基因枪介导小麦遗传转化的几个重要影响因素的研究

用基因枪将携带gus-bar双标记基因的质粒pDB1及携带RC24几丁质酶基因的质粒pARN6、pBAB3、pYAO24(pYAO24还带有nptⅠ选择标记基因)以pARN6 pDB1、pBAB3 pDB1及pYAO24三种组合方式转入8个小麦品种的未成熟胚盾片组织,经选择培养获得转基因植株。对基因枪介导小麦遗传转化的主要影响因素,如基因型、材料、金粒制备和轰击参数进行分析,发现西农88是理想的转基因受体基因型,开花两周后的小麦幼胚为理想的轰击材料,制备子弹时合适的金粒含量为30～50pg／次,充分混匀金粒悬浮液可以减少幼胚损伤和提高转化频率。GUS染色发现以蔗糖为渗透剂所产生的蓝色斑点比以甘露醇为渗透剂所产生的蓝色斑点大。针对载体上的nptⅠ筛选标记基因,150mg／L的硫酸卡那霉素为较理想的选择剂浓度;针对载体上的bar筛选标记基因,PPT的浓度为2mg／L易出现假阳性植株,因此应将浓度增加到3～5mg／L。     

白背三七的组织培养和高频再生

以白背三七不同生长时间的叶片及茎段作为实验材料,利用含有多种不同植物生长调节剂及其浓度配比的MS培养基分别诱导愈伤组织、不定芽和根,建立了组织培养和高频离体再生体系。结果表明：（1）最适外植体为生长15d的叶片和茎段;（2）诱导愈伤组织的最适植物生长调节剂及其浓度配比为0．5mg·L-1 2,4．D、0．8mg·L-1 6-BA和0．1mg·L～NAA,茎段和叶愈伤组织的诱导率分别为95．6％和97．8％;（3）诱导不定芽的最适植物生长调节剂及其配比为1．0mg·L-1 6-BA、0．2mg·L-1 NAA和0．1mg·L-1 TDZ,诱导率可达87．4％;（4）以MS＋0．2mg·L-1 NAA作为生根培养基可获得100％的生根率。将生长良好的的植株进行移栽,存活率可达95％。     

心力衰竭患者AKI发生的临床预测模型构建

摘要 目的：构建心力衰竭患者AKI（acute kidney injury）发生的临床预测模型,对早期高危患者识别提供依据。方法：回顾性分析新疆医科大学第一附属医院2018年1月至2020年12月明确诊断心力衰竭患者350例,其中AKI患者104名（29.7%）,非AKI患者246名（70.3%）,将其按7:3 比例随机分为建模队列(n=245)和验证队列(n=105)。构建 LASSO回归分析建模队列,基于 logistic 回归结果构建HF-AKI（heart failure-acute kidney injury）患者的诺顿图,同时对模型进行校准,同时验证模型效益。结果：单因素分析得到25个差异变量,LASSO回归、多因素逐步logistics 回归,最终得到5个差异变量：年龄、住院天数、入院肌酐、射血分数、是否使用抗生素。构建HF-AKI 患者的临床预测模型并绘制成诺顿图。构建训练组和验证组诺顿图的 ROC曲线 AUC大小分别为 0.730和 0.794,通过Hosmer-Lemeshow检验,验证组虽然没有训练组的拟合优度优异,但P＞0.05,表明该诺顿图模型同样具有良好的校准度。结论：本研究成功构建了HF-AKI的临床预测模型,经过系列验证提示该模型的训练组和验证组均具有净收益范围,具有一定的临床价值。     

微型月季愈伤组织诱导及植株再生

选取微型月季(Rosa hybrida)幼嫩离体叶片(叶龄12天)为外植体, 以MS为基本培养基, 研究不同配比的植物生长调节剂对愈伤组织诱导、不定芽诱导和生根培养的影响。结果表明: (1) 诱导愈伤组织的最佳培养基配比为1.0 mg·L^–16-BA+3.0 mg·L^–12,4-D, 诱导率为100%; (2) 6-BA在微型月季不定芽诱导中起着关键作用, 诱导不定芽产生的植物生长调节剂配比为1.0 mg·L^–16-BA +(0.05–0.5) mg·L^–1NAA+(0.02–0.2) mg·L^–1TDZ, 其中最适配比1.0 mg·L^–16-BA+0.1 mg·L^–1NAA+0.02 mg·L^–1TDZ的愈伤组织再分化率达到92.6%; (3) 生长素对微型月季的生根有重要影响, 以1/4MS+0.1 mg·L^–1NAA为生根培养基可获得100%的生根率。实验最终建立了微型月季组织培养和高频离体再生体系。     

多年生黑麦草成熟胚再生体系的建立及基因枪转化

目的:建立以多年生黑麦草成熟胚为起始材料的再生体系,用于基因枪转化。方法:多年生黑麦草成熟种子在附加 5mg L 2,4 D的MS培养基上诱导愈伤组织,转至新继代培养基上产生胚性愈伤组织。分化培养基为无激素MS培养基。再生植株在培养基成分减半的无激素MS培养基生根,之后移栽至土壤。基于这一再生体系,用含有水稻几丁质酶基因RC2 4的质粒pARN6和含有草丁膦乙酰转移酶基因Bar的质粒pDB1,通过基因枪轰击胚性愈伤组织。用附加PPT的继代培养基进行转化植株的抗性筛选。结果:共获得 2 4 3株再生植株。通过PCR进行检测,获得1 8株整合有RC2 4基因的植株,1 5株整合有Bar基因的植株,同时转入 2个基因的植株 2株。     

采用玉米Ubi-1启动子获得低拷贝转基因玉米植株

通过基因枪粒子轰击和草丁膦（PPT）选择获得可育的玉米转基因植株,并分析了外源基因在转化体中的拷贝数与启动子之间的关系。用玉米Ubi-1启动子驱动外源基因,玉米转化体中外源基因的拷贝数较低;可能的原因为Ubi-1启动子通过与其内部同源序列发生重组而被定点整合进玉米基因组,共转化的两种质粒DNA在整合至玉米染色体DNA之前已重构成为一个整体。结果显示使用某一植物自身基因的启动子可以降低外源基因在该物种转基因个体中的拷贝数,进而避免基因沉默现象的发生。目前已得到第二代转基因玉米种子。     

明日叶叶片的丛生芽诱导和植株高频再生

明日叶（Angelicake＆keiKoidzumi）是伞形花科当归属植物,具有很高的药用价值。为解决生产上短时间快速获得大量明日叶种苗的相关技术,以明日叶叶片为外植体进行组织培养实验,直接诱导产生丛生芽并且得到再生植株,建立了明日叶叶片离体再生快速繁殖体系。结果表明,诱导丛生芽分化的最适培养基是Ms＋1．0mg·L-1,2,4-D＋0．2mg·L～6-BA,诱导率可高达100％;诱导生根的最适培养基是Ms＋1．0mg·L-1NAA,诱导率可达90％,将生长良好的再生植株进行移栽,存活率可达86％。     

一种优化的植物总DNA提取方法

根据自己提取植物基因组DNA的实际经验,改进了Clark利用CTAB提取植物基因组DNA的方法。在试验过程中发现,通过在研磨材料时加入液氮、用剪去端部的吸头转移含有DNA的溶液,并且将加入RNase A消化RNA的步骤改在最后进行等一系列改进,可以获得高质量的DNA。本文同时就主要提取步骤进行了分析。     

小麦NBS-LRR类抗病基因同源序列的分离与鉴定

根据已知植物抗病基因的保守区域设计引物,从抗锈病小麦品种西农88基因组DNA扩增出3条与植物抗病基因同源的序列,分别为WRGA1、WRGA2和WRGA14。这三条同源片段均含有典型的NBS-LRR类抗病基因所拥有的保守性结构域Kinase-2a、Kinase-3a和疏水结构域(HD)．它们与部分已知NBS-LRR类抗病基因的氨基酸序列同源性为46．0%-9．9%,三个片段间在氨基酸水平上的同源性为80．7%-56．8%。Northern杂交表明WRGA1在小麦中受水杨酸正调控,属诱导型表达。     

高羊茅组织培养再生体系及GUS基因瞬间表达研究

以成熟种子为外值体,对高羊茅纰织培养和植株再生体系进行了优化,分析了不同浓度2．4-D、6-BA和激动素对高羊茅愈伤组织诱导和愈伤组织分化成苗的影响．结果表明：9．0mg／L 2．4-L)对愈伤组织的诱导效果最佳．0．2mg／L激动素是愈伤组织分化成苗的最适浓度．二者的诱导率和分化率分别达到68．08%和45．83％。在愈伤组织继代培养基中附加1．0mg／L 2．4-D、0．5mg／L 6-BA和1．25mg／L CuSO4;有利于胚性愈伤组织的形成,可以明显促进愈伤组织分化。同时．采用基因枪法将GUS基因导入高羊茅愈伤组织中,通过组织化学染色检测到了GUS瞬间表达活性;并对影响CUS基因瞬间表达的因素进行了分析．以期为提高基因枪法遗传转化效率提供参考。