rBS-WC(O139)霍乱疫苗的小鼠免疫试验

1992年起在印度和孟加拉国相继发生的O139霍乱,目前已迅速传播到其周边国家,对我国亦已构成严重威胁。当前全世界预防霍乱的工作更加复杂,除了要针对O1群霍乱弧菌研制保护期长、保护效率高的疫苗外,还要对这一新发现的时隐时现的烈性腹泻病原菌快速作出反应,及时分析其保护性抗原,构建有效疫苗,以控制疫情发展。 O139霍乱弧菌与O1群霍乱弧菌有很大不同,特别在菌体抗原方面存在显著差异。O1群菌感染的患者康复后对同群菌的冉感染有免疫保护作用,而对O139群菌的感染则无此保护作     

恶性疟原虫DNA疫苗的研究进展

疟疾是世界上严重危害人类健康和生命的一种寄生虫病,每年有几百万人因这种病而死亡。研制有效疫苗,是预防和控制疟疾流行的重要措施。DNA疫苗,确切地说叫做DNA介导的免疫,是指通过注射或轰击等手段,将携带有抗原基因的表达载体导入到宿主有机体中,产生具有免疫原性的蛋白质。这种方法与传统的战略如活病毒或亚单位疫苗相比有几个潜在的优点:①注射DNA产生的体内蛋白表现出天     

人胸腺素α原cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

采用基因工程方法制取人胸腺素α原获得成功。用２０ｕｇ／ｍｌ植物血球凝集素（ＰＨＡ）和５００Ｕ／ｍｌ重组人白细胞介素２（ＩＬ－２）联合刺激人胎儿胸腺细胞,从中提取总ＲＮＡ,经反转录ＰＣＲ获得了人胸腺素α原ｃＤＮＡ;将之克隆入ｐＵＣ１９中,序列测定表明与已报道序列一致,进一步将之亚克隆入原核表达载体ｐＢＶ２２０,转化大肠杆菌ＤＨ５ａ．观察到在不改变氨基酸编码的前提下,增加胸腺素ａ原上游引物中Ａ、Ｔ含量,可以明显提高胸腺素α原的表达量,同时,不同培养基对它的表达也有影响。胸腺素α原在大肠杆菌中以可溶形式表达,不需复性。初步活性测定显示,它可明显刺激人外周血淋巴细胞Ｅ－玫瑰花结形成率。重组人胸腺素α原在大肠杆菌中表达,为其临床应用及基础研究奠定了基础。     

转基因小鼠乳腺表达G-CSF的研究

用PCR法从正常中国人脐带血提取总DNA作为模板,扩增出1.5 kb的人G-CSF基因组基因。序列分析证实其正确性。将其插入小鼠乳清酸蛋白(WAP)基因的起始密码子ATG前的KpnⅠ位点,使其受控于2.6kb的WAP调控序列,构建成乳腺表达载体pWGG。回收经EcoRⅠ酶切后的8.7kb片段用于显微注射。共注射1200枚受精卵,移植34受体母鼠,产仔鼠85只。经PCR检测和DNA印迹分析,证实获得两只整合有人G-CSF基因的雄性鼠,整合率为2.37％。建立的转基因鼠系表明,采用ELASA方法对F1代雌鼠乳汁检测,成功地表达出人G-CSF。表达量为120～250ng/ml。这一结果表明转基因的表达具有乳腺特异性。这为在大动物中实施转基因提供了依据。     

应用CTB基因启动子及信号肽序列构建分泌性表达系统

利用霍乱毒素B亚基基因的启动子、信号肽序列及ctx操纵子的转录终止信号构建了分泌性表达的质粒载体pMCOSS。Β－半乳糖苷酶基因克隆至霍乱毒素B亚基基因的信号肽序列下游后能得到高效分泌性表达。不同的宿主菌和培养基成分中对β-半乳糖苷酶的表达产量有较大的影响,以MM2为宿主菌、在玉米浆培养基中β－半乳糖苷酶的表达产量达4 lOOu／ml,产物的大部分分泌至细胞的周质,活力测定的结果与SDS—PAGE电泳测定结果基本一致,说明表达的β－半乳糖苷酶绝大部分都具有酶活性。构建的蛋白质分泌性表达的载体－宿主系统及合适的培养条件为易形成包含体的蛋白质的高效表达提供了一条新的途径。     

深揭狠批“四人帮” 加速科学技术现代化——批判“四人帮”在科技战线散布的反动谬论

长期以来,王张江姚反党集团,彻底背叛毛主席提出的“三要三不要”的基本原则,从思想上、政治上、组织上顽固地推行一条极右的反革命修正主义路线。他们肆意篡改马克思主义、列宁主义、毛泽东思想,在国内国际一系列问题上反对毛主席的无产阶级革命路线,大搞修正主义,大搞分裂,大搞阴谋诡计,破坏社会主义革命和社会主义建设,祸国殃民、罪恶滔天。在科技战线上,他们破坏毛主席“抓革命,促生产”的伟大方针,打着马列主义的旗号,用大帽子压人,用大棍子打人,进行种种干扰和破坏,采取各种卑鄙的手段,干着反革命的勾当,反对和破坏科学技术现代化,我     

霍乱毒素B亚单位工程菌MM2在含乳酸培养基中的高表达

确定了工程菌MM2中霍乱毒素B亚单位(CTB)在含乳酸培养基中的高表达方案。采用两阶段控制培养温度(30℃→37℃)可提高CTB产量4倍,提高后期pH值(72→84)可提高CTB比表达水平214倍,中间补加乙酸钠可提高CTB产量65%。在5L发酵罐培养菌密度OD₆₀₀达30,CTB产量达1867mg/L,产物在培养液中以多聚体形式存在,具有抗原性。     

O139霍乱弧菌LPS基因在大肠杆菌中的克隆和表达

利用粘粒载体pCOS5构建了国内分离的O139霍乱弧菌的基因组文库,并从文库中筛选获得可以表达O139霍乱弧菌脂多糖的重组克隆株E.coliJM109(pMG310)。重组粘粒pMG310经酶切分析,所克隆的外源DNA片段大小为37kb。实验证明：重组克隆株E.coliJM109(pMG310)所表达的脂多糖具有良好的免疫原性及反应原性。     

霍乱毒素A基因内部翻译调控元件具有翻译起始功能

通过大肠杆菌体外转录－体外翻译系统,证明霍乱毒素Ａ基因内部的翻译调控元件具有翻译起始功能,且其翻译起始效率较ｃｔｘＡ基因高得多,当ｃｔｘＡ的起始密码突变时,从该元件起始的翻译效率下降,说明基因内翻译起以ｃｔｘＡ翻译起始的调控。结果进一步证实了霍乱毒素Ａ、Ｂ亚工比例表达调控的翻译弱化－翻译偶联机理。     

DNA重排及体外分子进化

ＤＮＡ重排是目前为止最简便、最有效的体外定向进化技术,可以对单一基因、质粒、代谢途径、部分甚至整个基因组进行改造。本综述了ＤＮＡ重排的基本原理、特点、与其它体外进化技术的不同,着重介绍了其在体外分子进化上的广泛应用,并对应用前景进行了展望。