修饰和导入技术对于反义寡核苷酸的影响

合成了３′末端三个磷酸二酯键硫代修饰的针对ＤＮＡ聚合酶α的反义核苷酸ＡＳα,利用［３Ｈ］ＴｄＲ参入方法测定了ＡＳα对于ＨｅＬａ细胞ＤＮＡ复制的抑制效力。结果表明,这种修饰明显增强了寡核苷酸在含血清的细胞培养液中的稳定性。Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ能够促进ＡＳα的入胞并且增强其抑制效力。ＤＥＡＥＤｅｘｔｒａｎ也能提高ＡＳα的效力     

混合Ribozyme联合切割小鼠腺苷脱氨酶mRNA研究

采用计算机辅助设计得到针对小鼠腺苷脱氨酶ｍＲＮＡ的４种ｒｉｂｏｚｙｍｅ,它们均能在各自的切点切割ＲＮＡ分子,４种ｒｉｂｏｚｙｍｅ经组合后成混合ｒｉｂｏｚｙｍｅ,它们分别含有２种、３种和４种ｒｉｂｏｚｙｍｓ。通过对体外转录靶ＲＮＡ分子的联合切割研究表明,随着ｒｉｂｏｚｙｍｅ种数的增加,其中以（Ｒｚ２６２＋Ｒｚ４５５＋Ｒｚ５８３）组成最为理想,由此证明混合ｒｉｂｏｚｙｍｅ中,各种ｒｉｂｏｚｙｍｅ不仅保     

mRNA翻译起始区构效关系的研究

本文分析了9个表达量相差55倍的5′PCNA-LacZ′重组子的TIR二级结构与翻译起始效率的关系。在5′NTR顺序确定为28个核苷酸(从转录起始位点起)时,TIR范围在约编码第12个密码子(第33至37核苷酸)处存在一个二级结构及其△G的变化阈位,在该阈位处按表达量调正重组子TIR的范围,得到△G与表达量之间相关系数为0.97的曲线;在TIR二级结构中,起始密码子处于配对的空间位置对翻译起始效率有明显抑制作用,但SD顺序的空间位置与表达量之间无明显相关性。     

应用反义技术研究DNA聚合酶ε在HeLa细胞DNA复制中的功能

我们应用以义技术,结合Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ导入和ＧＰＴ筛选方法,研究了ＤＮＡ聚合酶ε在ＨｅＬａ细胞ＤＮＡ复制过程中的功能,针对ＤＮＡ聚合酶ε和α的反义寡核苷酸都能够专一地抑制ＨｅＬａ细胞的ＤＮＡ合成。首镒直接证明了ＤＮＡ聚合酶ε在哺乳动物细胞的ＤＮＡ复制过程中具有重要作用。．     

碱基上的氨臂对T4多核苷酸激酶催化的影响

寡聚核苷酸内部和5′末端含有的氨臂修饰胸苷酸,能够明显地影响T₄多核苷酸激酶催化的[γ- ³²P]ATP的转移反应.其转移效率为未修饰寡聚核苷酸的50%和2%.这种修饰的寡聚核苷酸对T₄ RNA连接酶催化的反应没有影响.     

固定化锤头状ribozyme的初步研究

用共阶连接方式将专一切割苜蓿夜蛾核多角体病毒多角体蛋白ｍＲＮＡ片段的锤头状ｒｉｂｏｚｙｍｅ（ｈａｍｍｅｒｈｅａｄｒｉｂｏｚｙｍｅ）固定在ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ上,ｒｉｂｏｚｙｍｅ与载体之间有１９个原子的距离,研究并比较了该固定化ｒｉｂｏｚｙｍｅ与游离（非固定化）ｒｉｂｏｚｙｍｅ的底物专一性,催化活性,最适反应温度以及热和保存稳定性,讨论了固定化ｒｉｂｏｚｙｍｅ与固定化酶在性质上的相似性及固定     

细胞周期研究的新进展

细胞周期研究的新进展陆长德（中国科学院上海生物化学研究所２０００３１）主要来自三方面的研究以及它们之间的相互交叉对于细胞周期研究的进展起了很大的作用。十多年来酵母分子遗传学的研究鉴定了许多与细胞周期的控制有关的基因,提供了许多突变株（如ＣＤＣ）;１９８８年对蛙卵成熟促进因子ＭＰＦ成分的鉴定和对它生物学功能的确定使人们对细胞周期的认识有了一个飞跃;人类的致癌基因（如Ｔａｇ）,肿瘤抑制基因（如p53,pRB)以及其他一些疾病(如对电离辐射敏感的遗传病,AT的分子机制的研究也大大地促进了细胞周期的研究。     

大肠杆菌DNA聚合酶I的“碱基选择”作用

用双脱氧核苷酸研究了大肠杆菌ＤＮＡ聚合酶Ｉ的Ｋｌｅｎｏｗ片段的“碱基选择”作用。当引物末端为３＇ＯＨ时，Ｍｎ＾２＋代替Ｍｇ＾２＋对ｄＮＴＰ的Ｋｍ影响不大，而使ｄｄＮＴＰ的Ｋｉ大大降低，非配对的ｄｄＮＴＰ仍无抑制作用。当引物末端为ｄｄＮＭＰ且与模板配对时是ＤＮＡ合成的抑制剂，与模板配对的下一个ｄＮＴＰ可增强这一抑制作用，Ｍｎ＾２＋代替Ｍｇ＾２＋使ｄＮＴＰ的诱导作用大大增强而ｄｄＮＴＰ无诱导作用。这些     

肺炎克氏杆菌(Klebsiellapneumoniae)中的二种不寻常核苷酸的酶促合成和鉴定

我们用肺炎克氏杆菌的粗酶制剂研究了腺苷多磷酸化合物的酶促合成。在用30～50%饱和度硫酸铵沉淀蛋白进行的反应中,发现了二个化合物。经鉴定证明这二个化合物分别是A~5′ppp~5′A和A~5′pppp~5′A。本文还报道了一种制备α-~(32)P标记核苷酸的方法。