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(1)RNA的存在与否对牛胰RNase在酚水两相体系中的分配性质有决定性的影响。(2)6%以上的苯酚基本上抑制了RNase的活力,加入鼠肝匀浆,抑制作用不变。但用乙醚将苯酚除去后,RNaso活力可以恢复。(3)水层中的RNase能和RNA、DNA或白蛋白一同为乙醇所沉淀。RNase也能和RNA为1M氯化钠所共沉。(4)比较了几种常用的RNA制备方法对牛胰RNase活力的影响。磺酸十二酯钠和苯酚相似,是RNase的可逆抑制剂,膨润土是除去RNase的良好材料。(5)对文献上RNA样品不稳定的原因进行了分析。 相似文献
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利用Tomlinson和Tener的DEAE-纤维素柱层析方法,我们从酵母SRNA的碱水解产物分得抗碱二核苷酸的层析峰。将抗碱二核苷酸混合物用大肠杆菌碱性磷酸单酯酶处理后,纸层析分离可得到四个部分,分别称A_1,A_2,A_3及A_4。经鉴定A_1为2′-O-甲基鸟便嘌呤核苷-3′-磷酸-5′-鸟便嘌呤核苷(G'pG),A_2主要为2′-O-甲基胞嘧啶核苷-3′-磷酸-5′-鸟便嘌呤核苷(C'pG,纯度约为87%),A_3则至少合2′-O-甲基胞嘧啶核苷-3′-磷酸-5′-腺嘌呤核苷(C'pA)和2′-O-甲基鸟便嘌呤核苷-3′-磷酸-5′-腺嘌呤核苷(G'pA),A_4较为复杂,未最后鉴定。因此酵母SRNA中至少含有下列四种抗碱二核苷酸:2′-O-甲基鸟便嘌呤核苷-3′-磷酸-5′-鸟便嘌呤核苷酸(G'pGp),2′-O-甲基胞嘧啶核苷-3′-磷酸-5′-鸟便嘌呤核苷酸(C'pGp),2′-O-甲基胞嘧啶核苷-3′-磷酸-5′-腺嘌呤核苷酸(C'pAp)及2′-O-甲基鸟便嘌呤核苷-3′-磷酸-5′-腺嘌呤核苷酸(G'pAp)。除此以外,还得到核苷二磷酸的层析峰,其中主要为鸟便嘌呤核苷-2′(3′),5′-二磷酸,只有少量的腺嘌呤核苷-2′(3′),5′-二磷酸。 相似文献
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肿瘤组织的核酸代谢和正常组织有所不同,已有不少工作证实,Skipper,Bennett等观察到肿瘤组织利用甘氨酸、甲酸等小分子化合物合成核酸嘌呤的能力较正常组织强,而利用嘌呤碱、嘌呤核苷及嘌呤核苷酸的能力则不如正常组织。de Lamirande等发现核酸嘌呤化合物代谢酶系活力在大白鼠Novikoff肝癌组织和正常组织中有明显区别,如黄嘌呤氧化酶和尿酸酶活力在肿瘤组织中完全不能测到。但有关核酸嘧啶化合物在癌组织中代谢的报导则较少,Reichard和Skold曾报告艾氏腹水癌尿嘧啶核苷磷酸 相似文献
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(1) 从高峰淀粉酶制剂(Taka-Diastase)制得RNase T_1,提纯了2800倍,可用于结构研究,从上海四万酿造厂的米麯也分得类似纯度、类似特异性的酶。(2) 用RNase T_1单独或与RNaseⅠ联合作用的结果,均发现啤酒酵母与蓖麻蚕絲腺腺体sRNA的结构有显著差异。例如用RNase T_1单独作用时,由蓖麻蚕蒜腺sRNA所得Gp大于啤酒酵母sRNA,而UpUpGp则小于后者。用两个酶联合作用时,由蓖麻蚕絲腺sRNA所得Cp、(Gp+Gp!)大于啤酒酵母sRNA,且前者较后者多出许多含稀有成份的紫外光吸收点,其电泳层析行为及表现熒光性质较为特殊。(3) 蓖麻蚕蒜腺sRNA合有-Gp(Ap)_4Cp-及-Gp(Ap)_3Cp-等结构。(4) RNase Ⅰ与RNase T_1联合水解sRNA所得Gp!/Gp值大于RNase T_1单独作用时所得Gp!/Gp值。 相似文献
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为研究 t RNATrp与色氨酰 - t RNA合成酶 ( Trp RS)的相互识别及其结构与功能的关系 ,纯化了枯草杆菌 Trp RS,并用溴化氰活化的 Sepharose4B将 Trp RS固定化 ,固定化 Trp RS的蛋白回收率为 95.5% ,活力回收率为 31 .3% .研究了固定化 Trp RS的酶学性质 ,其热稳定性和贮存稳定性方面均比液相 Trp RS有了较大的提高 ,最适温度、最适 p H均有一定程度的增大 ,工作稳定性良好 .以固定化 Trp RS为亲和层析介质 ,对含有 2 0个核苷酸随机序列 ,长度为 56个核苷酸的单链RNA随机库进行了三轮筛选 .实验结果表明 ,固定化 Trp RS可以作为 SELEX亲和层析介质 ,进行模拟 t RNATrp分子的 RNA随机库的 SELEX筛选 . 相似文献
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将化学法合成的人线粒体tRNALeu(UUR)及其突变体(tRNALeu(M))基因分别连接到载体pGEM-9zf (-)中, 并转化到大肠杆菌JM109中得到两个转化体分别为Leu-W和Leu-M. 在IPTG的诱导下, tRNALeu(UUR)和tRNALeu(M)的表达量可达总小分子RNA的19.10%和17.76%. 经DEAE-sepherose CL4B柱层析可使它们的纯度提高3倍. 最后用15%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化, 并用大肠杆菌亮氨酰tRNA合成酶(LeuRS)分别测定了它们的氨酰化反应动力学常数. 结果显示, mtRNALeu(M)的Kcat / Km值约为mtRNALeu(UUR) 的1/5, 提示该突变可使mtRNALeu(UUR)的氨基酸接受能力明显下降. 相似文献
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(一)核糖体RNA拓扑学研究的重要性核糖体是细胞合成蛋白质的唯一场所。核糖体包括两个亚基,由RNA和蛋白质组成,蛋白质占1/3,而RNA占2/3,即RNA是主要组分。蛋白质生物合成的大多数步骤,包括肽链合成的起始、延伸和终止都是在核糖体上进行的。整个合成过程涉及二百多种生物大分子的协同作用。在蛋白质生物合成中,重要的是肽键的形成。这一化学反应就是在核糖体上进行的。核糖体的任何个别组分或局部组分都不能催化肽键的形成,而必须是完整的核糖体,因此人们认为核糖体本身就是一个包括多种蛋白质和rRNA的复杂酶系(有人把核糖体看作 相似文献
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用DNA合成仪合成寡聚脱氧核苷酸。用T4-DNA连接酶把这些寡聚脱氧核苷酸重组成双链DNA。这两个双链DNA的上游是T7-启动子,下游分别编码酵母丙氨酸tRNA的5′半分子(1-35位核苷酸)和3′半分子(35-76位核苷酸)。再把这两个双链DNA克隆到PUC 12质粒中。经点杂交筛选和DNA顺序测定证明克隆是成功的。 相似文献
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大鼠甘氨肽酰化单氧酶基因的克隆与表达 总被引:1,自引:0,他引:1
本文采用原位杂交及PCR方法,从大鼠脑cDNA库中,筛选到3个大鼠甘氨肽酰化单氧酶(rPAM)基因片段。经DNA全序列分析表明,它们跨越rPAM-2全部编码区。通过点突变、PCR重组技术等,分别拼接出此双功能酶的rPHM(氧化酶)、rPAL(裂解酶)及其rPAM全酶基因,并构建了多种大肠杆菌表达质粒。经温敏诱导。高效表达了rPAM-N260片段,并制各获得阳性抗血清,可用于免疫检测天然或重组的PAM。而SDS-PAGE和Westernblot分析结果显示,rPHM和rPAM在大肠杆菌中均获得了表达,其中rPHM表达量占全菌总蛋白的10%以上。进一步研究还发现,通过采用低温和加二价铜离子诱导表达,可提高rPHM产物的可溶性及稳定性。 相似文献
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The 3' half molecule of yeast tRNAAla (nucleotides 36-75) was hybridized with a DNA fragment (5'GGAATCGAACC 3') and the hybrid was then digested with E. coli RNase H (from Boehringer). The enzyme can specifically cleave the 3' half molecule at the 3' side of nucleotide ψ55, thus a fragment C36-ψ55 was prepared. The 3'-terminal T or Tψ of this fragment was removed by one or two cycles of periodate oxidation and $-elimination. The products were fragments C36-T54 and C36-G53. Three yeast tRNAAla fragments C56-A76, U55-A76 (with ψ55 replaced by U), U54-A76 (with T54ψ55 replaced by UU) were synthesized and ligated with three prepared fragments (C36-ψ55 C36-T54 and C36-G53) respectively by T4 RNA ligase. The products were further ligated with the 5' half molecule (nu-cleotides 1-35). Using this method, one reconstituted yeast tRNAAla (tRNAr) and two yeast tRNAAla analogs: (i) tRNAa with U55 instead of ψ55; (ii) tRNAb with U54U55 instead of T54ψ55 were synthesized. The charging and incorporation activi 相似文献