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细胞周期调节蛋白在细胞周期的G_1期和S期交界处开始合成,S期结束后消失。细胞内定位在核内,又称分裂细胞核抗原。细胞周期调节蛋白含量与细胞分裂状况直接有关。细胞周期调节蛋白为细胞DNA复制所必须,是DNA聚合酶δ的活化蛋白。因此细胞周期调节蛋白对于真核生物DNA复制的调控及细胞分裂具有重要意义,值得重视。 相似文献
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本工作组建了一个含Tac启动子(promoter)的表达载体质粒pTL。pTL带有Trp-35区、Lac-10区及两个终止区(t_1t_2),并带有EcoRⅠ、SmaⅠ、BamHⅠ、SalⅠ、PstI及HindⅢ等单一酶切点,可以在这些切点中插入各种基因片段,由Tac启动子促进基因的表达。在Ap抗性基因中无PstⅠ切点,故在PstⅠ切点插入外源基因后,Ap抗性不受影响。用pTL表达人干扰素αD基因,获得较高的产率,每立升菌液约得8.2×10~7单位,相当于每立升4mg干扰素。 相似文献
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家蚕微粒子病原虫(Nosema bombycis)小亚基核糖体RNA全基因的克隆及其二级结构的构建 总被引:5,自引:0,他引:5
在用PCR技术扩增、克隆、测序了家蚕微粒子病原虫Nosema bombycis (镇江株)小亚基核糖体RNA基因核心序列(5'-端起1 200 bp)的基础上,用SSP-PCR技术克隆了核心序列3'-端下游序列,从而获得了家蚕微粒子病原虫小亚基核糖体RNA基因的全序列共1 233 bp。 用RnaViz 、Forcon、DCSE等生物软件构建了家蚕微粒子病原虫小亚基核糖体RNA的二级结构,与其它微孢子虫及真核生物小亚基核糖体RNA的二级结构相比,该二级结构缺乏螺旋10、E10-1、11、18、E23-n和43。 相似文献
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蛋白质的磷酸化作用和泛肽化降解作用与芽殖酵母细胞周期的调控 总被引:2,自引:0,他引:2
在芽殖酵母(Saccharomycescerevisiae)细胞中,G1期的三种cyclins和S、M期的五种cyclins之周期性的合成和分解调节着Cdc28的活性,驱动细胞周期的正常运转。除了CDK的磷酸化作用外,蛋白质的泛肽化降解作用间接或直接调控细胞周期:CDC34泛肽化途径通过降解Cdc28的专一抑制子而起始DNA复制;APC泛肽化途径通过降解M期后期的抑制子和M期cyclins,使姐妹染色体分离和M期终止。 相似文献
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本文通过同源重组方法,构建了一系列单倍体缺失株:pho85△单缺失株YPH600、pho85△cln1△双缺失株YPH610、cln1△cln2△双缺失株YPH640和半乳糖诱导存活的pho85△chn1△cln2△(GAL1-10PHO85)三缺失株YPH630。比较不同缺失株的生长速度可以看出,PHO85单基因缺失比CLN1、CLN2双基因缺失对细胞生长速度的影响大。在去诱导的不同时间,取细胞进行光学显微镜形态学分析及DNA含量的流式细胞计量分析(FACS)。结果表明YPH630三缺失株的单倍体酵母细胞休止在G1期。 相似文献
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核酶对靶RNA的体外切割反应的计算机分析 总被引:16,自引:2,他引:14
我们用计算机分析了锤头结构核酶的体外切割反应。计算了反应中△Es’,△Er’和△E三种假设的能量变化,△Es’是底物从最稳态转变为松弛状态所需要的能量,△Er’是核酶从最稳态转变为松弛状态所需要的能量;△E是由松弛状态的核酶和底物相互作用时的能量降低。我们发现,△Es’或△Er’高则反应切割效率低,而△E则既与反应切割效率又与反应的最适温度有关。△Es’,△Er'和△E可以根据核酶和废物的核苷酸序列进行计算,因此我们的模型可以用于核酶的设计。 相似文献
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合成了3′末端三个磷酸二酯键硫代修饰的针对DNA聚合酶α的反义核苷酸ASα,利用[3H]TdR参入方法测定了ASα对于HeLa细胞DNA复制的抑制效力。结果表明,这种修饰明显增强了寡核苷酸在含血清的细胞培养液中的稳定性。Lipofectin能够促进ASα的入胞并且增强其抑制效力。DEAEDextran也能提高ASα的效力 相似文献
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优化外源基因在大肠杆菌中表达的翻译起始率的策略和方法(英文) 总被引:1,自引:0,他引:1
mRNA的翻译起始区(TIR)的二级结构对翻译起始率有很大的影响。本文建立了一种改进外源基因在大肠杆菌中翻译起始率的系统。以人分裂细胞核抗原(PCNA)基因为模型,将PCNA基因5′端编码区的114bp的顺序插入质粒pTZ19R中LacZ′的5′端构成融合基因。用定点突变法在PCNA的AUG的8位插入一个Shine/Dalgarno(SD)顺序GAGGT,再以合成的带部分随机序列寡核苷酸作引物,用PCR法在SD顺序两侧,即SD上游6个碱基和SD与AUG之间7个碱基,进行随机突变,它们与结构基因5′端序列形成各种可能的翻译起始区(TIR)二级结构。重组质粒转化大肠杆菌株JM109(DE3),5′PCNA-lacZ′mRNA可通过诱导表达T7RNA聚合酶而得到专一而有效的转录。通过在X-gal板上蓝色筛选以及随后的杂交鉴定,共得到269个5′PCNA-lacZ′融合质粒。从中选择8个不同蓝色的重组子进行β-gal活性测定,结果表明它们的酶活性相差在20倍以上。而RNA点杂交表明它们在转录水平无明显的差异。由此提示,通过此策略和方法能得到一个在大肠杆菌中能高效表达的翻译起始区。 相似文献