内含子对提高转基因动物基因表达效率的影响

综述了内含子在转基因动物基因表达中的作用,对内源性内含子和异源内含子对转基因表达的影响进行分析,讨论了内含子提高转基因动物基因表达效率的三种可能机制,并指出在表达载体构建中应考虑到内含子的重要性．     

丙型肝炎病毒(河北定州株)C33c基因的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达

本研究通过RT-PCR从河北定州地区献血员血清中克隆了丙型肝炎病毒的C33c抗原基因,序列分析结果表明,该株的C33c基因和中国泰安株DNA同源性为91.0％,氨基酸序列同源性为92.2％;和HCV河北株的同源性分别为91.3％和96.2％;和日本JK1株的同源性分别为91.6％和94.8％。克隆的基因在大肠杆菌中得到表达和纯化,并可用作抗-HCV ELISA试剂的抗原组分。     

重组人表皮生长因子的纯化及体内活性检定

人表皮生长因子(Human Epidermal Growth Fac-tor,hEGF)是一个由53个氨基酸残基所组成的单链多聚肽,分子量为6200D左右,等电点为pH4.6。它具有多种生物学功能,是发现较早并且具有广泛的潜在应用价值的细胞因子之一。hEGF存在于多种体液中,由于它的含量很低,对于它的研究及应用起了限制作用。本实验室利用含有hEGF基因质粒的重组大肠杆菌,经过发酵得到了大量高效分泌表达的rhEGF,在此基础上,我们对它进行了分离纯化的研究,得到了纯度大于95％具有明显活性的rhEGF,为EGF的进一步研究与应用打下了基础。     

新生肽链的折叠与重组蛋白可溶性表达

大肠杆菌表达系统是目前最常用的外源蛋白基因表达系统。因其遗传背景清楚,容易培养,能大规模发酵,并有大量可供选择利用的克隆和高效表达载体,而成为人们克隆和表达外源基因的首选菌株。但是,许多外源蛋白基因在大肠杆菌胞内表达时,往往不能自发折叠卷曲生成有一定空间结构和特定生物功能的蛋白质,而是以一种不溶性的沉淀即包涵体的形式     

工程菌产霍乱肠毒素B亚单位的纯化

 本实验室使霍乱肠毒素(CT)B亚单位基因在大肠杆菌中获得表达,并能分泌到胞外。将该菌株培养物上清经过超滤浓缩后,用偶联上霍乱毒素IgG的CNBr-Sepharose 4B进行亲和层析,得到表达产物霍乱毒素B亚单位纯蛋白。经PA-GE、HPLC及琼脂免疫扩散等方法鉴定证明该蛋白与天然霍乱肠毒素B亚单位完全相同。     

霍乱毒素(CT)基因探针的构建及其对霍乱弧菌的检测

用体外DNA重组技术构建了CT基因重组质粒pMM-CTII。应用XbaI/EcoRl双酶解,琼质糖凝胶制备电泳回收含C2基因的片段,以DNA缺口转译技术用a-32P标记的CT基因探针与01群霍乱弧菌经典型及埃尔托生物型产毒株杂交为阳性,与01群霍乱弧菌非产毒株及非01群无毒株杂交为阴性。对从临床及外环境分离的埃尔托霍乱弧菌进行了检测,流行株52株,检出率为92％;抗性株50株,检出率16％。显示利用CT基因分析较噬菌体分类更确切可靠。     

胸腺素α原作为乙型肝炎表面抗原佐剂的研究

目的：研究胸腺素α原（ProTα）作为佐剂对重组乙型肝炎表面抗原（HBsAg）诱导小鼠产生乙型肝炎表面抗体（抗-HBs）的影响。方法：以纯系BALB/c小鼠为免疫对象,分组情况为：①HBsAg组（1μgHBsAg）;②0.1μgProTα＋1μgHBsAg组;③0.5μgProTα＋1μgHBsAg组;④1μgProTα＋1μgHBsAg组;⑤铝佐剂组（1μgVacon疫苗）;⑥1μgPro-Tα＋1μgVacon疫苗组;每组10只小鼠,分别于0、2周各肌肉注射免疫1次。采用ELISA法检测血清抗-HBs滴度（即IgG亚类IgG1和IgG2a）。结果：与单独注射HBsAg组相比,1μgProTα＋1μgHBsAg组抗-HBs总抗体滴度明显增高（P〈0.05）,抗体持续时间更长,且ProTα可以平衡Th1和Th2免疫反应;2组间IgG1/IgG2a差异显著（P〈0.05）。与铝佐剂相比,ProTα增强了小鼠对HBsAg的反应性,提高抗-HBs阳转率。结论：ProTα在增强小鼠抗-HBs产生的同时,提高细胞免疫反应,提示ProTα是一种很有潜力的HBsAg佐剂。     

rhGH在大肠杆菌周质中的分泌表达

在大肠杆菌周质中分泌表达rhCH既有利于消除其在临床应用上的抗原性又有利于提取纯化，在rhCH的发酵生产中越来越受到青睐。就rhGH在大肠杆菌中的分泌表达机制以及启动子、引导序列、宿主茵、培养基和培养条件对分泌表达效率的影响等方面进行了综述。