基于PCR方法的美国白蛾核型多角体病毒早期检测

根据美国白蛾核型多角体病毒(Hyphantria cunea nucleopolyhedrovirus, HcNPV) pe38基因设计两对引物, 利用PCR法检测HcNPV基因组DNA, 分别扩增出长为994和614 bp的片段, 经测序确定为HcNPV pe38基因片段。应用两对引物分别检测了美国白蛾病虫的总DNA和获得的病毒多角体, 其检测最低量分别为1 fg病虫总DNA和3~4 OBs/mL。用不同浓度的病毒感染试虫后, 不同时间取其血淋巴用PCR方法检测。结果表明, 接毒量为3.53×109 OBs/mL时, 24 h后可检出病毒DNA;接毒量为3~4 OBs/mL时, 120 h后可检出。病毒可检出时间随接毒浓度的递减而延后。     

美国白蛾核型多角体病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为了建立对昆虫核型多角体病毒（nucleopolyhedrovirus）进行定量检测方法,本研究选用美国白蛾Hyphantria cunea核型多角体病毒的polyhedrin基因为目的基因,经引物设计、PCR 扩增、目的片段与载体连接转化以及重组质粒的鉴定,并对重组质粒标准品和样品DNA进行检测,构建出美国白蛾核型多角体病毒SYBR GreenⅠ荧光定量标准曲线。统计学分析显示标准品浓度的对数值与Ct 值之间存在良好的线性关系（R=0.998）。该方法的检测灵敏度为10¹～10²拷贝/μL,线性范围达5个数量级,扩增产物形成单一的特异性熔解峰,组内组间的变异系数均小于3%。根据已建立的方法对不同感染时间段的感病幼虫进行检测,每毫克幼虫样本内病毒polyhedrin基因拷贝数增殖倍数对数值与感染时间（d）呈正相关（R=0.987）。这些结果表明,建立的美国白蛾核型多角体病毒荧光定量 PCR检测方法是可靠的,具有灵敏度高、重复性好等特点,可为昆虫核型多角体病毒体内增殖动态研究及昆虫病毒的标准化生产提供参考。     

昆虫细胞系的培养和建立技术

迄今已经报道的昆虫细胞系有800株以上。昆虫细胞系在昆虫病理学、寄生虫学、内分泌学、遗传学和分子生物学等基础和应用研究中得到越来越广泛的应用。本文结合我们研究的结果和实践经验,概括了国内外昆虫细胞系建立技术的研究进展,包括昆虫细胞培养的发展、昆虫细胞系建立技术、不同昆虫组织来源细胞系的建立方法和过程,以及对昆虫细胞系特征的鉴定等方面。     

松墨天牛成虫标本保存及其DNA提取质量比较

【目的】探讨适合DNA提取的天牛成虫标本保存方法。【方法】采用SDS-蛋白酶K消化法对液氮中冷冻保存、无水乙醇-20℃冷冻保存、无水乙醇室温保存和干标本室温保存且保存时间在2年以上的松墨天牛Monochamus alternates Hope成虫标本基因组DNA进行提取,并对不同保存方式提取的DNA样本进行了质量比较和分析。【结果】在上述常见的松墨天牛成虫标本4种保存方式中,以液氮中冷冻保存效果最佳,其次为无水乙醇-20℃冷冻保存,插针干标本室温保藏效果最差。利用昆虫线粒体基因CO I和CO II的通用引物从上述DNA中均能够成功扩增出目的片段,测序结果证实扩增片段符合预期。【结论】液氮和无水乙醇-20℃冷冻保存适合松墨天牛成虫标本长期保存,且不影响后续的PCR扩增和测序。     

虫生真菌中对松墨天牛高毒性蛋白的筛选及性质测定

从6株虫生真菌中分离纯化了48种蛋白。以松墨天牛Monochamusalternatus为试虫,通过 生测筛选出4种高毒性蛋白,并从4种高毒性蛋白中筛选出毒力最强的蛋白Bb36W-D。蛋白Bb36W D含2个亚基,大亚基和小亚基的分子量分别约为24 kD和17 kD;等电点分别为9.47和9.32 。该蛋白含16种氨基酸,其中精氨酸、组氨酸及丙氨酸含量较高。     

布拉酵母菌对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的疗效

目的探讨布拉酵母菌在高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠模型中的疗效及机制。方法 36只雄性SD大鼠随机分为3组:A组(普通饲料组)、B组(高脂饲料组)和C组(高脂饲料+布拉酵母菌组)。实验第6周起,C组给予布拉酵母菌散10 mg/kg灌胃。第16周末进行肝脏病理分析和血清空腹ALT、AST、脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、脂联素以及丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性测定;检测粪便中双歧杆菌、乳杆菌、肠球菌和大肠埃希菌数量,分析菌群与LPS相关性。结果与A组相比,模型B组肝脏脂肪变性程度和肝脏炎症显著增加,粪便菌群发生紊乱;与B组相比,C组脂肪变性及炎症程度积分显著减轻,血清ALT、AST、LPS、TNF-α及MDA显著下降,脂联素水平和SOD活性增高,大鼠粪便中乳杆菌、双歧杆菌和肠球菌数量明显增高,大肠埃希菌显著降低;乳杆菌、双歧杆菌和肠球菌与LPS负相关,大肠埃希菌与LPS正相关。结论布拉酵母菌可通过调整肠道菌群结构,减少炎性因子释放,拮抗脂质过氧化,改善肝脏脂肪变性及炎症。     

噻托溴铵联合布地奈德福莫特罗对慢性阻塞性肺疾病的疗效及对TGF-β、TIMP-1、IL-6水平的影响

目的:探讨噻托溴铵联合布地奈德福莫特罗治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的临床疗效及对转化生长因子-β(TGF-β)、基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)及白细胞介素-6(IL-6)水平的影响。方法:选取我院于2016年1月至2016年12月期间收治的80例稳定期的COPD患者,按乱数表法分为对照组和观察组,两组均为40例。两组患者均进行常规治疗和布地奈德福莫特罗吸入治疗,观察组在此基础上加用噻托溴铵吸入剂。连续治疗12周后对两组患者的临床疗效、肺功能、血气指标、细胞因子水平进行评价。结果:观察组患者总有效率高于对照组(P0.05)。治疗后,观察组肺功能指标用力肺活量(FVC)、一秒用力呼气容积(FEV1)、第一秒用力呼气容积占用力肺活量比值(FEV1/FVC)、动脉血氧分压(PaO_2)和动脉血二氧化碳分压(PaCO_2)改善程度均优于对照组(P0.05)。治疗后观察组患者血清中IL-6、TIMP-1及TGF-β水平均低于对照组(P0.05)。结论:噻托溴铵与布地奈德福莫特罗的联合治疗稳定期的COPD患者疗效显著,并且能够有效改善患者肺功能和血气指标,降低血清TGF-β、TIMP-1及IL-6水平,值得临床推广使用。     

舞毒蛾卵寄生蜂大蛾卵跳小蜂发育与温度的关系及利用替代寄主柞蚕卵繁育的子代品质评价

舞毒蛾Lymantria dispar (L.)是国际性检疫害虫。大蛾卵跳小蜂Ooencyrtus kuwanae (Howard)是舞毒蛾卵的重要寄生蜂, 对舞毒蛾有一定的控制作用。为了在规模化繁育大蛾卵跳小蜂时控制小蜂的发育进度, 设置不同的温度梯度研究了该蜂发育与温度的关系; 同时, 为了对替代寄主繁育出的天敌质量进行评价, 对利用其自然寄主舞毒蛾卵和替代寄主柞蚕Antheraea pernyi卵繁育出的子代成蜂的寿命、 胸宽、 雌雄性比进行了比较。结果显示： 大蛾卵跳小蜂的发育起点温度和有效积温分别为10.50±1.41℃和260.74±25.09日·度, 温度与发育速率的关系为T=10.50+260.74V。当采用30%的蜂蜜水饲喂成蜂时, 柞蚕卵繁育出的大蛾卵跳小蜂雌、 雄蜂的平均寿命分别为15.01和10.38 d, 采用原寄主舞毒蛾卵繁育出的雌、 雄蜂平均寿命分别为20.94和15.95 d, 两者差异显著; 采用柞蚕卵繁育出的雌蜂个体显著大于用舞毒蛾卵繁育出的雌蜂个体; 柞蚕卵和舞毒蛾卵繁育出的大蛾卵跳小蜂雌雄性比没有显著差异, 分别为2.42∶1和2.57∶1。结果表明, 在野外开展舞毒蛾的生物防治时, 释放利用柞蚕卵繁育出的大蛾卵跳小蜂具有可行性。