPA提供依据 相似文献
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人组织性纤溶酶原激活物衍生物在大肠杆菌硫氧化还原蛋白融合表达系统中的 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:克隆含tPA中355个氨基酸密码子(1-3和176-527氨基酸)的cDNA序列(tPA355),将其在大肠杆菌融合蛋白表达系统中表达,并在体外复性使其具有激活纤溶酶原的生物活性。方法:采用RT-PCR技术从人黑色素瘤细胞Bowes中克隆出tPA355 cDNA,然后在pET32a(+)BL21(DE3)大肠杆菌表达系统中表达,将表达出的融合蛋白Trx-tPA355(Thioredoxin,Trx)包涵体在体外进行变性、复性和纯化以使其具有激活纤溶酶原的生物活性。结果:测序结果表明本研究克隆的编码tPA中355个氨基酸密码子的cDNA序列与美国专利(公开号:5,587,159)中对应的序列完全一致,将其在pET32a(+)/BL21(DE3)大肠杆菌表达系统中表达可获得稳定表达的融合蛋白Trx-tPA35 相似文献
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张宇清 《国外医学:分子生物学分册》2000,22(6):359-363
纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)是一种多功能蛋白质,除了能有效抑制尿激酶(uPA)和双链组织型纤溶酶原激活物(tPA)而调节纤溶活性外,还参与了很多其它的生理病理过程,例如组织重建、胚胎发育、感染、免疫系统发育、肿瘤浸润和迁移等。更有研究表明胞内型PAI-2在抑制细胞凋亡方面也发挥着重要作用。本文就近年来PAI-2抑制细胞凋亡的研究进展作一综述。 相似文献
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对从HepG2细胞培养液中分离得到植基化和非糖基化PAI-1(1型纤溶酶原激活物抑制剂),以及从pYZHBI-66表达菌中纯化的非糖基化重组PAI-1的某些性质和功能进行比较,结果显示,糖基化PAI-1对tPA(组织型纤溶酶原激活物)有较强的抑制,能较显著地被蛋白质变性剂所激活,对热有较强的稳定性,糖基化与非糖基化PAI-1在pH2.5-9.0的范围内都相当稳定。纤维蛋白原和肝素能明显提高两者对tPA的抑制作用。 相似文献
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应用蝮蛇抗栓酶3号(以下简称Svate—3)治疗心血管病高凝状态24例,剂量1.0u稀释后静滴,qd,3周为一疗程。治疗后患者全血粘度、血浆粘度、血小板聚集率、组织纤溶酶原激活物抑制剂(TPI)、血栓素B2(TXB2)、组织纤维连结蛋白(FN)均有显著下降,而组织纤溶酶原激活剂(TPA)、6-酮前列腺素Fα(6-Keto-PGFα)明显升高。提示,该药治疗心血管病高凝状态有效。 相似文献
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2-型纤溶酶原激活抑制剂(PAI-2)是尿激酶型纤溶酶原激活剂的高效专一抑制剂。PAI-2具有较高的稳定性,可以发生自我聚合。PAI-2可与细胞内的细胞型纤溶酶原激活剂、纤连蛋白、谷氨酶胺转移酶等多种分子发生反应。PAI-2与尿激酶型纤深酶原激活剂的反应遵循丝氨酸蛋白酶抑制剂的作用机制,其自我聚合的发生可能遵循环-片层机制。PAI-2在肿瘤的侵润和扩散、皮肤组织受伤和治疗、炎症以及多种疾病的发生过 相似文献
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重组纤溶酶原激活剂抑制剂-2基因在HT1080亚克隆中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
重组纤溶酶原激活剂抑制剂-2基因在HT1080亚克隆中的表达曹祥荣(南京师范大学生物学系,210024)关键词纤溶酶原激活剂,基因重组,纤溶酶原激活剂抑制剂活性表达目前认为纤溶酶系统是肿瘤细胞浸润和转移蛋白水解过程中重要的酶,纤溶酶能直接水解细胞外间... 相似文献
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t—PA cDNA基因转移与基因治疗 总被引:2,自引:0,他引:2
组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)能够特异、高效地溶解血栓,在纤溶系统中起着重要作用,t-PA与其抑制物(PAI)平衡失调,可导致多种疾病的发生。基因转移技术使外源t-PA cDNA成功地在血管内皮细胞中得以表达,为防治以血栓形成为主要病理变化的血管性疾病开辟了广阔的前景。 相似文献
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经过 75% 饱和度硫酸铵沉淀、 Sephadex G 75 凝胶过滤层析、 Lys Sepharose 4 B 亲和层析和电泳制备洗脱,从华广虻( Tabanus am aenus W alker)腹部组织匀浆液中分离纯化出分子量约为 67k D 的溶纤活性蛋白 T A F P经纤维蛋白平板测定表明, T A F P 只具有纤溶酶作用,不具有激活纤溶酶原的作用;但 T A F P 能分解纤溶酶原激活剂的生色底物—— Chrom ozym U K 及 S 2288还能水解胰蛋白酶专一底物 Bz Phe Val Arg N A 及 C B Z Gly Pro Arg N A,表明 T A F P具有类胰蛋白酶活性,专一水解精氨酸形成的酰胺键(或肽键) T A F P无胰凝乳蛋白酶活性 相似文献
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SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳纤维蛋白自显影法检测不同分子… 总被引:1,自引:0,他引:1
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)纤维蛋白显影方法是经SDS-PAGE将不同分子量的纤溶酶原激活剂(PA)分开,然后再转溶纤维蛋白板使之产生溶带而检测PA物质活性及分大小的方法,此法与Western印迹方法此具有检测更简便、灵敏、快速的特点,且是活性检测,但其分子量分析精度不如Wwestern印迹法。本研究用SDS-PAGE纤维蛋白自显影方法对本室表达的生组组织型-PA及突体N117Q 相似文献
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以 Cytopore 多孔微球固定产重组组织型纤溶酶原激活剂(rt P A) C H O 工程细胞株4 B3 ,在2 L 搅拌式生物反应器用无血清培养基 D F5 S 连续灌流培养。4 B3 细胞的最大活细胞密度和rt P A 生产水平分别达到883 ×106/ m L 和12473 I U/ m L。含rt P A 的4 B3 细胞培养上清经 M P G 吸附层析和 Lysinesepharose 4 B 亲和层析两步纯化,rt P A 的纯度达到98 % 。 相似文献
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组织纤溶酶原激活剂突变体在转基因小鼠乳腺中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
组织纤溶酶原激活剂(tPA)是一种较理想的溶血栓药物,本研究采用其突变体——长效组织纤溶酶原激活剂(LAtPA)的cDNA作为目的基因,将它插入羊β-乳球蛋白(BLG)基因起始密码之前,使LAtPA的转录、翻译受控于BLG基因的5′、3′序列,再将所构建的BLG-LAtPA用显微注射方法建立转基因鼠,经点杂交筛选和Southern印迹鉴定,获得2只LAtPA基因整合阳性鼠,并在阳性母鼠乳汁中检测到有溶纤活性的LAtPA表达,表达水平1.5μg/ml。在这两只转基因鼠的9只F1代子鼠中,有5只是阳性的,tPA表达水平维持在1~2μg/ml,BLGtPA融合基因整合到小鼠基因组,能稳定地遗传给子代。 相似文献