猪FSHβ亚基基因结构区逆转座子插入突变及其与猪产仔数关系的研究

通过聚合酶链式反应 (Polymerasechainreaction ,PCR)对猪FSHβ亚基基因结构区的插入突变进行了精确定位 ,并对插入片段进行了克隆及序列测定 ,发现该插入片段位于猪FSHβ亚基基因已发表序列的 +80 9与 +810碱基中间 ,长度为 2 92bp ,两端具有相同序列并具有一个 polyA结构 ,为一典型的逆转座子结构 (retroposon) .在此基础上 ,成功地创建了PCR程序对几个猪种的个体进行了FSHβ亚基基因位点的基因分型 ,分析了FSHβ位点在不同猪种中的多态性分布情况 ,并把FSHβ亚基基因作为控制猪产仔数主效基因的候选基因与猪产仔数进行了连锁分析 ,首次证明FSHβ亚基基因座位在约克夏、长白、杜洛克等商业猪种中与控制猪产仔数的主效基因紧密连锁 .优势基因型AA纯合子比BB型纯合子母猪平均每胎多产仔 1.5头 .     

哺乳动物体细胞核移植研究进展及应用前景

哺乳动物体细胞核移植克隆技术成功于１９９７ 年,曾引起世界范围内的广泛关注,本文综述了体细胞克隆技术在近两年内的最新研究进展及其在生产、医疗和科学研究方面的应用前景。     

FSHβsubunit gene is associated with major gene controlling litter size in commercial pig breeds

Ｌｉｔｔｅｒｓｉｚｅｉｓａｖｅｒｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｔｒａｉｔｔｏｐｉｇｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｉｃｕｌｔｔｏｉｍｐｒｏｖｅｂｙｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｂｒｅｅｄｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｄｕｅｔｏｉｔｓｌｏｗｈｅｒｉｔａｂｉｌｉｔｙ.Ｍａｒｋｅｒａｓｓｉｓｔｅｄｓｅｌｅｃｔｉｏｎ(ＭＡＳ)ｉｓｔｈｏｕｇｈｔａｓａｎｅｗａｐｐｒｏａｃｈ,ｗｈｉｃｈｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｉｍｐｒｏｖｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｔｒａｉｔｓｏｆｌｏｗｈｅｒｉｔａｂｉｌｉｔｙｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌ…     

转pGH基因猪外源基因染色体定位研究

应用地高辛标记探针对转pGH基因(猪生长激素基因)猪染色体进行原位杂交,经胶体金抗体、银增强放大系统检测外源pGH基因在染色体上的整合位点。研究表明,转基因阳性个体间外源基因整合位点存在差异,但对个体而言,外源基因总是集中分布于某一特定的染色体上。本研究将为探究外源基因整合位点与其表达效率的关系及今后定点整合的研究提供理论指导。     

牛体外受精胚胎的基因组甲基化模式

利用抗5-甲基胞嘧啶(5MeC)抗体免疫荧光法检测了体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)和体外培养(IVC)的牛合子及早期胚胎的基因组甲基化模式. 实验结果表明: 有61.5%的合子发生了雄原核去甲基化, 而34.6%的合子没有发生去甲基化; 当胚胎发育到8-细胞时, 甲基化水平明显下降, 且一直到桑椹胚期仍维持低甲基化状态, 但同一枚胚胎的不同卵裂球之间甲基化水平不同; 在囊胚期, 内细胞团细胞的甲基化水平很低, 而滋养层细胞的甲基化水平却很高. 本研究结果至少部分地提示, IVM/IVF/IVC可能对牛合子及早期胚胎的甲基化模式有一定影响.     

家兔供体卵裂球细胞周期对核移植胚胎发育的影响

通过化学药物处理使家兔桑椹胚卵裂球的细胞周期分别同期化于G1、S或G2期 ,然后分别移入去核的MⅡ期卵母细胞中 ,以研究供体核细胞周期对家兔胚胎细胞核移植效率的影响。试验结果表明供体核细胞周期对家兔核移植胚胎的发育潜力有明显影响 ,以G1期卵裂球为供体的核移植重组胚的激活率、卵裂率、桑椹胚、囊胚和孵化囊胚率及囊胚平均细胞数分别为 87 3% (32 2 / 36 9)、 84 9% (2 99/ 35 2 )、 71 5 % (193/ 2 70 )、5 8 0 % (76 / 131)、 35 1% (4 6 / 131)和 12 6± 4 8,显著高于S期 [79 6 % (10 9/ 137)、 74 4% (93/ 12 5 )、30 3% (33/ 10 9)、19 3% (17/ 88)、 6 8% (6 / 88)和 118 8± 3 5 ]、G2期 [6 3 6 % (70 / 110 )、6 0 % (6 0 / 10 0 )、16 9% (11/ 6 5 )、 16 3% (7/ 43)、 4 7% (2 / 43)和 110 6± 5 8]和未经同期化处理的卵裂球 [78 1% (185 /2 37)、 73 2 % (15 8/ 2 16 )、 49 4% (4 3/ 87)、 32 2 % (2 8/ 87)、 12 6 % (11/ 87)和 12 0 5± 4 4](P <0 0 5 )。来源于G1期卵裂球的 144枚克隆胚胎移植到 12只受体中 ,6只妊娠并产下 19只活仔 ,产仔率为 13 2 % ,显著高于来源于S期 (5 8% ,7/ 12 0 )、G2期 (0 ,0 / 12 6 )或未同期化卵裂球的克隆胚胎 (5 3% ,8/ 15 0 ) (P <0     

动物乳腺生物反应器的现状和趋势

利用转基因家畜的乳腺生产人类重组蛋白,可以高效获得安全、足量的药用蛋白。本文针对乳腺生物反应器的成功研制,从目的基因的选择、载体构建、转基因技术等方面探讨了动物乳腺生物反应器的研究现状。分析了提高转基因效率和外源蛋白表达水平的技术途径,提出了降低总体成本的战略措施。特别探讨了利用Cre-loxP系统发展“体细胞打靶体细胞核移植技术体系”,高效生产乳腺生物反应器动物的可能性。     

转pGH基因猪血清pGH含量的分析

用ELISA方法分别测定了3头F0代成年阳性猪和8头F1代幼年阳性猪血清 pGH的水平,发现阳性个体间在激素含量及变化趋势上有很大差别,其中F1代个体pGH变化趋势与阴性对照较为一致。研究结果表明阳性个体本身性别及生理状况与外源基因表达有关,同时也反映出外源 pGH基因的表达状况与该基因在宿主基因组中的插入位点不同有着密切的联系。     

兔转基因单细胞克隆株的分离培养及其染色体倍性分析

为检测原代二倍体细胞转基因后单细胞克隆的增殖能力及其染色体倍性稳定性,用脂质体介导的转染方法将质粒DNA pEGFP-C1（带有报告基因GFP和Neo^r）导入体外培养的兔胎儿成纤维细胞中,经G418药物筛选后,分离出73个GFP阳性细胞克隆,最后存活13个（18％）,对其中9个克隆的染色体倍性进行分析,结果只有2个（22％）克隆的染色体倍性正常率在75％以上,分别为80％和75％,其余7个克隆的染色体倍性正常率均在70％以上。这表明,当使用转基因单细胞克隆株作为供核细胞产生克隆动物时,单细胞克隆的增殖代数和染色体倍性的稳定性需要进一步研究提高。