毛细管内均相辣根过氧化物酶(HRP)与核酸杂交偶联HRP 催化化学 发光比较研究

目的:了解毛细管内核酸偶联和游离辣根过氧化物酶(HRP)催化化学发光差异。方法:不同浓度HRP和经核酸杂交固定于毛细管内壁HRP催化化学发光反应。结果:①游离HRP催化化学发光线性检测范围窄(2.7×10-5-1.3×10-6mg/ml,R2>0.96),下限为1.0×10-7mg/ml;②2.0×1014-2.0×106copies/ml的5μl单链DNA杂交后,1.0-10min时DNA浓度M对数(lgM)与化学发光I值线性相关(R2>0.99),且大于阴性I值平均数+3倍标准偏差(s.d);③5.0×1011-5.0×106copies/ml的5μl PCR产物杂交后,10min内PCR产物对数lgM与I值线性相关(R2>0.97),且大于阴性I值平均数+3倍标准偏差(s.d)。4.0-7.0min内lgM与I值的R2>0.99,3次平行检测标准偏差<5.0%。结论:毛细管内核酸杂交的HRP催化化学发光检测线性范围宽、灵敏度高、底物用量少,有望用于临床核酸分子杂交检测。     

热休克蛋白A5介导的自噬在小鼠脑缺血/再灌注损伤中的作用

目的：探讨热休克蛋白A5（HSPA5）诱导的自噬在小鼠脑缺血/再灌注损伤中的作用。方法：将36只BALB/c小鼠随机分为sham、缺血再灌注（I/R）、vehicle + I/R、3-甲基腺嘌呤（3-MA） + I/R、scramble siRNA + I/R和HSPA5 siRNA + I/R组（n=6）。Sham组只进行手术操作,不插入线栓。I/R采用大脑中动脉阻塞（MCAO）60 min后再灌注24 h。Vehicle + I/R组和3-MA + I/R将5μl 0.9% NaCl或3-MA （30 mg/ml）在MCAO前30 min侧脑室注射。scramble siRNA + I/R组和HSPA5 siRNA + I/R组将5μl scramble siRNA或HSPA5 siRNA （2μg/μl）在MCAO前24 h侧脑室注射。检测神经细胞内自噬体、缺血大脑皮层（LC3）-Ⅱ/LC3-I表达、神经元损伤程度及神经功能缺损。结果：显微镜下sham组小鼠大脑皮层神经细胞形态正常;I/R组小鼠缺血大脑皮层神经元胞质中细胞器减少,自噬体形成。与sham组比较,I/R组缺血大脑皮层LC3-Ⅱ/LC3-I蛋白表达水平显著增高（P < 0.05）;与I/R组相比,3-MA + I/R组或HSPA5 siRNA + I/R组缺血大脑皮层LC3-Ⅱ/LC3-I蛋白表达明显减少（P < 0.05）;3-MA + I/R组及HSPA5 siR-NA + I/R组I/R后脑缺血性损伤及神经系统症状加重（P < 0.05）。结论：HSPA5诱导自噬可能在小鼠局灶性I/R损伤中发挥保护作用。     

缺血/再灌注时豚鼠左心室流出道自律组织电活动的改变及药物干预效应

目的：研究缺血/再灌注（I/R）时豚鼠离体左心室流出道自律组织电活动的改变及其药物干预效应。方法：采用标准玻璃微电极细胞内电位记录技术,记录豚鼠离体左心室流出道标本的自发慢反应电位,观测模拟I/R时该电位的改变,以及临床上常用的抗心律失常药物灌流标本时对I/R电生理效应的干预作用。观测指标：4相自动除极速度（VDD）、自发放电频率（RPF）、最大舒张电位（MDP）、0相最大除极速度（V_max）、动作电位幅度（APA）、复极50%和90%时间（APD₅₀和APD₉₀）。结果：①与对照组相比,I 10 min组VDD和RPF明显减慢（P<0.05）,V_max加快（P<0.01）,APA增大（P<0.01）。与I 10 min组和对照组相比,R 2 min组VDD和RPF明显加快（P<0.01）,且在R至5 min过程中可出现明显节律不齐,MDP绝对值明显增大（P<0.05）,V_max与对照组相比明显加快（P<0.05）,APA与I 10 min组相比明显下降（P<0.05）,但仍显著高于对照组（P<0.05）,APD₅₀和APD₉₀显著缩短（P<0.01）。R 15 min组自发慢反应电位各项指标逐渐恢复至对照组水平。②与I 10min/R 2 min组相比,1 μmol/L利多卡因、10 μmol/L普罗帕酮、1 μmol/L胺碘酮、1 μmol/L维拉帕米、50 μmol/L腺苷和10 μmol/L硝普钠均可明显改善R过程中VDD和RPF的改变以及由此引起的节律不齐。结论：I/R可触发左心室流出道自律组织电活动异常,这种效应在应用不同的抗心律失常药物灌流时可显著恢复。     

HBV感染者外周血PBMC中TLR4 mRNA与病毒载量的相关性研究

目的探讨乙型肝炎病毒感染者外周血PBMC中TLR mRNA与乙肝病毒复制的相关性。方法采用逆转录PCR检测外周血单个核细胞（PBMC）中TLR4 mRNA的含量,实时荧光定量Real Time PCR的方法检测HBV DNA,进行相关性分析。结果不同病毒载量组（〈1×103copies/μg DNA,1×103copies/μg DNA〈且〈1×105copies/μg DNA,〉1×105copies/μg DNA）TLR4 mRNA水平差异具有显著性（P〈0.01）,HBV病毒载量的对数值与TLR4 mRNA的含量存在负相关（r=-0.537,P〈0.01）。TLR4 mRNA的相对表达量与患者的ALT、AST呈正相关（r=0.608、r=0.659,P〈0.01）。结论HBV在患者体内复制活跃、病毒载量增高与外周血单个核细胞TLR4mRNA的表达下调有关。     

南海深海微生物酯酶EST12-7在制备(R)-2-氯丙酸乙酯中的应用研究

利用来源南海深海的微生物酯酶EST12-7不对称水解反应拆分制备（R）-2-氯丙酸乙酯。并探寻了温度、pH、底物浓度、有机溶剂和反应时间等因素对酯酶EST12-7催化制备（R）-2-氯丙酸乙酯的影响。结果表明,深海微生物酯酶EST12-7催化制备（R）-2-氯丙酸乙酯的最佳反应条件为：13.8 μg/ml酯酶EST12-7,50 mmol/L（±）-2-氯丙酸乙酯,2%正癸醇,pH8.5,30℃,0.05mol/L Tris-HCl,反应60 min。在最佳反应条件下,（±）-2-氯丙酸乙酯的转化率可达49%,所制备的（R）-2-氯丙酸乙酯的光学纯度为98%。通过对酯酶EST12-7拆分制备（R）-2-氯丙酸甲酯和（R）-2-氯丙酸乙酯进行比较,2-氯丙酸酯中的链长对酯酶EST12-7拆分反应有极大的影响。     

IL-10、IFN-γ调控早孕蜕膜基质细胞活性IL-10受体表达

研究IL-10、IFN-γ对人早孕蜕膜基质细胞活性及IL-10受体表达的影响。MTT法检测蜕膜基质细胞活性,选择两种不同作用浓度的IL-10、IFN-γ作用蜕膜基质细胞,处理15min、30min、45min、60min分别检测组胞IL-10受体R1、R2基因表达。高浓度IL-10(10-100ng/ml)促进蜕膜基质细胞活性(P＜0．05),低浓度IL-10(0．10-lng/ml)则无明显促进作用(P＞0．05);高浓度IFN-γ(1000ng/ml)抑制蜕膜基质细胞活性(P＜0．01),低浓度IFN-γ(10ng/ml)反而起促进作用(P＜0．05)。较高浓度IL-10(10ng/ml)作用15min即见IL-10R1高表达,30min明显减弱,45min表达消失;较低浓度IL-10(lng/ml)作用60min内未见IL-10R1表达。IFN-γ(100ng/ml)作用45min见IL-10R1短暂低表达：较低浓度IFN-γ(10ng/ml)作用30min诱导IL-10R1中表达,45min表达减弱,60min消失。上述细胞因子作用前后IL-10R2表达差异无显著性(P＞0．05)。因此,我们认为,早孕IL-10、IFN-γ可能通过影响蜕膜基质细胞IL-10R1表达及细胞活性,发挥免疫调节作用。     

电热蒸发-催化热解-原子吸收法直接测定茶叶中镉

重金属镉（Cd）一直是茶叶产品质量安全关注的重点。本研究基于电热蒸发-催化热解-原子吸收光谱仪（SS-ETV-AAS）,使用镍材质样品舟,在300 mL/min空气条件下,350 ℃干燥20 s,350~725 ℃灰化55 s;引入300 mL/min氢气与空气反应形成氮氢混合气氛,在725~800 ℃（50 s）下完成Cd的蒸发;之后,在高岭土填料催化热解炉800 ℃和准直管700 ℃条件下,氮氢火焰原子吸收测定镉的含量。方法检出限（LOD）为0.3 ng/g、定量限（LOQ）为1.0 ng/g,R2>0.998,多次测定的相对标准偏差（RSD）为1.8%~8.6%,多种茶叶样品中Cd的测定值与微波消解石墨炉原子吸收光谱法（GFAAS）无显著性差异（P>0.05）,Cd的回收率在92%~107%之间。试验结果表明,该方法灵敏度高、稳定性好、简单高效,且无需消解处理,样品分析时间仅为3min,适用于茶叶中Cd的快速检测。     

预负荷/共同负荷联合血管收缩药在剖宫产术中对母婴血气的影响

目的探讨预负荷/共同负荷联合血管收缩药在剖宫产术中对产妇和新生儿血气的影响。方法将择期剖宫产产妇（ASA I～Ⅱ）,在排除酸中毒（pH〈7.35或BE〈-6）或碱中毒（pH〉7.45或BE〉6）后,随机分为麻黄素组（E组）和去氧肾上腺素组（P组）,每组30例。两组预负荷晶体液乳酸钠林格氏液6～8ml/kg,穿刺到硬膜外间隙时,分别静脉给予麻黄素5mg、去氧肾上腺素100μg。腰麻注药后,两组均输入羟乙基淀粉130/0.4氯化钠溶液10ml/kg（共同负荷）,并分别静脉泵注麻黄素和去氧肾上腺素。观察记录两组产妇的BP、HR、ECG、SpO2,至胎儿娩出即刻查母体和脐动脉血血气,记录新生儿出生后第1min及第5min时的Apgar评分。结果 P组脐动脉血pH、BE值均高于E组（P〈0.05）。结论预负荷/共同负荷联合血管收缩药能有效减少腰麻后低血压的发生,维持产妇血流动力学稳定。去氧肾上腺素比麻黄素能更好地减少新生儿酸中毒的发生。     

异氟烷预处理对大鼠肝缺血再灌注时脑线粒体钙及线粒体转运通道的影响

目的：通过观察在体大鼠肝部分缺血再灌注损伤后脑线粒体游离钙、线粒体转运通道（ mitochondrial permeability transition pore ,MPTP）及外周血中S-100β蛋白含量的变化,明确异氟烷预处理对大鼠肝部分缺血再灌注时脑损伤是否具有保护作用及可能的机制。方法 SD大鼠75只随机分成假手术组（ S组）;缺血再灌注组（ I/R组）：肝缺血60 min,再灌注120 min;异氟烷预处理组（ ISO组）：肝I/R前60 min ISO预处理30 min,后用空气洗脱30 min：CsA＋ISO组,CsA50 mg/kg静脉内注射,30 min后同ISO组;CsA组,I/R前30 min CsA50 mg/kg静脉内注射。再灌注24 h迅速断头取前脑,分离线粒体进行线粒体游离钙、MPTP含量检测,各组分别于缺血前及再灌注120 min后抽取静脉血采用双抗体夹心-ELAISA 法测定 S-100β蛋白含量。结果 I/R组（287.32±26.17）线粒体游离Ca2＋浓度明显增加,高于S组（198.54±21.02）和ISO组（209.74±29.49）（P ＜0.05）;CsA＋ISO（267.31±37.52）明显高于ISO组（ P ＜0.05）;CsA（288.63±23.15）组与I/R组间比较差异无显著意义（ P ＜0.05）;I/R组（1.73±0.24）的ΔS与S组（2.36±0.35）和ISO 组（2.11±0.32）相比明显减少（P ＜0.05）,既MPTP大量开放,而后两组的差异无统计学意义（P ＜0.05）;I/R组与CsA＋ISO组（1.72±0.34）和CsA组（1.77±0.35）△S之间差异无统计学意义（P ＜0.05）;CsA＋ISO组的ΔS值与ISO组相比明显降低（P ＜0.05）。外周血液S-100β蛋白I/R组明显高于S组和ISO组（P ＜0.05）;CsA＋ISO组与ISO组比较显著升高（P ＜0.05）,I/R组,CsA＋ISO组和CsA组与缺血前比较明显升高（ P ＜0.05）,缺血前S-100β蛋白含量五组无显著性差异（ P ＜0.05）。结论大鼠肝部分缺血再灌注后对脑组织造成了一定程度损伤,而异氟烷预处理对此损伤具有一定保护作用;其作用的机制可能与异氟烷抑制MPTP开放,降低线粒体游离Ca2＋浓度,防止了线粒体Ca2＋超载有关。     

δ-阿片受体在缺血后处理心肌保护中的作用

目的：探讨δ-阿片受体是否参与缺血后处理对抗心肌缺血/复灌（I/R）损伤和心肌细胞低氧/复氧（H/R）损伤作用及其机制。方法：采用离体大鼠心脏Langendorff灌流模型,全心停灌30 min、复灌120 min复制I/R模型。测定心室力学指标和复灌时冠脉流出液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性,实验结束测定心肌组织formazan含量。酶解分离的心肌细胞采用低氧60min、复氧60min复制H/R模型,测定心肌细胞存活率。结果：在离体心脏模型上,与I/R组相比,缺血后处理组（停灌后复灌即刻立即给予6次全心停灌/复灌循环）心肌组织的formazan含量明显增高,复灌期间冠脉流出液中LDH明显降低,同时缺血后处理明显改善心室力学指标,缓解冠脉流量的减少 在分离心肌细胞模型上,低氧后处理明显提高心肌细胞存活率。δ-阿片受体阻断剂naltrindole（NTI）和线粒体钙激活钾通道（KCa）阻断剂paxilline（Pax）在离体大鼠心脏模型和分离心肌细胞模型上均能明显减弱缺血后处理的作用。在心肌细胞模型上,与H/R组相比,δ-阿片受体激动剂DADLE明显提高心肌细胞存活率,其作用可被paxilline所阻断。结论：缺血后处理具有抗心肌缺血/复灌损伤的作用,这种保护作用可能与其激活δ-阿片受体和开放KCa有关。     

Capillary electrophoretic immunoassay for alpha-fetoprotein with chemiluminescence detection

A capillary electrophoretic immunoassay with chemiluminescence detection (CEIA-CL) using a non-competitive format for analyzing tumor marker alpha-fetoprotein (AFP) has been developed. In this method, antigen (Ag) AFP reacts with an excess amount of horseradish peroxidase (HRP)-labeled antibody (Ab*). The free Ab* and the bound Ab*-Ag complex produced in the solution are separated by CE in a separation capillary. Then they catalyze the reaction of enzyme substrate luminol and H(2)O(2) in a reaction capillary following the separation capillary. Parameters affecting the CE separation and CL detection were investigated. Under the optimal conditions, the free Ab* and the Ab*-Ag complex were well separated within 4 min, the linear range and the detection limit (S/N=3) for AFP were 5-500 ng/ml and 0.85 ng/ml (1.2 x 10(-11)M), respectively. The proposed method has been applied satisfactorily in the analysis of human sera samples.     

美国白蛾核型多角体病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为了建立对昆虫核型多角体病毒（nucleopolyhedrovirus）进行定量检测方法,本研究选用美国白蛾Hyphantria cunea核型多角体病毒的polyhedrin基因为目的基因,经引物设计、PCR 扩增、目的片段与载体连接转化以及重组质粒的鉴定,并对重组质粒标准品和样品DNA进行检测,构建出美国白蛾核型多角体病毒SYBR GreenⅠ荧光定量标准曲线。统计学分析显示标准品浓度的对数值与Ct 值之间存在良好的线性关系（R=0.998）。该方法的检测灵敏度为10¹～10²拷贝/μL,线性范围达5个数量级,扩增产物形成单一的特异性熔解峰,组内组间的变异系数均小于3%。根据已建立的方法对不同感染时间段的感病幼虫进行检测,每毫克幼虫样本内病毒polyhedrin基因拷贝数增殖倍数对数值与感染时间（d）呈正相关（R=0.987）。这些结果表明,建立的美国白蛾核型多角体病毒荧光定量 PCR检测方法是可靠的,具有灵敏度高、重复性好等特点,可为昆虫核型多角体病毒体内增殖动态研究及昆虫病毒的标准化生产提供参考。     

RP-HPLC法测定重组人生长激素注射液中间甲酚含量

目的：建立测定重组人生长激素注射液中间甲酚含量的方法。方法：采用RP-HPLC法,色谱柱为ShiseidoC4（250mmx4.6mm,5um）,流动相为0.05MTris-HCL（pH7.5）-正丙醇（71：29）,流速0.5ml/min,检测波长为317nm,柱温为40℃。结果：间甲酚在0.2mg-0.8mg/ml（r=0.9996,n=5）浓度范围内与峰面积呈良好线性关系,最低检出线为0.1ng,平均回收率为100.5%（n=9）。结论：本方法准确,重现性好,可为重组人生长激素注射液质量评价提供较为可靠的分析方法。     

伤口愈合肽HPLC分析方法的研究

目的：研究高效液相色谱法（HPLC）分析伤口愈合肽的方法。方法：HPLC测定用Kromasil-C18色谱柱（250mm＊4.6mm,5滋m）,拟确定的色谱条件为：二元线性梯度洗脱,流动相A：0.1%三氟乙酸水溶液;流动相B：0.1%三氟乙酸50%乙腈,流速为1ml/min,检测波长为215nm。结果：线性梯度洗脱条件：起始流动相为A70%：B30%,洗脱最终流动相为A30%：B70%;伤口愈合肽浓度在0.1-0.3mg/ml内,其标准曲线的相关系数为R2=0.9998,回归方程为：y=237.19x-0.3249;日内、日间相对标准偏差都不大于2%;重复性的相对标准偏差都小于药典规定的2.0%。结论：该方法稳定性、重复性良好,符合伤口愈合肽新药研究的实验检测要求。     

高效液相法测定香菇菇柄麦角甾醇的含量

采用高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)建立了测定菇柄麦角甾醇的含量测定方法。确定提取过程中皂化剂的种类和醇碱比后,将样品皂化,萃取后蒸干溶剂,乙醇定容测定。采用Phe-nomenex-C18色谱柱,V(流动相甲醇)∶V(水)=98∶2,流速1.0 mL/min,检测波长282 nm。结果表明:麦角甾醇线性回归方程为Y=9E+9×106X-8919.9(X:质量浓度,mg/mL),R2=0.998 9,0.01~0.30 mg/mL范围内线性关系良好,回收率为97.31%~101.95%。与紫外分光光度法所测结果比较,HPLC法测定菇柄中麦角甾醇含量灵敏、快速、准确,适用菇柄中麦角甾醇的含量测定。     

NASBA方法制备HIV／SHIV RNA定量测定标准品及其应用

目的应用NASBA方法制备SIV／SHIV RNA定量测定标准品。方法应用NASBA方法直接扩增SIVmac251病毒gag基因上1476～1685之间的片段,扩增的RNA产物（RS-NASBA）纯化后10倍系列稀释,测定定量曲线、标准曲线,测定该标准品的稳定性和重复性。结果应用Qiagen公司QuantiTect SYBR GREEN RT-PCRKit,该标准品可精确定量到2．033×10 copies／μL。结论外标准品RS．NASBA纯度高,稳定性好,可用于定量测定SIV／SHIV RNA拷贝数。     

不同采收期荔枝草中黄酮成分含量的动态变化研究

目的:为荔枝草的最佳采收期提供实验依据。方法:采用Lichrospher C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm);0.5%的甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速1.0mL/min,柱温:25℃,检测波长342nm。结果:高车前苷与假荆芥属苷分别在0.0472～0.472μg(r=0.9999)和0.0275～0.275μg(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系。结论:该方法简单,结果准确可靠,重现性好。荔枝草在5月上旬未开花前黄酮含量积累达到最大,可参考作为荔枝草药材的最佳采收期。     

超临界CO2提取茶籽油的工艺及其成分分析

对超临界CO2工艺提取茶籽油进行研究,选择萃取压力、温度、时间、分离釜Ⅰ压力为影响因素,茶籽油的提取率为试验指标,采用多因素多水平可视化分析方法对数据进行分析,得出最佳工艺范围：萃取压力2.5×107～3.0×107Pa、温度30～35℃、时间110～140 min、分离釜Ⅰ压力4.0×106～5.0×106Pa。并用气相色谱-质谱法测定茶籽油中的各个成分及含量,发现茶籽油中单不饱和脂肪酸主要为油酸,多不饱和脂肪酸主要为亚油酸,饱和脂肪酸主要为棕榈酸和硬脂酸。     

表面活性剂增敏——牛血清白蛋白荧光猝灭法测定槐花中芦丁含量

目的：应用牛血清白蛋白荧光猝灭法建立一种测定槐花中芦丁含量的新方法。方法：牛血清白蛋白（BSA）具有很强的内源荧光性,而芦丁溶液本身不产生荧光。当芦丁与BSA结合后,会导致其荧光强度下降,表面活性剂吐温-80（T-80）对体系有促进荧光猝灭作用。BSA在λex=338nm处的荧光猝灭程度与芦丁的量在一定浓度范围内呈良好的线性关系,据此建立测定槐花中芦丁含量的新方法。结果：该结合物的最大发射波长为λmax=338nm,与芦丁摩尔浓度在6×10-7-3.0×10-5mol.L-1范围内线性关系良好。其线性回归方程为ΔF=136.36CRu（×10-5mol.L-1）-0.5454,相关系数r=0.9976,检出限为1.58×10-7mol.L-1,RSD为2.8%-4.3%,加标回收率为97.6%~101.2%。结论：本方法操作简便、快速,用于实际样本的测定,结果满意。     

克伦特罗单克隆抗体的纯化及其生物学特性的研究

目的：将自制克伦特罗（CL）单克隆抗体纯化并研究其生物学特性,进行性质鉴定并建立检测标准曲线。方法：用ELISA法测定克伦特罗单克隆抗体的亲和常数和抗体活性,ELJSA测定单克隆抗体与BSA的交叉反应及与几种结构和功能类似物的交叉反应,然后采用间接竞争ELISA方法建立检测标准曲线。将制备的含克伦特罗单克隆抗体的小鼠腹水用盐析法和免疫亲和柱层析法进行抗体纯化。结果：经ELISA法测定,单克隆抗体亲和常数为2．90×10mmol／L,抗体效价最高达10^6。单克隆抗体对BSA无反应,对几种结构和功能类似物的交叉反应率均小于0．005％。建立的标准曲线R2=0．9812,最低检测限为1．0ng／ml。结论：建立了间接竞争ELISA检测cL的标准曲线。自制的克伦特罗单克隆抗体亲和力好,特异性高。为以后实际样品的检测及制备CL免疫检测试纸条和试剂盒奠定了基础。