弗氏2a志贺氏菌2457T株yciD基因缺失突变株的构建

目的:构建弗氏2a志贺氏菌2457T株yciD基因缺失突变体,以研究yciD基因的功能。方法:根据弗氏2a志贺氏菌2457T株基因组全序列,采用Red重组系统对yciD基因进行缺失,并经PCR和SDS-PAGE证实;对野生株和突变株的生长状态及生化反应进行比较研究。结果:构建了弗氏2a志贺氏菌2457T株的yciD基因缺失突变株2457TΔyciD,该突变株外膜蛋白样品中缺失了一条相对分子质量与从yciD基因推导的蛋白相当(约22000)的蛋白带。该突变株比野生株生长快,利用葡萄糖和甘露醇的能力也比野生株大为增强。结论:获得了弗氏2a志贺氏菌2457T株的yciD基因缺失突变株。     

微生物功能基因组学研究

自从1995年流感嗜血杆菌的基因组序列测定完成之后[1],目前已有75种(株)微生物的基因组完成测序,160多种(株)微生物的基因组测序正在进行中[2]。随着各种微生物基因组测序工作的不断完成和序列信息的积累,微生物基因组学研究的重点已由结构基因组学向功能基因组学转移。微生物功能基因组学研究不仅要阐明微生物基因组内每个基因的作用或功能,还要研究基因的调节及表达谱,进而从整个基因组及其全套蛋白质产物的结构、功能、机理的高度去了解微生物生命活动的全貌,揭示微生物世界的各种前所未知的规律,并使之为人类和社会服务。与真核生物相比,虽然微生物的基因组相对简单,但微生物基因组学研究仍具有重大的科学和经济意义。在细菌基因组中,既有编码在极端环境下起催化作用的酶的基因,也有编码分解化学污染物的酶的基因,这些基因在真核细胞是不存在的。通过微生物功能基因组学研究,还能发现药物靶位和疫苗抗原。微生物基因的功能及表达研究结果也能为研究复杂生物的基因功能提供参考。近些年微生物功能基因组学研究受到了普遍重视。日本组织了十几所大学和研究机构,计划用5年时间完成大肠杆菌的功能基因组研究[3]。日本还与欧洲联合正在开展枯草杆菌功能基因组学研究[4]。其它微生物的功能基因组学研究也在进行中。由于微生物的种类繁多,功能基因组研究的内容又较丰富,要全面介绍微生物功能基因组学研究是困难的。本文仅从未知功能基因的鉴定、药物靶位及疫苗抗原研究、致病机制研究、生物功能图谱研究4个方面进行简要的评述。     

细菌人工染色体及其在基因组学研究中的应用

细菌人工染色体(BAC)是一种新发展起来的：DNA载体系统,它具有容量大、遗传特性稳定、易于操作等优点,在基因组研究和基因功能分析等方面应用广泛。本综述BAC的发展及近年来在基因组学研究中的一些应用情况。     

人甲状旁腺激素在大肠杆菌中的表达及鉴定

化学合成人甲状旁腺激素（hPTH）全长基因,克隆到大肠杆菌表达载体pBV220和pET22b中,获得了高表达。经破菌、阳离子交换层析、反相层析纯化获得了纯度大于95%的纯品。N端测序、质谱分析结果表明重组hPTH 结果完整,N端无Met或fMet。生物活性试验证明重组hPTH具有激活腺苷酸环化酶、增加骨质量和骨密度等作用。     

Arthrobacter K1108乙内酰脲酶反应条件和立体选择性研究

研究了ArthrobacterK110 8乙内酰脲酶的反应条件 ,结果表明 ,K1108乙内酰脲酶的最适反应温度为 55℃ ,最适pH为 70 ,Co²⁺ 和Fe²⁺ 对该酶有激活作用 ,而Ca²⁺ 有严重抑制作用。K1108乙内酰脲酶的底物专一性较强 ,其最适底物为 5 苄基乙内酰脲 ,5 苯基乙内酰脲和 5 吲哚甲基乙内酰脲均不能作为其有效底物。对K1108乙内酰脲酶立体反应机制研究结果表明 ,其乙内酰脲水解酶不具立体选择性 ,决定产物立体构型的酶是N 氨甲酰氨基酸水解酶。     

重组人表皮生长因子的稳定性

考察了不同条件下重组人表皮生长因子（rhEGF）的稳定性。结果表明,不同的保存条件（物理状态、温度、pH、浓度等）对rhEGF的稳定性有显影响,使用适当的添加剂（保护剂、抗氧剂、抑菌等）可以提高rhEGF的稳定性。上述结果为rhEGF的制剂学研究提供了依据。     

用改良的MTT法测定rhG-CSF活性

ＭＴＴ测定法是根据线粒体脱氢酶催化ＭＴＴ形成蓝色甲■的多少来检测活细胞数和功能状态的,但原始方法中存在着一些问题,如敏感性偏低、有机溶剂产生蛋白质沉淀以及产物的溶解度偏低等。为了摸索测定 ｒｈＧ－ＣＳＦ活性的最适条件,我们以 ＮＦＳ－６０细胞为对象,比较了多种溶解缓冲液,并且对细胞数、ＭＴＴ浓度及保留时间、溶解液用量等条件进行了选择。结果表明,ＤＭＦ－２０％ＳＤＳ和 ２０％ＳＤＳ的效果最好,测定时细胞数为每孔 １０００个细胞,所加 ＭＴＴ浓度为 １ｍｇ／ｍｌ,保留时间为 ４ ｈ,溶解液的用量为每孔 １００μｌ。     

应用实验设计优化制备适于口服的聚酯微球

采用双乳溶剂蒸发法制备包裹蛋白质的聚酯微球 ,蛋白质包裹率大于 80 %。应用均匀设计和正交设计试验研究了 8种因素对微球粒径的影响。结果表明 ,粒径主要受有机相中聚合物浓度和外水相中稳定剂浓度的影响。通过二次回归组合设计 ,建立了微球平均粒径与聚合物浓度及稳定剂浓度之间的数学关系式。根据此式 ,选择不同的聚合物浓度和稳定剂浓度可制备适于蛋白质口服给药的微球。     

乳化溶剂挥发法制备纳米粒

目的：建立乳化溶剂挥发法制备纳米粒的方法。方法：采用单因素法和正交设计法考察不同影响因素对乳化溶剂挥发法所制得的纳米粒粒径、包封率和载药量的影响。结果：采用乳化溶剂挥发法,通过改变处方和工艺因素所制得的纳米粒,外观圆整,大小均匀,粒径可控,包封率多数可达50%以上。结论：优化确立了乳化溶剂挥发法制备纳米粒的处方和工艺,可以制备满足不同要求的纳米粒。     

气相色谱法检出和鉴定厌氧菌的实用研究

根据目前气相色谱法检出和鉴定厌氧菌工作中存在的实际问题,本文提出了一种去除蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖培养基(PYG)本底干扰物的简便方法,提高了对色谱图定性和半定量解析的准确性。同时又推荐了一套简易价廉的实验仪器和实验试剂。通过对若干厌氧菌株的检出和鉴定,得到了比较满意的结果。上述工作将有利于气相色谱检测厌氧菌技术的推广和应用。