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目的构建小鼠Sema4D慢病毒过表达载体。方法采用Gateway技术将体外合成小鼠全长Sema4D基因插入并重组到预先已经插入荧光标记基因片段IRES的质粒中,阳性菌落由Ampicillin筛选后,大量繁殖,获得大量转染后的质粒,经过测序鉴定后,经慢病毒包装,转染293T细胞,经由Neomycin筛选,获得高滴度的病毒液。结果测序结果显示Sema4D基因共有2 586 bp,重组慢病毒载体共有11 966bp,其中Sema4D插在CMV启动子和IRES标记序列之间,位置为2569-5144。测序结果表明小鼠Sema4D基因已经成功构建到过表达慢病毒载体中。结论小鼠Sema4D基因慢病毒过表达载体Lenti-CMV-sema4D-IRES-PGK-neo能够正确构建,该载体为研究小鼠Sema4D基因在特定细胞内过表达株的筛选奠定基础,为其作用机制的研究提供用力工具。 相似文献
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肿瘤侵袭研究除需要科学的研究方法外．更需要良好的模型为保障。目前体外侵袭模型有5种,各有其优点。建立人羊膜基底膜侵袭模型（HABM）．用于体外癌细胞侵袭行为的研究,为许多实验者所采用。但是许多国外文献仅展示模式图,且国内尚无模型商品。国内研究者采用了一些方法自制该模型,如两个大小相近的试管或蛋壳相套,两块24孔培养板叠加在一起,去除上层培养孔底等。这在消毒．减少污染及换液等方面存在一定的困难。我们自制了玻璃人羊膜基底膜侵袭模型,经数次实验应用,取得了良好的效果。一、玻璃模型的设计与制作：模型原理的模… 相似文献
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