| 反义RNA介导的大肠杆菌非必需基因rpsF的基因沉默 |
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| 引用本文： | 唐欣茹,殷瑜,戈梅,陈代杰.反义RNA介导的大肠杆菌非必需基因rpsF的基因沉默[J].微生物学报,2014,54(4):449-454. |
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| 作者姓名： | 唐欣茹 殷瑜 戈梅 陈代杰 |
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| 作者单位： | 华东理工大学生物工程学院，上海200237;上海交通大学药学院，上海200240;上海来益生物药物研究开发中心，上海201203;华东理工大学生物工程学院，上海200237 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81102355) |
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| 摘 要： | 【目的】探讨反义RNA技术介导的大肠杆菌非必需基因rpsF基因沉默导致菌体生长受抑制的原因。【方法】将rpsF基因5'端41-230 bp的片段反向插入带有末端配对结构的反义表达载体pHN678,获得重组质粒,导入大肠杆菌宿主获得反义RNA菌株Escherichia.coli/pHNF,并用诱导剂IPTG诱导反义RNA表达,通过与对照菌E.coli/pHN678的液体生长状态差异判断菌体生长表型;采用Real time RT-PCR方法跟踪分析转录水平。【结果】构建了针对rpsF的反义RNA菌株,且其生长受抑制程度与IPTG浓度呈正相关。IPTG浓度为100μmol/L时,菌体生长未受抑制,但靶基因rpsF的mRNA量降低了36%,而rpsR是位于同一操纵子下游的必需基因,其转录水平却未受影响;IPTG浓度为200μmol/L时,菌体生长明显受抑制,经分析发现rpsR转录水平降低了12%。【结论】反义RNA菌株E.coli/pHNF生长受抑制的原因是由于此反义RNA引起了同一操纵子下另一必需基因rpsR的转录水平降低。
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| 关 键 词： | 反义RNA 非必需基因rpsF 基因沉默 操纵子 Real time RT-PCR |
| 收稿时间： | 2013/8/20 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2013/12/3 0:00:00 |
Antisense RNA mediated gene silencing of nonessential gene rpsF in Escherichia coli |
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| Xinru Tang,Yu Yin,Mei Ge and Daijie Chen.Antisense RNA mediated gene silencing of nonessential gene rpsF in Escherichia coli[J].Acta Microbiologica Sinica,2014,54(4):449-454. |
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| Authors: | Xinru Tang Yu Yin Mei Ge and Daijie Chen |
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