微小RNA-451a对胰腺癌BxPc3细胞增殖、侵袭及迁移的影响

摘要 目的：研究微小RNA（miR）-451a对胰腺癌BxPc3细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法：体外培养BxPc3细胞,将不同浓度（50、100 和 200 μmol/L）miR-451a模拟物（mimic）转染至胰腺癌细胞株BxPc3中,利用荧光定量聚合酶链式反应（ PCR）法检测miR-451a的表达,MTT增殖实验检测不同浓度miR-451a对细胞增殖的影响,细胞划痕实验检测不同浓度miR-451a对细胞迁移能力的影响,Transwell实验检测不同浓度miR-451a对细胞侵袭能力的影响。Western blot法检测不同浓度 miR-451a转染后BxPc3细胞p-PI3K、p-AKT、TGF-β和p-smad2/3 蛋白的表达情况。结果：转染不同浓度miR-451a mimic后,胰腺癌BxPc3细胞内miR-451a的相对表达量明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。过表达miR-451a后,BxPc3细胞的增殖能力明显减弱,细胞迁移能力明显减弱,细胞侵袭能力明显减弱,差异均有统计学意义（P<0.05）。相比于0 μmol/L 组,转染50、200 μmol/L miR-451a后BxPc3 细胞p-PI3K、p-AKT、TGF-β和p-smad2/3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,并且p-PI3K、p-AKT、TGF-β和p-smad2/3蛋白表达水平变化具有浓度依耐性。结论：miR-451a能抑制胰腺癌BxPc3细胞株的增殖、迁移、侵袭能力。     

转化生长因子β1影响三阴性乳腺癌顺铂耐药的机制研究

摘要 目的：建立三阴性乳腺癌MDA-MB-231/顺铂（DDP）耐药细胞株,探讨转化生长因子β1（TGF-β1）调控三阴性乳腺癌DDP耐药的机制。方法：采用小剂量间歇诱导法建立MDA-MB-231耐药细胞株（MDA-MB-231/DDP）,在MDA-MB-231/DDP中构建TGF-β1沉默细胞并分为TGF-β1沉默组（sh-TGF-β1）、阴性对照组以及对照组,实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测TGF-β1含量。另取MDA-MB-231细胞和MDA-MB-231/DDP细胞分为MDA-MB-231组（正常培养MDA-MB-231敏感细胞）、MDA-MB-231-DDP组（正常培养MDA-MB-231 DDP耐药细胞）、TGFβ1-shRNA组（MDA-MB-231 DDP细胞转染TGFβ1-shRNA慢病毒载体）和MDA-MB-231-DDP+3-MA组（MDA-MB-231 DDP细胞给予5mM 3-MA处理2 h）。细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测耐药株的半数抑制浓度（IC₅₀）,并计算耐药指数及逆转耐药指数,RT-qPCR检测TGF-β1含量,蛋白印迹法（Western blot）检测TGF-β1、自噬相关蛋白LC3-I、LC3-II表达量,激光共聚焦显微镜观察自噬流的变化,应用SPSS 20.0软件进行统计分析。结果：成功建立DDP耐药细胞株MDA-MB-231/DDP,耐药指数为5.231;MDA-MB-231/DDP细胞的TGF-β1 mRNA表达和蛋白表达较MDA-MB-231细胞显著上调（P<0.05）。DDP耐药细胞MDA-MB-231/DDP中自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I表达较MDA-MB-231细胞显著升高（P<0.05);应用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）后MDA-MB-231/DDP细胞自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I表达显著下降（P<0.05);沉默MDA-MB-231/DDP细胞的TGF-β1基因后,DDP耐药细胞株的耐药指数从5.231下降到3.404,同时自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I表达降低（P<0.05）,且激光共聚焦显微镜观察到黄色和红色斑点的显著减少,表明自噬受到抑制。结论：TGF-β1与三阴性乳腺癌DDP耐药有关,其机制可能是增加自噬引起MDA-MB-231细胞DDP耐药。通过沉默TGF-β1可降低自噬水平,恢复三阴性乳腺癌细胞对DDP的敏感性。     

幽门螺杆菌感染激活NF-κB信号通路促进胃癌SGC-7901细胞炎症因子释放

为了探讨幽门螺杆菌对胃癌SGC-7901细胞炎症因子释放的影响,本研究将幽门螺杆菌感染SGC-7901细胞后,采用细胞计数盒(CCK-8)检测SGC-7901细胞活力,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测炎症因子TNF-α、IL-1β以及IL-8的水平,Real-time PCR检测细胞TNF-α、IL-1β以及IL-8 m RNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测NF-κB信号通路相关蛋白NF-κB p65蛋白表达以及IκBα磷酸化水平。研究结果表明,幽门螺杆菌感染后,SGC-7901细胞活力显著增加;幽门螺杆菌感染明显上调SGC-7901细胞TNF-α、IL-1β以及IL-8 mRNA的表达;本研究还进一步发现幽门螺杆菌感染显著增加SGC-7901细胞TNF-α、IL-1β以及IL-8的水平;此外,幽门螺杆菌处理的SGC-7901细胞,其NF-κB p65的蛋白表达以及IκBα磷酸化水平均显著上调。本研究的结论初步表明,幽门螺杆菌感染促进胃癌SGC-7901细胞炎症因子的释放,其机制可能涉及激活NF-κB信号通路。     

Sfrp1通过阻断Wnt信号通路减轻血管紧张素Ⅱ诱导的心脏损伤并促进自噬的研究

摘要 目的：本研究旨在评估Sfrp1在血管紧张素II诱导的心肌肥厚中的心脏保护作用，并探讨其与自噬和Wnt信号通路相关的可能机制。方法：利用重组AAV9载体将Sfrp1导入Ang II诱导的肥厚型H9C2心肌细胞。用CCK8测定细胞活力。流式细胞仪检测细胞凋亡率。用显微照片记录肥厚细胞大小的变化。western blot检测Sfrp1、Bcl-2、Bax、CytC、Caspase-3、P62、ATG5、Beclin、LC3、β-catenin和DVL1的蛋白表达。通过qRT-PCR检测β-连环蛋白和DVL1的mRNA表达。自噬抑制剂3-MA也用于验证治疗过程中自噬的参与。结果：（1）Sfrp1成功转染H9C2细胞，其过度表达减轻了心肌肥厚。（2）经过AAV9-Sfrp1预处理可减少肥厚心肌的细胞凋亡，可逆转Ang II组自噬相关蛋白（p62、ATG5、Beclin、LC3）的表达；（3）自噬在治疗心肌肥厚过程中的作用通过可自噬抑制剂3-MA来证实。（4）激活的Wnt信号（β-连环蛋白，DVL1）也被AAV9-Sfrp1抑制。结论：Sfrp1通过Wnt信号通路促进细胞自噬，从而保护心肌细胞免受肥厚性损伤和凋亡，这为Sfrp1对心肌肥厚的心肌保护作用机制提供了一个重要的视角。     

人β防御素-2通过TGF-β/Smad信号通路对胃癌SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响

该文探讨了人β防御素-2(hBD2)对胃癌SGC7901细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。将真核表达载体pCMV-hBD2转染于人胃癌SGC7901细胞。采用qPCR和免疫印迹法(Western blot)检测转染效率。Western blot检测TGF-β1、p-Smad2/3、Smad2/3、MMP9的蛋白表达水平。Transwell法检测SGC7901细胞迁移和侵袭能力。EdU法和流式细胞术分别检测增殖能力与细胞周期。结果显示,转染真核表达载体pCMV-hBD2的SGC7901细胞, hBD2的表达水平明显高于SGC7901和转染pCMV-Blank的SGC7901细胞。SGC7901-hBD2细胞中TGF-β1、p-Smad2/3和MMP9的蛋白表达水平均低于SGC7901和SGC7901-Blank细胞,而Smad2/3表达水平不变。同时,其迁移侵袭和增殖能力均受到抑制,细胞周期G0/G1期阻滞。该实验结果表明, hBD2可能通过下调TGF-β/Smad信号通路调控SGC7901细胞的迁移侵袭以及增殖能力。     

维生素C对万古霉素诱导大鼠肾损伤自噬的作用

摘要 目的：探讨维生素C对万古霉素诱导肾损伤自噬水平的影响。方法：将20只雄性SD大鼠随机分为：对照组、万古霉素组、万古霉素+维生素C组和维生素C组。万古霉素组：连续每天腹腔注射400 mg/kg万古霉素;万古霉素+维生素C组：注射万古霉素之前30 min腹腔注射200 mg/kg维生素C;对照组和维生素C组分别单独注射同体积的生理盐水和200 mg/kg维生素C。连续给药7 d后,通过苏木精-伊红染色（HE）观察大鼠肾组织病理损伤;免疫组化和免疫荧光检测肾组织中LC3B和Beclin 1的表达情况,比较各组之间的表达差异。结果：相对于对照组,万古霉素诱导大鼠肾损伤模型组肾组织出现明显的病理改变,包括肾间质水肿,肾小管细胞质空泡性变化,细胞凋亡坏死等;同时观察到肾组织中LC3B光密度明显升高和Beclin 1的荧光强度显著增强。维生素C处理组,肾组织的病理损伤显著改善并且自噬相关蛋白LC3B和Beclin 1的表达显著降低。相对于对照组,维生素C单独处理组肾组织损伤和自噬相关蛋白的表达无明显变化。结论：维生素C可降低自噬相关蛋白LC3B和Beclin 1的表达,缓解万古霉素诱导的大鼠肾损伤。     

胃癌组织中microRNA-148a-3p的表达及临床意义

目的探究胃癌组织中microRNA-148a-3p的表达水平及其临床意义。方法随机选取行手术治疗的胃癌患者60例,采用qRT-PCR检测胃癌与癌旁组织中miR-148a-3p的表达水平,采用免疫组化检测胃癌组织中LC3与Beclin 1的表达,统计分析胃癌组织中miR-148a-3p表达水平与临床病理特征及LC3、Beclin 1表达的相关性。采用脂质体法在SGC-7901细胞中转染miR-148a-3p并使用免疫荧光实验检测LC3的定位,Western blot检测LC3及Beclin1的表达量。结果胃癌组织中miR-148a-3p表达水平显著低于癌旁组织,并且与胃癌肿瘤大小、肿瘤淋巴结转移情况、临床分期具有相关性,且与LC3及Beclin 1的表达呈负相关。过表达miR-148a-3p后SGC-7901细胞中LC3荧光斑点的数量显著减少,并且LC3Ⅱ与LC3Ⅰ表达量的比值及Beclin1表达量均显著降低。结论 miR-148a-3p的低表达可能参与了胃癌的恶性演进,并且miR-148a-3p可能通过抑制细胞自噬发挥抗肿瘤作用。     

MiR-21靶向调控Mfn2对缺血再灌注损伤肾小管上皮NRK-52E细胞自噬及凋亡的影响

摘要 目的：探讨miR-21对缺血再灌注损伤肾小管上皮细胞自噬及凋亡的影响及其与线粒体融合素2（mitochondria fusion protein mitofusin2,Mfn2）的靶向关系。方法：将大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK-52E细胞按处理方式不同分组：I/R+control mimics组（转染control mimics后缺氧3 h/复氧3 h）,I/R+miR-21mimics组（转染miR-21mimics后缺氧3 h/复氧3 h）,I/R组（缺氧3 h/复氧3 h）及对照组（正常培养）。选取30只Sprague-Dawley(SD)大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌注模型组(I/R组)。取大鼠肾组织进行HE染色,自动生化分析仪检测大鼠血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）,四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞增殖能力,TUNEL法检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR检测细胞自噬和凋亡相关基因LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin1、Bcl-2、Bax及Mfn2 mRNA表达,Western blot法检测细胞自噬和凋亡相关蛋白的表达,荧光素酶实验验证miR-21与Mfn2的靶向关系。结果：Sham组大鼠血清BUN、Cr水平,大鼠肾组织细胞凋亡率高于I/R组（P<0.05）。I/R组大鼠肾组织肾小管结构紊乱,大量炎症细胞浸润。Sham组大鼠肾组织miR-21水平高于I/R组（P<0.05）。48 和 72 h 时,I/R+miR-21 mimics组细胞活力明显低于I/R+control mimics组,I/R组及对照组（P<0.05）,I/R组细胞活力低于对照组（P<0.05）。I/R+miR-21mimics组凋亡率显著高于I/R+control mimics组,I/R组及对照组（P<0.05）,I/R组凋亡率显著高于对照组（P<0.05）。与对照组比较,I/R组细胞Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Bax蛋白及基因mRNA表达量升高,Bcl-2蛋白及基因mRNA表达量降低（P<0.05）;与I/R组比较,I/R+miR-21mimics组细胞Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Bax蛋白及基因mRNA表达量升高,Bcl-2蛋白及基因mRNA表达量降低（P<0.05）。miR-21与Mfn2具有靶向关系。结论：miR-21可靶向Mfn2促进肾缺血再灌注损伤引起的凋亡及自噬。     

探讨As2O3诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中AKT相关 抗凋亡通路表达情况

目的:探讨三氧化二砷诱导胃癌细胞凋亡过程中,对AKT相关抗凋亡通路表达的影响。方法:分别用不同浓度(0μmol/L、7.5μmol/L、10μmol/L、12.5μmol/L和15μmol/L)三氧化二砷(As_2O_3)溶液处理胃癌细胞48 h,倒置显微镜观察细胞凋亡情况,并用Western blot方法检测p70S6kα、p-p70S6kα、p70S6kβ(S6蛋白激酶β,Ribosomal Protein S6 Kinaseβ)、p-p70S6kβ、rpS6、p-rpS6、p-BAD、BAD、p-GSK3β、GSK3β及NF-κB2等蛋白的表达情况与As_2O_3作用浓度之间的关系。结果:随As_2O_3作用细胞的浓度增大,p70S6kα、p-p70S6kα、p70s6kβ、p-p70S6kβ、p-BAD、p-GSK3β、NF-κB2蛋白的表达减少,rpS6、p-rpS6、GSK3β蛋白表达增多,各组间数据经统计学分析,P值均0.05,具有统计学意义。BAD蛋白的表达无明显改变,P0.05。结论:As_2O_3诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡机制中包括AKT相关的多个抗凋亡途径的激活,AKT在其中发挥重要作用。     

藻蓝蛋白对非小细胞肺癌细胞移植瘤生长的抑制及促凋亡作用的机制研究

摘要 目的：探讨藻蓝蛋白对非小细胞肺癌细胞移植瘤生长的抑制及促凋亡作用的机制研究。方法：4~6周龄30只无胸腺BALB/c裸鼠随机分为移植瘤组和藻蓝蛋白组。每5天用卡尺测量裸鼠肿瘤体积。通过RT-PCR检测裸鼠肿瘤中凋亡相关因子MMP-2、MMP-9、Bcl-2、Bax的mRNA表达。通过流式细胞术分析细胞周期。通过蛋白印迹分析EMT相关蛋白的表达。通过ELISA检测血浆细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β和TGF-β的浓度。通过蛋白印迹分析STAT3/NF-κB信号通路的表达。结果：第13天时,移植瘤组和蓝藻蛋白组肿瘤大小比较无差异（P>0.05）,第18天和第25天时,藻蓝蛋白组肿瘤体积较移植瘤组减小（P<0.05）。藻蓝蛋白组MMP-2、MMP-9和Bcl-2的mRNA表达较移植瘤组降低（P<0.05）,藻蓝蛋白组Bax mRNA表达较移植瘤组升高（P<0.05）。藻蓝蛋白组G1期占比较移植瘤组升高（P<0.05）,藻蓝蛋白组G1期占比较移植瘤组升高（P<0.05）,藻蓝蛋白组S期和G2期占比较移植瘤组降低（P<0.05）。藻蓝蛋白组N-钙粘蛋白和VEGF蛋白表达较移植瘤组降低（P<0.05）,藻蓝蛋白组E-钙粘蛋白表达较移植瘤组升高（P<0.05）。藻蓝蛋白组TNF-α、IL-6、IL-1β和TGF-β的浓度较移植瘤组降低（P<0.05）。藻蓝蛋白组p-STAT3、p-IκBα和p-NF-κB p65蛋白表达较移植瘤组降低（P<0.05）。结论：藻蓝蛋白通过调控STAT3/ NF-κB信号通路抑制炎性细胞因子的分泌和EMT发生,促进肿瘤细胞凋亡,抑制裸鼠体内移植瘤的生长。     

糖尿病诱导serpinE1分泌增多对心肌细胞NF-κB核易位及凋亡的影响

摘要 目的：探讨糖尿病诱导serpinE1分泌增多是否引起心肌细胞NF-κB核易位及凋亡。方法：8周龄C57BL/6J小鼠随机分为对照组和糖尿病组,糖尿病模型应用链脲佐菌素腹腔注射诱导。体外试验中,应用低糖（5.5 mmol/L）及高糖（25 mmol/L）浓度培养基分别处理大鼠心肌H9C2细胞。ELISA法分别检测小鼠血清及细胞培养上清中的serpinE1水平,Western Blot分别检测心脏组织及细胞中 caspase-3、cleaved caspase-3以及细胞浆、细胞核中NF-κB蛋白表达。此外,H9C2细胞分为三组：对照组、serpinE1重组蛋白处理组、JSH-23与serpinE1重组蛋白共同处理组,Western Blot检测上述相同指标。结果：糖尿病小鼠血清及高糖处理的细胞培养上清中serpinE1水平较对照组显著增加(P<0.05)。同对照组相比,细胞核/细胞浆NF-κB、cleaved caspase-3/ caspase-3在糖尿病小鼠心肌组织及H9C2细胞高糖处理组中显著上升(P<0.05)。此外,serpinE1重组蛋白处理后细胞核/细胞浆NF-κB以及cleaved caspase-3/ caspase-3同对照组相比,均显著增加(P<0.05),而JSH-23则减弱了serpinE1的这些效应。结论：糖尿病诱导serpinE1分泌增多促进心肌细胞NF-κB核易位及凋亡。     

Smurf1对增生性瘢痕纤维化形成的影响及分子机制

摘要 目的：探究Smurf1对增生性瘢痕形成中纤维化进程的影响及分子机制。方法：收集2021年6月至2022年6月空军军医大学第二附属医院烧伤整形科行增生性瘢痕切除手术患者的瘢痕组织及正常皮肤标本各12例,采用HE和Masson染色进行病理学检查。取增生性瘢痕组织无菌处理后,采取组织块法分离培养获取人增生性瘢痕成纤维细胞（HSF）。将HSF细胞按照实验方案分组,（1）Smurf1过表达分组：对照1组（Con-1组）,空载体组（Vector组）和Smurf1过表达组（OE-Smurf1组）;（2）Smurf1干扰表达分组：对照2组（Con-2组）,阴性组（si-NC组）,Smurf1干扰表达组（si-Smurf1组）。再分别将pcDNA3.1空质粒、pcDNA3.1+Smurf1质粒、si-NC和si-Smurf1转染至Vector组、OE-Smurf1组、si-NC组和si-Smurf1组HSF细胞。通过qRT-PCR检测Smurf1表达水平,Western blot检测蛋白表达水平,CCK-8检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Transwell实验检测细胞侵袭水平,细胞划痕实验检测细胞迁移水平。结果：HE染色和Masson染色结果显示,与正常皮肤组织相比,增生性瘢痕组织的真皮层厚度显著增加,真皮层中存在大量被染成蓝色的胶原纤维,排列紊乱且致密。与正常皮肤组织相比,增生性瘢痕组织中TGF-β1、α-SMA、COL1、COL3、TβR-I、p-Smad3和Smad7的蛋白表达水平均升高（P<0.05）,Smurf1表达水平降低（P<0.05）。与Con-1或Vector组比较,OE-Smurf1组HSF细胞中TGF-β1、α-SMA、COL1、COL3、TβR-I、p-Smad3和Smad7蛋白的表达水平均降低（P<0.05）,HSF细胞增殖、侵袭和迁移水平降低（P<0.05）,凋亡水平升高（P<0.05）。与Con-2组或si-NC组比较,si-Smurf1组HSF细胞中TGF-β1、α-SMA、COL1、COL3、TβR-I、p-Smad3和Smad7蛋白的表达水平均升高（P<0.05）,HSF细胞增殖、侵袭和迁移水平升高（P<0.05）,凋亡水平降低（P<0.05）。结论：Smurf1可能通过抑制TGF-β1/Smad通路,进而抑制增生性瘢痕的纤维化进程。     

三种固定液对两种氧化应激细胞模型Bclin1和LC3蛋白免疫荧光染色的影响

摘要 目的：比较采用三种不同的固定液对两种氧化应激细胞模型Beclin1和LC3蛋白免疫荧光染色的影响。方法：本研究使用丙酮/甲醇（1:1）固定液、甲醇固定液和4%多聚甲醛三种固定液分别对氧化应激细胞模型大鼠原代心肌成纤维细胞和MCF-7乳腺癌细胞株进行固定,然后再分别进行免疫荧光双染实验,对比三种固定液固定后对自噬关键调控蛋白Beclin1和LC3染色效果。结果：三种固定液对氧化应激细胞模型Beclin1和LC3蛋白免疫荧光染色结果存在较大差异。丙酮/甲醇（1:1）固定液固定后免疫荧光染色效果最佳,细胞结构清晰可见,两种蛋白定位表达清晰,甲醇固定液次之,4%多聚甲醛固定液效果欠佳。结论：在对大鼠原代心肌成纤维细胞和MCF-7乳腺癌细胞进行自噬相关蛋白免疫荧光双染色实验中,在使用其它固定液染色效果不佳的情况下,可以选择应用丙酮/甲醇（1:1）固定液固定,再进行免疫荧光染色;根据不同实验需求相应选择更适宜的固定液,以达到最佳的荧光染色结果。     

基于JAK2/STAT3信号通路探讨白藜芦醇对骨肉瘤MG-63细胞凋亡及迁移的影响

摘要 目的：研究白藜芦醇(RES)通过蛋白酪氨酸激酶2/信号转导子与激活子3（JAK2/STAT3）信号通路对人骨肉瘤体外细胞株MG-63细胞凋亡、侵袭和迁移的影响。方法：体外培养MG-63细胞,以不同浓度的RES作用于MG-63细胞。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测不同时间和不同浓度的RES对MG-63细胞凋亡的影响。划痕实验和Transwell实验检测不同时间和不同浓度的RES对MG-63细胞侵袭和迁移能力的影响。免疫印迹实验检测不同时间和不同浓度的RES对MG-63细胞磷酸化蛋白酪氨酸激酶2（p-JAK2）、磷酸化信号转导子与激活子3（p-STAT3）、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2家族促凋亡蛋白（Bax）及基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9表达的影响。结果：RES浓度越高,时间越久,MG-63细胞凋亡率越高（P<0.05）。RES浓度越高,MG-63细胞迁移和侵袭能力越弱(P<0.05)。RES处理MG-63细胞后其p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2以及MMP-2、MMP-9的表达明显降低,而Bax蛋白表达明显升高,且p-JAK2、p-STAT3、Bax、Bcl-2以及MMP-2、MMP-9的表达水平变化具有RES浓度依赖性（P<0.05）。结论：RES可能通过调控JAK2/STAT3信号通路促使人骨肉瘤MG-63细胞凋亡,并抑制MG-63细胞侵袭和迁移。     

KGF联合HIF-1α对BECN1敲除IEC-6细胞缺氧的保护作用及机制

摘要 目的：探讨KGF联合HIF-1α对BECN1敲除后的IEC-6细胞在缺氧应激状态下的保护作用及相关机制。方法：构建敲除BECN1基因的稳定细胞系IEC-6B-细胞,分为空白对照组（BC）、阴性对照组（NC）、HIF-1α组、KGF联合HIF-1α组（KH）。观察细胞形态学改变。检测细胞存活率、ATP含量、细胞周期和细胞凋亡率。检测自噬相关基因表达水平和凋亡、自噬相关蛋白的表达。结果：低氧处理24 h后,各组细胞可见梭形、星形及其它异常形态变化;NC组细胞胞质内可见大量大小不一的吞噬溶酶体泡;其他各组细胞呈现细胞早期凋亡形态变化,BC组和KH组细胞胞质中可见自噬泡。与BC组相比较,各敲除组细胞存活率均显著降低（P<0.01）,其中KH组细胞存活率高于NC组、KGF组及HIF-1α组（P<0.05）。BC组细胞内ATP含量均显著高于其他各组（P<0.05）。与BC组和KH组比较,其他三组细胞G0/G1期百分比显著增加,细胞凋亡率均显著增加（P<0.05）。与BC组相比较,其余各组细胞自噬基因BECN1、SQSTM1及LC3基因mRNA表达均显著降低（P<0.05）;Beclin 1蛋白及LC3 II/LC3 I的比值均显著降低（P<0.05）,且p62蛋白表达显著增加（P<0.05）。KH组的Bax/Bcl-2的比值、Caspase3蛋白表达低于NC组（P<0.05）。结论：KGF联合HIF-1α能促进细胞增殖、增强细胞能量代谢、减少G₀/G₁期阻滞细胞率、抑制细胞凋亡作用,对低氧应激的IEC-6B-细胞具有保护作用。     

白藜芦醇通过Pi3K/AKT 通路抑制胃癌SGC-7901 细胞增殖和迁移

目的:验证白藜芦醇是否可以抑制胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移及其信号通路。方法:用不同浓度白藜芦醇干预SGC-7901细胞,再用LY-294002和IGF-1分别用来抑制和激活Pi3K/AKT通路。MTT法测细胞增殖,划痕试验和Transwell试验测细胞迁移,Western blot检测细胞迁移相关蛋白(MMP-2、MMP-9)、细胞迁移相关蛋白(P21、P27)、以及AKT、p-AKT的表达情况;结果:相比于对照组,白藜芦醇组胃癌细胞增殖和迁移减弱(P=0.001),p-AKT表达减少(P0.001);LY-294002可以抑制p-AKT的表达(P=0.004),和白藜芦醇一样可以抑制胃癌细胞的增殖和迁移;IGF-1可以显著增加p-AKT的表达(P0.001),可以逆转白藜芦醇对胃癌细胞增殖和迁移的抑制作用。结论:白藜芦醇通过抑制Pi3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞增殖和迁移。     

miR-29a对于膝关节骨性关节炎大鼠滑膜损伤中的保护作用研究

摘要 目的：探讨miR-29a对于膝关节骨性关节炎（KOA）大鼠滑膜损伤中的保护作用研究。方法：采用前交叉韧带横断法（ACLT）建立KOA大鼠模型。大鼠注射microRNA阴性对照和miR-29a。通过实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测KOA滑膜组织和滑膜细胞中miR-29a的表达。RT-qPCR和蛋白免疫印迹试验检测Toll样受体4/髓样分化蛋白88/核因子κB（TLR4/Myd88/NF-κB）信号通路相关蛋白的表达。检测KOA滑膜组织及滑膜细胞中炎症因子的表达水平。结果：KOA滑膜组织和滑膜细胞中miR-29a表达下调。上调miR-29a可抑制KOA大鼠滑膜细胞的炎症反应,促使KOA大鼠的TLR4/Myd88/NF-κB信号通路失活。结论：上调miR-29a可通过TLR4/Myd88/NF-κB信号通路失活化抑制KOA大鼠滑膜细胞炎症反应,从而保护滑膜损伤。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨miR-613对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移与侵袭的影响

摘要 目的：研究基于Wnt/β-catenin信号通路探讨微小RNA（miR）-613对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法：体外培养宫颈癌SiHa细胞和正常宫颈上皮细胞H8,检测细胞中miR-613表达。根据转染miR-613 mimic浓度不同,将SiHa细胞分为0 μmol/L组,100 μmol/L和200 μmol/L组。MTT法检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。蛋白免疫印迹法检测miR-613表达对Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin、Vimentin、E-cadherin和MMP9表达的影响。结果：宫颈癌SiHa细胞中miR-613表达水平均显著低于正常宫颈上皮细胞H8,差异有统计学意义(P<0.05)。转染miR-613 mimic后,100 μmol/L、200 μmol/L 组SiHa细胞中miR-613表达水平显著上调,并且具有浓度依赖性(P<0.05)。与0 μmol/L组相比,100 μmol/L、200 μmol/L组的SiHa细胞增殖,迁移,侵袭能力均明显下降,并且具有浓度依赖性(P<0.05)。免疫印迹结果,与0 μmol/L组相比,100 μmol/L、200 μmol/L各浓度组的SiHa细胞Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin、Vimentin和MMP9表达显著下调,E-cadherin表达显著上调,并且具有浓度依赖性(P<0.05)。结论：miR-613能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制人宫颈癌细胞系SiHa细胞的增殖,迁移和侵袭。     

沙库巴曲缬沙坦钠对老年慢性心力衰竭合并2型糖尿病患者肾功能、神经内分泌激素和TGF-β1/Smad3信号通路的影响

摘要 目的：探讨沙库巴曲缬沙坦钠对老年慢性心力衰竭（CHF）合并2型糖尿病（T2DM）患者肾功能、神经内分泌激素和转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad3信号通路的影响。方法：选择我院2020年5月~2021年5月期间收治的92例老年CHF合并T2DM患者,按照双色球法将患者分为对照组（n=46,接受常规治疗）和研究组（n=46,对照组基础上接受沙库巴曲缬沙坦钠治疗）。对比两组心功能、肾功能、神经内分泌激素、TGF-β1/Smad3信号通路相关指标和不良反应发生情况。结果：治疗12个月后,研究组心输出量（CO）、左心室射血分数（LVEF）高于对照组,左心室舒张末期内径（LVEDD）低于对照组（P<0.05）。治疗12个月后,研究组血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、血尿酸（UA）、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）、胱抑素C（Cys-C）低于对照组（P<0.05）。治疗12个月后,研究组去甲肾上腺素（NE）、醛固酮（ALD）和血管紧张素II（AngII）低于对照组（P<0.05）。治疗12个月后,研究组Smad7 mRNA高于对照组,Smad2 mRNA、TGF-β1 mRNA、Smad3 mRNA低于对照组（P<0.05）。两组不良反应发生率组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：沙库巴曲缬沙坦钠用于治疗老年CHF合并T2DM患者,可有效改善患者的心功能、肾功能、神经内分泌激素和TGF-β1/Smad3信号通路相关指标,安全性较好。     

miR-21对心肌缺血大鼠心肌细胞TLR-4/NF-κB通路的影响

摘要 目的：探究微小核糖核酸-21（miR-21）对心肌缺血大鼠心肌细胞Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）通路的影响。方法：取40只SD大鼠随机分为假手术组（10只）和建模组（30只）,建模组大鼠通过左冠状动脉前降支（LAD）结扎术建立心肌缺血大鼠模型,假手术组大鼠仅开胸后不做其他处理即缝合。将建模成功大鼠随机分为对照组（转染miR-NC慢病毒）、沉默组（转染miR-21 antagomir慢病毒）、过表达组（转染miR-21 mimics慢病毒）,假手术组注射等量生理盐水。苏木素-伊红（HE）染色观察心肌组织损伤情况;原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡率;实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹法（WB）检测TLR-4、NF-κB、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase3）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2关联X蛋白（Bax）信使核糖核酸（mRNA）和蛋白表达及磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）水平。结果：对照组大鼠心肌纤维排列紊乱,大量心肌细胞肿胀坏死并伴随炎症细胞浸润,沉默组大鼠心肌组织损伤情况进一步加重,而过表达组大鼠心肌组织损伤现象得到明显改善。与假手术组比,对照组、沉默组、过表达组大鼠心肌细胞凋亡率,TLR-4、NF-κB、Caspase-3、Bax mRNA与其蛋白表达,以及p-NF-κB p65水平升高,Bcl-2 mRNA及其蛋白表达降低（P＜0.05）;与对照组比,沉默组大鼠心肌细胞凋亡率,TLR-4、NF-κB、Caspase-3、Bax mRNA表达与其蛋白表达,以及p-NF-κB p65水平升高,Bcl-2 mRNA及其蛋白表达降低（P＜0.05）,过表达组大鼠心肌细胞凋亡率,TLR-4、NF-κB、Caspase-3、Bax mRNA与其蛋白表达,以及p-NF-κB p65水平降低,Bcl-2 mRNA及其蛋白表达升高（P＜0.05）。结论：下调miR-21表达可促进TLR-4/NF-κB通路表达,加重心肌缺血大鼠心肌损伤。