肠道病毒71型感染前后宿主细胞蛋白质组的二维液相色谱分离和比较

以肠道病毒71型及其宿主细胞为研究主体,建立了一种二维液相色谱分离和分析比较病毒感染前后细胞蛋白表达谱的方法。该方法以高效液相色谱(HPLC)为技术平台,对细胞裂解物先后进行一维色谱聚焦分离和二维反相色谱分离。利用ProteoVue软件将二维色谱数据转换成模拟胶图,再利用DeltaVue软件对感染前后的宿主蛋白表达谱进行比较和分析,找出差异蛋白。二维液相色谱分离法能够根据蛋白的等电点和疏水性建立精确的细胞蛋白表达图谱,每0．2个pH为一个收集区段,在pH8．5～3．9的范围内可见蛋白条带约1200条。该方法良好的重现性、自动化以及结果分析的简易化,使之在细胞表达谱差异显示中的应用潜力巨大,并且为研究病毒与宿主相互作用提供了新的方法和思路。     

红色毛癣菌部分表达序列标签的分析

红色毛癣菌是最常见和流行范围最广的一种浅部致病真菌. 在构建红色毛癣菌cDNA文库的基础上, 获得4002条ESTs. 与GenBank数据库中的序列同源性比较表明, 其中30%(1226条)与其他生物已知功能的基因产物具有不同程度的同源性, 24.81%(989条)仅得到简单的功能提示, 45.19%(1787条)与目前已知的任何蛋白质都没有显著同源性, 为全新的未知功能基因. 对一些与红色毛癣菌生长代谢、信号传导、致病和耐药相关的重要功能基因做了初步分析, 阐明了红色毛癣菌的部分重要代谢途径, 为进一步探索其生理过程、致病和耐药机理, 寻找新的药物靶标提供了重要的分子基础和线索.     

The complete genome of Enterovirus 71 China strain

Five overlapping clones covering the full genome of Enterovirus 71 China strain SHZH98 were obtained and then the sequences were determined by the chain termination method. It showed that the full length of EV71 SHZH98 genome (not including Poly A tail) is 7408 bp. There are some diversities on the lengths and sequences of 5' UTR and 3' UTR between SHZH98 and the other EV71 strains. In P1 capsid region, which is closely associated with viral immunogenicity, EV71 strain SHZH98 shares the highest homology with Taiwan strains; but in P2 and P3 non-structural gene regions there are higher identities with Coxsakievirus A16 and EV71 strains MS, BrCr than with Taiwan strains. Phylogenetic tree constructed by structural gene region indicates that China strain SHZH98 has a closer relationship with Taiwan strains, however, in the non-coding region it has a closer relationship with Coxsakievirus A16, EV71 strains MS and BrCr. EV71 China strain was analyzed at the molecular level. The results will contribute to the     

He-Ne激光结合丹参对类风湿性关节炎大鼠血液流变学指标的影响

目的:研究He-Ne激光结合丹参对类风湿性关节炎大鼠的治疗效果,以便为临床提供治疗风湿病的参考依据。方法:通过对健康大鼠注射鸡Ⅱ型胶原诱导后,成功建立了大鼠类风湿性关节炎的模型,随机分组后给予治疗,分析大鼠体重、血液流变学指标的变化。结果:1.与空白对照组相比,不同处理组大鼠类风湿关节炎体重增长幅度不同(P<0.05),其中模型组最小,丹参结合激光治疗组最高。2.与空白对照组相比,不同处理组的全血还原粘度低切、全血粘度(低、中、高切)、红细胞聚集指数均降低(P<0.05),其中模型组大鼠最高;而激光结合丹参治疗组最低。但全血还原粘度中、高切和红细胞压积没有统计学差异(P>0.05)。结论:丹参结合激光对Ⅱ型胶原诱导类风湿性关节炎大鼠体重、血液流变学指标均有一定程度的改善。     

中国历年H3N2亚型人流行性感冒病毒血凝素基因的序列测定及分析

测定了27株中国1968～2000年的人H3N2亚型流行性感冒(流感)病毒分离株HA1基因的核苷酸全序列,其中包括7株流行代表株:A3/Beijing/1/68、A3/Guangdong/243/72、A3/Beijing/39/75、A3/Guangdong/38/77、A3/Beijing/266/85、A3/Beijing/30/95、A3/Shanghai/1/98.阐明了这些流感病毒分离株的基因结构、变异本质、进化发展过程以及这些毒株与其它分离株之间的遗传进化亲缘关系,为应用生物信息学研究流感病毒基因组变异规律等打下了基础.初步的进化分析表明,历年来的人流感病毒H3N2亚型的起源和进化分为两个分支谱系,并在1984/1985年进行了交替转换;且有一部分人的H3N2亚型分离株其HA1核苷酸序列与猪分离株的进化亲缘关系最为接近.     

志贺菌福氏2a毒力大质粒DNA全序列的测定与基因分析

对志贺菌福氏2a 301株的毒力大质粒pCP301的DNA全序列进行了测定, 并进行了结构分析. 结果表明, pCP301 DNA全序列由221618个碱基对组成, 基因分析共确定了272个开放读码框架(ORF), 经过与基因数据库比较, 其中194个ORF与已知基因或编码产物具有高同源性, 61个ORF同源性较低, 其余17个为新确定的未知功能的ORF. pCP301中的基因主要包括: (ⅰ) 与细菌毒力有关的ipa-mxi-spa, osp和iph基因; (ⅱ) 与调控有关的vir基因; (ⅲ) 与质粒的维持、稳定和DNA代谢有关的mvp, stb, rep和par等基因; (ⅳ) 转座酶编码基因. pCP301中的插入序列总长68 kb, 占全序列的 30%, 提示pCP301在细菌生长与进化过程中发生了多次基因重排. 研究结果对揭示志贺菌的致病机理及大质粒的遗传与进化有重要意义.     

人肿瘤坏死因子与人γ干扰素重组双功能融合蛋白的研制

肿瘤坏死因子与γ干扰素具有非常相似的生物学活性,并在一些主要的生物活性方面表现有较强的协同作用。本文采用寡核苷酸指导下的定位缺失-插入体外基因突变技术,删除了干扰素与肿瘤坏死因子串联基因之间的非编码区,去徐了γ干扰素的翻译终止信号,插入了一个人工设计的连接肽,使γ干扰素与肿瘤坏死因子基因在不改变读码框架的条件下融合起来,并在大肠杆菌表达系统中表述了兼有γ干扰素和肿瘤坏死因子功能的融合蛋白。     

采用定位基因缺失突变技术在大肠杆菌中高效表达肿瘤坏死因子

肿瘤坏死因子α(TNF)为157个氨基酸组成的细胞因子,在克隆的全良cDNA的5’端有480bp的非编码区包括76个氨基酸信号肽编码区。本文采用寡核苷酸指导下的定位基因缺失突变方法,删除了这一非编码区及信号肽序列,并在成熟TNF分子第一个氨基酸密码前插入一个翻译起始密码(ATG),形成一个限制酶NcoI的识别位点ccATGG。然后取出含有成熟TNF全基因的Nc0I—Pst I片段,插入到原核表达载体pBv220中,获得了肿瘤坏死因子的高效表达菌株。活性检测结果表明,肿瘤坏死因子的表达量可达3．42×10。Μ／L菌液。sDs－PAGE电泳凝胶扫描结果显示,肿瘤坏死因子在大肠杆菌的表达量可占细菌可溶性总蛋白量的22．8％。抗呻瘤坏死因子单克隆抗体可以中和大肠杆菌表达的肿瘤坏死因子对L929细胞的细胞毒性。sD和ATG间插入31个核苷酸可使TNF表达量降低约10倍。     

人α-1干扰素cDNA全序列分析

1982年,我们用新城疫病毒F株诱生的人脐血白细胞mRNA逆转录成cDNA,建立了人α型干扰素基因无性繁殖系,经限制性内切酶谱分析,以及采用化学法就HaeⅢBglⅡ片     

丫纹夜蛾核多角体病毒转移载体质粒的组建

自从美国G.E.Smith等发展苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica Nuclear Polyhedrosis Virus,简称Ac NPV)这一新的表达载体以来,先后已有几个外源性基因成功地获得了高效表达。如:人白细胞间素2(Interleukin 2)、人的c-myc基因产物、流感病毒血凝素等。与目前常用的原核和真核细胞表达系统比较,NPV载体