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1.
转基因猪外源基因染色体定位的研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
转基因猪外源基因染色体定位的研究EXOGENOUSGENELOCALIZATIONONCHROMOSOMESOFTRANSGENICPIG关键词基因定位染色体原位杂交转基因猪KeywordsGeneLocalization,Insituhybrid...  相似文献   
2.
单个植入前胚胎mRNA差异显示方法的建立   总被引:19,自引:1,他引:18  
在已有的研究基础上,优化和建立了单个植入前胚胎的mRNA差异显示(single preimplantation embryo differential display polymerase chain raction,SPEDDRT-PCR).以小鼠单个成熟的卵母细胞和单个的2细胞期胚胎作为起始材料,比较二者之间基因的表达差异.选择在卵母细胞中不表达而在2细胞期表达的差异片段.进行GenBank检索和表达序列标签(EST)库电子克隆.与多胚研究方法一样,由线粒体编码的和2细胞特异表达的NADH脱氢酶亚单位2和ATPase 6证实了SPEDDRT-PCR方法是可行而且可靠的,是一种需要材料极少、应用广泛而有效的基因分离方法.  相似文献   
3.
用DDRT-PCR技术克隆小鼠早期胚胎发育相关基因   总被引:12,自引:0,他引:12  
mRNA差异显示 (DDRT PCR)技术在哺乳动物早期胚胎发育相关基因研究中的应用 ,因获得足够量的早期胚胎材料困难而受到限制 .通过对DDRT PCR技术各种条件参数进行优化组合 ,并对某些环节进行改良 ,以小鼠的MⅡ卵、2 细胞胚胎和 4 细胞胚胎为材料进行差异显示 ,仅以相当于5 0个卵细胞的量为起始材料 ,便得到了理想的差示结果 .从差异条带中挑取感兴趣的差异条带进行回收、阳性鉴定、亚克隆、序列分析、并在反向Northern杂交基础上设计了鉴定实验 .结果发现 ,有一个片段差异显著且是阶段性特异表达 .经GenBank检索 ,发现该片段仅有同源的EST ,其全长及功能尚不清楚 ,是一个功能未知基因 ,将该片段命名为ed1.反向Northern杂交结果表明 ,ed1在 2 细胞期胚胎中有表达 ,而在MⅡ卵及 4 细胞胚胎中均不表达 .  相似文献   
4.
体内系统转基因新方法   总被引:4,自引:0,他引:4  
建立了一种全新而高效的制备转基因动物新方法.无需外科手术,将含有绿色荧光蛋白的重组质粒直接多次多点反复注射到雄性ICR小鼠的睾丸内.几周后,上述雄性动物与自然发情的雌性交配,制备转基因动物.经PCR检测、DNA印迹,实验结果表明:F1代小鼠转基因阳性率为41%.经DNA印迹证明:外源基因已经整合到子代转基因动物的基因组内并能遗传给后代.将F1代阳性鼠与正常ICR鼠交配,产生F2代转基因鼠,F2代转基因阳性率37%.上述实验结果表明,建立的体内系统转基因方法简便、高效,适用于大规模制备转基因动物,特别适用于一些大型家畜.  相似文献   
5.
转基因猪体内外源基因的整合鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
外源猪生长激素基因被导入湖北白猪.为避免羊、猪之间在金属硫蛋白启动上的同源性而造成PCR检测结果的假阳性,分别将PCR合成反应的两个引物设计在羊金属硫蛋白基因启动子一侧和猪生长激素一侧,使PCR合成反应的结果特异地反映外源基因的整合性,准确地鉴定出转基因猪.DNA印迹分析结果表明,43头待检仔猪中有6头呈外源基因整合阳性.  相似文献   
6.
哺乳动物的输卵管精心设计了一个独特的液体环境 ,使得雌、雄性生殖细胞的运输及最终成熟、受精和早期胚胎发育能够顺利进行 .其中有一种源于分泌细胞的蛋白—发情相关的输卵管糖蛋白 (estrus associatedoviductualglycoprotein ,EGP) ,自从Sutton等于 1984年首次在绵羊中发现的[1] ,在其他的物种中 ,如 ,狒狒、人、小鼠、猕猴、牛、羊、猪、仓鼠等 ,也都有发现[2 ,3 ,4] .虽然已有实验数据证明 ,当卵子经过输卵管时 ,它们可与卵子的透明带 (zonapellucida ,ZP)和 或卵黄周…  相似文献   
7.
红细胞发生的研究主要依赖于MEL细胞系和分离到的少量的小鼠成红细胞。MEL细胞由Friend病毒转化而来 ,对促红细胞生成素不敏感 ;而成红细胞主要来源于鸡、人、小鼠、大鼠胎肝、小鼠肾脏或骨髓 ,因量少 ,所以严重困扰着红细胞发生在分子水平上的研究。本文采用现宰杀的胎羊血液 ,不仅满足了分子生物学起始材料量的要求 ,又能直接反映出红细胞发生在体内的真实状况。通过对mRNA差异显示技术的改进 ,在DNA测序胶上比较胎羊成红细胞和怀孕母羊淋巴细胞扩增的cDNA片段 ,发现两条差异条带 :其中一个片段是新基因 ,进行蛋白质序列预测发现与UV敏感的锥状视蛋白、视紫红质有一定的同源性 ,由于其血细胞对辐射很敏感 ,故推测该片段与辐射造成的细胞杀伤作用有关 ;另一个片段为葡萄糖诱导基因 /延伸因子 2的 3′非编码区 ,该片段最早在葡萄糖诱导后的牛主动脉平滑肌细胞被克隆到。通过反向Northern杂交证明 ,所发现的新基因具有真实性。  相似文献   
8.
兔移核重构胚再程序化相关基因片段的分离与鉴定   总被引:3,自引:0,他引:3  
用单个植入前胚胎mRNA差别显示方法(Single Preimplantation Embryonic mRNA Differential Display Reverse Polymerase Reaction,SPEDDRTPCR),以家兔移核重构发育至2细胞、8细胞时期的胚胎及囊胚作为起始材料。研究家兔移核重构胚再程序化相关基因的表达。获得了25个与再程序化相关的基因片段,完成了对所有片段的克隆、序列分析,其中5个反向Northern证实的片段在从MⅡ到囊胚的发育阶段中呈现特异性表达的特点。这项研究为再程序化相关基因全长的分离以及功能研究奠定了良好的基础。  相似文献   
9.
定做蛋白质     
计算机作图和基因拼接正帮助研究人员创制出适用于工业和医学的新分子。 工业化学家早已知道,就其经济性、效率、以及用途的多样性而言,很难有其它的蛋白质能超过酶(它是生物体内催化化学反应的蛋白质大分子)。酶通常被用于多种化学过程,其范围包括医疗诊断,食品、饮料、医用药品,工业化学药品以及洗涤剂的生产。  相似文献   
10.
猪Follistatin cDNA克隆及在大肠杆菌中的表达   总被引:7,自引:0,他引:7  
提取猪卵巢总RNA,用RT-PCR方法克隆了猪FollistatincDNA的完整开放阅读框,长1038bp。将FollistatincDNA连接到原核表达载体pGEX-4T-3中,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导,进行了GST-FS融合蛋白表达。用SDS-PAGE和Western杂交检测,结果显示在63kD处有特异性表达蛋白。  相似文献   
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