小鼠Sema4D慢病毒过表达载体的构建与鉴定

目的构建小鼠Sema4D慢病毒过表达载体。方法采用Gateway技术将体外合成小鼠全长Sema4D基因插入并重组到预先已经插入荧光标记基因片段IRES的质粒中,阳性菌落由Ampicillin筛选后,大量繁殖,获得大量转染后的质粒,经过测序鉴定后,经慢病毒包装,转染293T细胞,经由Neomycin筛选,获得高滴度的病毒液。结果测序结果显示Sema4D基因共有2 586 bp,重组慢病毒载体共有11 966bp,其中Sema4D插在CMV启动子和IRES标记序列之间,位置为2569-5144。测序结果表明小鼠Sema4D基因已经成功构建到过表达慢病毒载体中。结论小鼠Sema4D基因慢病毒过表达载体Lenti-CMV-sema4D-IRES-PGK-neo能够正确构建,该载体为研究小鼠Sema4D基因在特定细胞内过表达株的筛选奠定基础,为其作用机制的研究提供用力工具。     

壳寡糖对大肠杆菌抑菌活性研究

分析壳寡糖对大肠杆菌抑菌效果的影响因素.采用摇瓶法和ELISA板法对不同浓度的壳寡糖进行抑菌试验;比较不同pH、不同脱乙酰度的壳寡糖对大肠杆菌抑菌效果的差异;比较不同聚合度的单一聚合度壳寡糖抑菌效果的差异.壳寡糖浓度大于5 mg/mL时抑菌效果与同浓度苯甲酸钠相近;pH为4时,0.156 mg/mL的壳寡糖溶液抑菌活性即能超过90%;pH为7时,5 mg/mL的壳寡糖才能达到90%抑菌活性.脱乙酰度为95%时,5 mg/mL的壳寡糖溶液抑菌活性能超过97%;脱乙酰度为45%时,40 mg/mL的壳寡糖溶液抑菌活性仅有56%;聚合度大于4的单一聚合度壳寡糖40 mg/mL时抑菌活性能达到99%.结果表明:提高壳寡糖溶液浓度、降低pH、提高脱乙酰度,能提高壳寡糖的抑菌活性,单一聚合度壳寡糖聚合度越高,对大肠杆菌的抑制作用越强.此外,采用ELISA板的方法进行实验,即节省试药又方便快捷.     

定量测定DNA杂交物的灵敏方法——时间分辨荧光法

<正>核酸杂交不仅广泛用于分子生物学,而且也用于诊断医学等领域,这就需要有一种稳定、非放射性探针,到目前为止,用于杂交探针的非放射性标记物有:(1)用抗生物素或抗生蛋白链菌素检测的生物素化的核苷,(2)用于免疫学检测的半抗原以及(3)与核酸交联的蛋白质。所有这些方法,最终都要用酶催化显色来检测杂交探针分子,尽管这类非放射性标记探针可以在高浓度使用(这可以增加杂交速率),但是,其检测灵敏度和简易性都无法与放射性核酸     

中华鳖精母细胞联会复合体的研究

本文以微铺展技术制备中华鳖精母细胞联会复合体标本,经硝酸银染色后电镜观察,分析了SC组型。并与有丝分裂染色体组型相比较,发现二者有着良好的一致性,而且微小染色体的SC结构和着丝粒清晰,未发现形态上有分化的性染色体。中华鳖SC的研究为其细胞遗传学及性别决定机制提供了重要的依据。 Abstract　Synaptonemal Complexes (SC) in Trionyx sinensis spermatocytes prepared with micro-spreading technique and silver staining was analyzed by electron microscopy. The meiotic SC karyotype was constructed from 10 cells and compared with mitotic chromosome karyotype. There is a good agreement between them. The structure and kinetochores of micro-chromosomes are very distinctive on each SC. There does not exist differential sex chromosome.     

云南澜沧拉祜族HLA-DRB1基因多态性研究

采用我们改进的高分辨率基于内含子的PCR-SBT分型方法,首次检测云南拉祜族HLA-DRB1基因多态性。在55例拉祜族个体中共检出16种HLA-DRB1等位基因,最常见的DRB1等位基因是HLA-DRB1*12021、09012、15011,基因频率分别为30.909%、15.455%、13.636%,共占拉祜族可检出等位基因的60%,其中DRB1*0413、11081、1312、1418、1504首次在我国人群中检出,并且在世界各地人群中也比较罕见。对拉祜族和世界各地人群的HLA-DRB1频率进行了比较,分析了HLA-DRB1等位基因在各人种中的分布特点,并用Neighbor-joining法进行了聚类分析。比较分析的结果显示拉祜族明显属于中国南方族群,未显示出其族源来自北方的痕迹。对此遗传数据和民族学、历史学研究的矛盾,做了初步的分析。 Abstract:The HLA-DRB1 gene polymorphism in Lahu ethnic of Yunnan,China was the first time investigated using high resolution PCR-SBT method,which is based on sequences of HLA-DRB1 Intron 1 and Intron 2 and with our improvement.From 55 individuals of Lahu ethnic 16 DRB1 alleles were detected.The three most common alleles were HLA-DRB1*12021(30.909%),09012(15.455%),15011(13.636%),and they covered 60% of the total alleles detected from Lahu ethnic.HLA-DRB1*1413,*11081,*1312,*1418,*1504 were the first time detected in the Chinese,and were very rare in worldwide ethnic groups.With comparison of HLA-DRB1 gene frequencies between various ethnic groups we analysized the characteristics of HLA-DRB1 gene distribution in worldwide populations,and constructed the phylogenetic tree by Neighbor-joining method and Nei measure of genetic distance.The result showed Lahu ethnic obviously belong to the Chinese South ethnic groups and can't trace its origin from northern groups with the HLA-DRB1 genetic data.The preliminary explanations about the contradiction were given in this paper.     

日本三株斜纹夜蛾核型多角体病毒的增殖特性及其多角体蛋白基因的序列分析

利用斜纹夜蛾Spodoptera litura培养细胞,对近年来在日本本州、九州和四国等地发现并筛选出的对斜纹夜蛾幼虫具有强烈杀虫活性的3株斜纹夜蛾核型多角体病毒(SpltMNPV)（K-3、G1-2和G10-3）进行了生物学活性和分子生物学的初步研究,克隆了多角体蛋白基因,并进行了序列分析和比较。结果表明:（1）SpltMNPV日本分离株K-3、G1-2和G10-3分别具有不同的特征性酶切图谱,分别属于3种基因型（A型、B型和C型）; （2）3个分离株的芽生型病毒（budded virus）产生能力和多角体产生能力有差异,免疫印迹分析表明,多角体蛋白的分子量也不同;（3）日本株SpltMNPV核型多角体蛋白结构基因由747个核苷酸编码序列（编码249个氨基酸）组成,其序列与中国株SpltMNPV的同源性为98.9%,与其他6种核型多角体病毒有较高的同源性（61.7%～74.2%）,但其5′端侧翼序列(nt-1～-100)与AcMNPV和BmNPV相比差异显著,在对该基因表达调控起决定性作用的8个高度保守核苷酸序列中（nt-44～-51）有2处发生自然突变。     

生态系统基于性状调节的物种间接作用:特征、成因及后果

物种之间的间接作用关系是维持生物群落结构以及生态系统功能的关键因素。目前的理论模型和实验性研究均认为,物种间接作用的传递主要是由物种的密度变化所引起。但大量的实验证据表明,生物个体在形态、生理、行为和生活史性状的适应性变化,是物种间形成间接互作关系的另一个重要机制。生态学家把这种基于物种性状调控的种间关系称为性状调节的间接作用。深入了解性状调节的间接作用类型,发生机制和作用途径,有助于阐释自然界中多物种种间关系的复杂性和多样性形成机制。对性状调节的概念和性状的分类进行系统的总结,指出性状可塑性和物种特异性是物种间性状调节关系形成的两个重要机制。与其他类型的种间互作一样,性状调节的种间作用是驱动物种进化的重要力量。此外,分析了性状调节在自然群落中传递的几个重要途径,并强调这些间接作用在影响和调节生态系统功能和过程中的重要作用。最后,就性状调节种间关系的研究对象、研究尺度、以及研究方法等问题提出若干建议,为今后对这一问题的研究提供相关参考。     

大学生群体性发热被隔离时的心理干预护理及其疗效分析

目的:研究高校卫生所对于大学生群体性发热被隔离治疗时的心理问题以及比较分析应用心理干预改善大学生对于重症传染病的焦虑、恐慌等心里问题对于改善病人症状的疗效观察。方法对选自我校卫生所收治的100例发热大学生,在进行常规药物治疗的同时予以心理干预,并进随时进行心理测查,以了解心理干预对于大学生群体性发热的效用。结果经过心理干预的大学生于未经过心理干预的大学生间,病情得到改善情况具有显著差异性,即P<0.01具有统计学意义。结论对群体性发热被隔离治疗的人群早期给予心理干预很有必要,有利于改善病人的发热病情。     

BBP、DBP、BPA、NP对鸡胚胎生殖腺发育的影响

雌性荷尔蒙已烯雌酚(Diethylstilbestrol,DES)可以导致鸡受精卵雌性化,为了明确环境荷尔蒙疑似物邻苯二甲酸丁酯苯甲酯(Butyl benzyl phthalate,BBP)、邻苯二甲酸二丁酯(Dibutyl phthalate,DBP)、双酚A(Bisphenol A,BPA)、壬基酚(Nonyl Phenol,NP)是否和DES一样具有雌性荷尔蒙的作用,本研究以不同浓发的BBP、DBP、BPA、NP注射到鸡的受精卵内,观察生殖腺的发育及其受到的影响.结果 表明:BBP导致雌性雏鸡的生殖腺重量显著增加;DBP、BPA、NP对鸟类生殖腺的发育没有显著影响;BBP、DBP、BPA、NP没有出现与DES类似的雌化现象;不能引起雄性个体的雌性化.