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从中国发病鸡中分离的鸡减蛋综合征病毒(EggDropSyndromVirus,EDSV)弱毒株(AA-2),其基因组全长约为33kb。用限制性内切酶HindⅢ水解EDSV全基因组,构建了以pBluescriptⅡ(KS+)为载体的右末端片段的克隆(约4.2kb),对其进行了序列测定和结构分析。该片段全长4183个碱基对(bp),位于基因组右末端87.3m.u.-100m.u.。结果显示,该片段与哺乳动物腺病毒右末端E4区结构不同,与禽Ⅰ型腺病毒代表株CELO右末端片段亦无同源性。本文为深入了解EDSV基因组结构特点,EDSV与其他腺病毒基因结构与功能的进化关系和EDSV载体的构建奠定了分子生物学基础 相似文献
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为了确定从噬菌体抗体文库中筛选出的抗体的属性和方便目的基因的表达及其产物的纯化,对两株具有“1F7”独特型的抗HIV-1gp160抗体基因进行了序列分析并构建了可溶性表达载体.发现3B株含有完整的Fab段,1D株只有重链Fd段.序列测定表明两株克隆的Fd段基因完全相同,其可变区VH属于VHⅠ亚群,而3B株的“轻链”序列与已知的人的κ和λ轻链无同源性.用从另外的Fab抗体文库中筛选出来的3株抗乙肝表面抗原抗体的轻链与3B的重链重组,并选择一个HIV-1gp160特异性较好的重组抗体株,命名为3Bs.构建了1D株与3Bs株的可溶性表达载体,免疫印迹实验证实了具有“1F7”独特型的抗gp160独特型阳性抗体的表达. 相似文献
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噬菌体抗体文库的构建及人源抗HIV-1 gp 160抗体的筛选 总被引:7,自引:0,他引:7
构建人源噬菌体抗体文库如下:HIV感染者脾细胞中提取mRNA,经反转录再以人IgG重链Fd两端及轻链“通用”引物分别扩增Fab基因片段,依次插入到噬菌粒载体pComb3中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,经辅助噬菌体救助,重组噬菌体得以溶源裂解,Fab表达于噬菌体包膜蛋白Ⅲ的N端.此噬菌体抗体库的容量为5×105.筛选抗HIV-1同时又具有能被抗独特型抗体“IF7”所识别的独特型的阳性抗体:以重组包膜糖蛋白gp160及gp41多肽对噬菌体抗体文库进行三次淘选,使抗gp160的特异性抗体得到100倍的富集.然后通过直接ELISA和竞争性ELISA实验筛选出两株结合性较好的特异性抗gp160抗体-3B株与1D株.直接ELISA实验表明这两株克隆均能被“1F7”所识别,为抗独特型多肽的筛选奠定了基础. 相似文献
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HIV—lgag/IFNα—2b表达产物的生物活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 :将艾滋病病毒核心蛋白 (gag)与干扰素 (IFNα - 2b)融合基因表达的融合蛋白作为免疫原免疫小鼠 ,动态观察小鼠的体液免疫、细胞免疫与CTL应答。方法 :将IFNα - 2b基因片段插入到gag基因的nt5 31位点 ,经脂质体转染与血凝素阴性蚀斑筛选 ,挑出重组痘苗病毒。经SDS -PAGE和Westernblot鉴定表达产物。以小鼠为实验对象 ,用重组痘苗病毒vJ38gag/IFNα - 2b免疫小鼠 ,用ELISA方法检测血清IgG抗体含量。用流式细胞仪测定小鼠外周血CD 4 、CD 8T淋巴细胞计数。 3H -TdR掺入法检测细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性。结果 :血清IgG抗体含量逐渐增高 ,实验组与对照组比较差异有显著性意义 (p <0 .0 5 )。CD 4 、CD 8T淋巴细胞计数、CTL检测实验组与对照组比较差异均有显著性意义 (p <0 .0 5 )。结论 :重组痘苗病毒vJ38gag/IFNα - 2b能增强小鼠的体液免疫、细胞免疫和CTL应答。IFNα - 2b可以作为免疫佐剂增强机体的免疫状态。 相似文献
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采用微量法(100μl)从牛睾丸细胞培养液中提取猪瘟兔化弱毒(HCLV)RNA,成功地用于RT-PCR扩增。采用Taq Track Sequence System试剂盒方法,用Bio-Rad Model 300 Xi DNA测序仪直接用PCR产物进行序列测定。经过反复多次的序列测定,HCLV E2基因的全部序列已被证实。该序列已被国际基因库(GeneBank)收录,编号为U72048。 将测定的HCLV囊膜糖蛋白E2基因序列输入计算机,采用DNAsis软件与日本的GPE株、ALD株和欧洲的Brescia株、Alfort株猪瘟 相似文献