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将猪生长激素基因(PGH)克隆到质粒pUC19上,经酶切分析,确定其酶切图谱.把PGH转录起始位点以前的序列切掉,换上羊MT-1a基因的启动子,构建成可以调控的表达载体pSMTPGH,用于转基因动物的研究.采用微注射法将线状pSMTPGH导入猪、鼠和金鱼的受精卵中,得到了相应的转基因动物.对这些动物鉴定分析表明,外源基因整合率因动物不同而异,但该基因在这3种动物中的整合率均在9%以上,其生长速度都高于对照组. 相似文献
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为了深入探讨性分化分子机制,构建了小鼠基因文库以SRY探针筛选,分离到了两组阳性克隆,一组含EcoRⅠ/3.5kb,此片段中载有小鼠Y染色体上的Sry基因.另一组含EcoRⅠ/3.0kb或SalⅠ/3.0kb,此片段有小鼠Y染色体之外的Sox基因 相似文献
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近些年来随着原位杂交技术的不断改进,该技术已广泛用于染色体的基因定位。非放射性标记探针的应用使基因定位变得更加简单易行,从而有可能对动物的转基因进行定位研究。本文首次采用胶体金标记药盒(Antidigoxigeningold)和银加强试剂(Silverenhancementreagents)的非同位素原位杂交技术对转基因猪外源基因进行了定位研究。如Fig.1所示:表达质粒pSMTPGH含有载体pUC19,羊启动子MT011和猪生长激素PGH基因。选5头带有pSMTPGH的转基因猪,分别制备含有染色体DNA的杂交膜。用BglII和SmaI对pSMTPGH进行完全酶切,收集0.9Kb片段作为探针,以dig11dUTP进行标记。探针与DNA杂交后,用Antidigoxigeningold和Silverenhancementreagents进行显色反应。胰酶法G—显带后,用光学显微镜检查。选择分散相良好、显影银颗粒清楚的玻片进行摄影记录(Fig.2)。对染色体上的显影银颗粒进行统计分析,参照家猪的染色体标准带型,确定外源PGH基因整合位点。Fig.3为4104号转基因猪染色体上的银颗粒分布情况。对5头 相似文献
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Short-term cultured cumulus cell lines (1-5BCC) derived from 5 individual cows were used in nuclear transfer (NT) and 1188 enucleated bovine oocytes matured in vitro were used as nuclear recipients. A total of 931 (78.4%) cloned embryos were reconstructed, of which 763 (82%) cleaved, 627 (67.3%) developed to 8-cell stage, and 275 (29.5%) reached blastocyst stage. The average cell number of blastocysts was 124±24.5 (n=20). In this study, the effects of donor cell sources, serum starvation of donor cells, time interval from fusion to activation (IFA) were also tested on cloning efficiency. These results showed that blastocyst rates of embryos reconstructed from 5 different individuals cells were significantly different among them (14.1%, 45.2%, 27.3%, 34.3%, vs 1.5%, P<0.05); that serum starvation of donor cells had no effect on blastocyst development rate of NT embryos (47.1% vs 44.4%, P>0.05); and that blastocyst rate (20.3%) of the group with fusion/activation interval of 2-3 h, was significantly lower 相似文献
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用人型复合分枝杆菌的特异插入序列IS6110和IS1081制
备探针,对5种限制性内切酶消化的结核分枝杆菌DNA进行杂交。结果表明,经PvuⅡ酶消化
的结核分枝杆菌DNA,用IS6110制备的探针进行杂交呈现高度多态性,说明IS6110对于人型
复合分枝杆菌分型研究和结核病流行病学研究具有很大价值。用IS6110制备的317bp探针对4
6株人结核分枝杆菌分离株多态性分析研究证实,这些菌株呈现高度DNA多态性,而且所含拷
贝数也极为不同,一般含7~18个拷贝。 相似文献
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实时荧光定量PCR技术是分析基因表达谱的一种常用方法,在分析中选择合适的内参基因对数据进行校正是得到可信数据的关键。以Lactobacillus helveticus H9为研究对象,应用实时荧光定量PCR技术,评价了5种常用内参基因ldh、recA、rpoB、gapdh和16S rRNA的表达稳定性,通过geNorm和NormFinder程序进行数据分析,结果表明5个候选内参基因在菌株不同的发酵时间点表达相对都较为稳定,结合两种分析得到其中最为稳定的基因是ldh,适合于用作后续实时荧光定量PCR试验中的内参基因。 相似文献
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组织蛋白酶S与ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的实验研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:观察组织蛋白酶S(Cathepsin S)在不同周龄我脂蛋白E基因缺陷(ApoE-/-)小鼠主动脉的表达,初步探讨Cathepsin S对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(As)病变的影响.方法:将16只8周龄ApoE-/-小鼠随机分为两组:16周龄组(n=8),24周龄组(n=8),均饲以高脂饮食,分别在16周龄和24周龄处死动物.采用普通光镜、病理图象分析法测定主动脉As斑块面积及管腔面积;免疫组织化学染色方法观察组织蛋白酶S(Cathepsin S)在不同周龄ApoE-/-小鼠主动脉的表达.结果:16周龄组ApoE-/-小鼠主动脉根部出现As病变;与16周龄组ApoE-/-小鼠相比,24周龄组ApoE-/-小鼠主动脉根部As病变显著增强(P<0.01),免疫组化显示Cathepsin S表达明显增加(P<0.01).结论:Cathepsin S在ApoE-/-小鼠主动脉的表达随As病变程度增强而显著增加. 相似文献