pH和温度对固氮酶还原基质的影响

确定了在pH 5.2到8.7和温度22°到45℃时钼铁蛋白和铁蛋白的稳定性。按logKm和logV分别对pH作图,得到下列参数。于30℃在酸性侧,乙炔络合常数PK_b(C_2H_2)=6.43—6.50,乙炔催化常数pK_b′(C_2H_2)=4.78,在碱性侧乙炔络合常数pK_a(C_2H_2)=7.42—7.55,乙炔催化常数pK_a′(C_2H_2)=7.88—8.29,氮络合常数pK_a(N_2)=7.75—7.9及氮催化常数pK_a′(N_2)=8.08—8.68。既然pK_a与pK_b或pK_a′与pK_b′二者间隔小于3.5个单位,又按V/Km及V′对pH作图,其结果为pKb(C_2H_2)=6.28pK_a(C_2H_2)=7.68和pK_b′(C_2H_2)=5.53和pK_a′(C_2H_2)=8.93。将不同温度下的pK_b或pK_a分别对各自温度的倒数作图,其热力学数据为由pH 5.7到7.3范围内,质子移变基团的解离热⊿H(ioh)=7742卡/克分子,相应的pK_b(C_2H_2)=6.16—6.36;由pH 7.3到8.4范围内⊿H_(ion)=6983卡/克分子,相应的pK_a=8.24—8.44。这些数据指出固氮酶钼铁蛋白络合乙炔的功能基团可能具有咪唑基·巯基和氨基相类似的结构,这种推测正在用化学修饰的方法加以验证。     

氧化应激基因表达与k基因结合核因子

氧化应激基因表达与ｋ基因结合核因子周玫,陈瑗（第一军医大学自由基医学研究室,广州５１０５１５）关键词ｋ基团结合核因子,氧化应激,基因表达调控氧化应激在很多疾病的发病机制中起着重要作用,并直接与衰老过程有关。细胞对氧化应激的反应特点是很快地诱导很多基因...     

枯草芽胞杆菌基因组删减对异源酶表达影响的研究进展

枯草芽胞杆菌作为一种遗传背景清晰、基因编辑成熟的革兰氏阳性菌,是多种重要工业酶的生产宿主。随着转录组、蛋白质组、代谢组等多组学测序和分析技术的发展,通过合理设计简化枯草芽胞杆菌基因组,减少细胞内冗余的调控和代谢网络,使得细胞更精简且便于控制,展现出了枯草芽胞杆菌作为异源酶表达宿主细胞的应用潜力。本文简要综述了枯草芽胞杆菌基因组删减的研究进展,归纳了必需基因的确定方法,重点介绍了枯草芽胞杆菌通过删减基因组提升异源酶表达的研究进展及删减策略,充分展示了枯草芽胞杆菌基因组删减在构建异源酶表达底盘细胞中的重要作用。     

反义RNA介导的大肠杆菌非必需基因rpsF的基因沉默

【目的】探讨反义RNA技术介导的大肠杆菌非必需基因rpsF基因沉默导致菌体生长受抑制的原因。【方法】将rpsF基因5'端41-230 bp的片段反向插入带有末端配对结构的反义表达载体pHN678,获得重组质粒,导入大肠杆菌宿主获得反义RNA菌株Escherichia.coli/pHNF,并用诱导剂IPTG诱导反义RNA表达,通过与对照菌E.coli/pHN678的液体生长状态差异判断菌体生长表型;采用Real time RT-PCR方法跟踪分析转录水平。【结果】构建了针对rpsF的反义RNA菌株,且其生长受抑制程度与IPTG浓度呈正相关。IPTG浓度为100μmol/L时,菌体生长未受抑制,但靶基因rpsF的mRNA量降低了36%,而rpsR是位于同一操纵子下游的必需基因,其转录水平却未受影响;IPTG浓度为200μmol/L时,菌体生长明显受抑制,经分析发现rpsR转录水平降低了12%。【结论】反义RNA菌株E.coli/pHNF生长受抑制的原因是由于此反义RNA引起了同一操纵子下另一必需基因rpsR的转录水平降低。     

光敏掩蔽基团在化学生物学中的应用

光敏掩蔽基团技术是通过运用一种由光子控制的光敏化合物,在光子激发后,被该化合物掩蔽处于惰性状态的生物活性分子重新被激活、释放以调节生理功能的化学生物学研究方法,它对生命活动的控制具有实时、原位、精确、快速的优势。该文综述了不同光敏基团的结构与功能,包括硝基苄基类、香豆素类、喹啉类、吲哚类、硝基二苯并呋喃类等,它们通过掩蔽神经递质、钙离子、蛋白质、缩氨酸、核苷酸、遗传物质等重要的生理活性物质来高选择性地调控不同的生物学过程。     

细菌必需基因、最小基因组和合成细胞

单细胞原核生物是原始的细胞生命形式,确定细菌必需基因和最小基因组对理解生命的本质、细胞生命的起源和进化有非常重要的意义。文中简要介绍近年来有关细菌的必需基因、最小基因组和合成细胞的研究方法、理论和进展。还特别介绍人工建立最小细菌基因组的策略以及应用前景。     

白蜡虫碱性磷酸酶功能基团的研究

白蜡ricerus pela雌成虫经匀浆,正丁醇抽提,硫酸铵分段盐析,SephadexG-150凝胶过滤等步骤,得到比活力为136.65U/mg蛋白酶制品,用苯甲基磺酰氟、N-溴代琥珀酰亚胺、三硝基苯磺酸、二巯基苏糖醇、对氯汞苯甲酸、琥珀酸酐、溴乙酸、碘乙酸等化学修饰剂在一定条件下选择修饰白蜡虫碱性磷酸酶的几种氨基酸残基,并测定酶活力变化。结果表明：苯甲基磺酰氟、N-溴代琥珀酰亚胺、三硝基苯磺酸、琥珀酸酐、二巯基苏糖醇的修饰能显著抑制酶的活力,活力的降低与修饰剂的浓度有关,氯汞苯甲酸、溴乙酸、碘乙酸的修饰对酶的抑制作用影响较小。初步认为：丝氨酸、赖氨酸和色氨酸残基是白蜡虫碱性磷酸酶的必需功能基团,部分二硫键也是酶的催化功能所必需的。     

100种常用中药必需微量元素的含量测定

本文采用等离子体发射光谱法测定了100种临床常用中药中必需微量元素:Mg、P、Ca、Fe、Mn、Zn、Co、Cu、Mo、Cr、Ni的含量。结果表明,Mg、P、Ca、Fe含量均较高,Zn、Mn、Cu次之,Co、Mo、Cr、Ni含量均较低。     

Tn5转座突变技术在革兰氏阴性细菌分子遗传研究中的应用

随着广宿主载体系统的发展,Tn5及其衍生载体已经广泛应用于革兰氏阴性细菌的分子遗传学研究。主要综述了Tn5转座突变技术在生防细菌生防机理研究、细菌必需基因的鉴定、病原细菌毒力相关基因研究、代谢调控基因研究和菌株的遗传改良方面的应用研究进展。     

高原鼢鼠和高原鼠兔骨骼中非必需微量元素的测定

铅、镉、砷、汞、锑和铋等元素是人与动物生命活动非必需且有害的微量元素[1] 。哺乳类动物体内的这些微量元素主要由食物链传递所产生[2 ,3] 。本文对高原鼢鼠 (Ｍｙｏｓｐａｌａｘｂａｉｌｅｙｉ)和高原鼠兔(Ｏｃｈｏｔｏｎａｃｕｒｚｏｎｉａｅ)骨骼中非必需微量元素砷、锑、汞、铋、铅、镉的分布、种间含量差异及其相关性进行了分析和讨论 ,为高寒草甸生态系统研究小哺乳动物的营养生态学、化学生态学以及生态系统的物质循环[4 ,5] 等提供基础资料。1　材料与方法1 1　样品预处理1994年 5～ 6月在中国科学院海北高寒草甸生态系统定位站…