水牛卵巢黄体形成和退化的蛋白质表达谱构建及生物信息学分析

本研究构建了水牛卵巢黄体形成及退化过程的定量蛋白质表达谱,从中寻找与水牛发情周期相关的重要蛋白质。为研究水牛卵巢周期性变化的分子机制提供蛋白质水平的数据支撑,进而为提高水牛繁殖效率奠定实验基础。以水牛排卵后的红体期(corpus hemorrhagicum,CH)、黄体期(corpus luteum,CL)和白体期(corpus fibrosum,CF)的卵巢作为研究对象,利用串联质谱标签(tandem mass tag,TMT)标记结合液质联用((liquid chromatography/mass spectrometry,LC-MS/MS)的定量蛋白质组学技术,采用相关软件对得到的差异表达蛋白质进行生物信息学分析。同时对与水牛发情周期相关的重要差异蛋白质:单核巨噬细胞分化抗原(CD14)、通用转录因子Ⅱ-Ⅰ(GTF2I)、羟基类固醇(17β)脱氢酶1(HSD17B1)、U6 sn RNA相关Sm样蛋白质(LSM1)和纤溶酶原激活物抑制物(SERPINE1)进行了qRT-PCR分析验证。结果显示,共鉴定得到2 343种蛋白质,其中差异表达蛋白质有284种(差异倍数≥2.0),初步构建了水牛卵巢黄体形成和退化的定量蛋白质表达谱。对其中的五种重要差异蛋白质(CD14、GTF2I、HSD17B1、LSM1和SERPINE1)进行qRT-PCR验证,结果有四种(CD14、HSD17B1、LSM1和SERPINE1)的qPCR结果与质谱结果相一致,仅GTF2I与质谱结果不一致,可能是由于GTF2I存在转录后调控。本研究首次从蛋白质水平对水牛卵巢排卵后的周期性变化的分子机制进行了探究,同时为其他家畜品种发情周期的研究提供了新的研究思路。     

一株斑点热立克次体的病原学研究

自内蒙古自治区的草原革蜱（D．Nuttalli）中分离到一株斑点热立克次体。用微量酶标染色方法进行血清学鉴定表明,系西伯利亚（Rickettsiaesibirica种血清型。G＋Cmol％含量为32.4％。对其核酸进行聚合酶链扩增／限制性核酸内切酶消化（PCR／RFLP）分析DNA长度多态性,分别引用立氏立克次体蛋白抗原基因Rr190序列作为扩增引物Rr190．70p～602n和Rr190．4442p～5664n,扩增后分别用Pst1和Rsal限制性核酸内切酶消化。其电泳图谱证     

一种制备珠型固定化细胞颗粒的简易方法

珠型固定化细胞颗粒有总表面积大、机械强度高和便于操作等优点,从而被固定化细胞实验广泛采用。实验室包理制备珠型固定化细胞颗粒多用注射器滴注法,但由于海藻酸钠、聚乙烯醇等的高粘度,以及手的用力不均,致使注射器制备固定化颗粒费力、大小不均一,且常带有小突起,而固定化颗粒的均一性对于它的应用是非常重要的。本文用蠕动泵代替注射器制备固定化细胞颗粒,得到了较好的效果。该法简单易操作,现介绍如下。l材料与方法1．l菌种假单胞菌（hen咖monasSPJ门及1．2主要化学试剂和仪器海藻酸钠（化学纯）,聚乙烯醇（化学纯）,蠕动…     

家禽(鹅、鸭、鸡)血清酯酶多态性比较血型学初步研究

鸡的酯酶在两个区域出现了变异, 靠近阳极的Es-1区共有3条带,表现出7种表型组合(AA、 BB、CC、AB、AC、BC和无带O型),分别受控于常染色体上相同基因座位上3个复等位基因(Es-1^A|、Es-1^B|、Es-1^C|)和1个隐性基因(Es-1^O|)。在原点和Es-1之间的Es-2区表现出有带(+)和无带(-)两种类型。鹅的血清酯酶与鸡截然不同。在鸡的Es-2区域,鹅的带谱信号弱(无)。在与鸡Es-1区域相应位置,鹅存在着8-9条谱带,其中的1号、2 -7号存在着个体水平的多态现象。鸭血清酯酶的聚丙烯酰胺谱带与鹅非常相似。鹅、鸭血清酯酶的遗传机制有待交配实验确定。     

嗜麦芽假单胞菌黑色素的抗氧化作用研究

采用ＮＢＴ光化学反应法测定嗜麦芽假单胞菌黑色素对超氧阴离子自由基的清除作用,结果表明黑色素能明显地清除超氧阴离子自由基。４μｇ的黑色素对超氧阴离子自由基的清除率为８３．６％。黑色素有明显的抗脂质过氧化作用,能抑制鼠肝匀浆在３７℃温育下生成丙二醛,７２μｇ抑制率为９２．５％。黑色素能够降低由Ｈ２Ｏ２所致的红细胞溶血作用,经Ｈ２Ｏ２作用后,溶血率为６５．３％,经黑色素抗氧化作用后溶血率为５２．５％。     

协调保护与利用关系推动自然保护事业发展

解决保护区发展过程中的诸多困扰,最根本的任务,就是协调保护与利用的关系,九连山保护区的发展史,就是保护与利用关系协调的历史。回顾历史、总结经验教训,提出建立生态经济区的构想,以促进经济１生态、社会三大效益和谐 。     

苹果树腐烂病菌细胞色素P450基因Vmcyp5的功能

【目的】研究表明,细胞色素P450(CYP)在死体营养型真菌的毒素合成代谢中发挥重要作用,预测可能与病原菌致病相关。论文对苹果树腐烂病菌(Valsa mali)毒素合成基因簇中的1个上调表达的CYP基因Vmcyp5进行生物学功能研究,明确CYP基因对病原菌致病力影响,为细胞色素P450基因家族对苹果树腐烂病菌致病机理的进一步研究提供依据。【方法】通过Double-joint PCR和PEG介导的原生质体转化技术获得具有G418抗性的突变体,并对突变体进行PCR检测及Southern blotting验证得到单拷贝敲除突变体。将目的基因片段重新导入敲除突变体,筛选获得互补突变体。最终对野生型菌株及敲除突变体、互补突变体进行菌落、产孢及致病力观察,利用SPSS软件对数据进行差异显著性分析,并利用q RT-PCR技术分析突变体黑色素基因簇的表达水平。【结果】通过基因敲除技术获得1个Vmcyp5基因的敲除突变体。与野生型菌株相比,Vmcyp5基因的敲除突变体菌落呈白色,产孢量减少51.3%。q RT-PCR分析发现敲除突变体黑色素基因簇基因表达量降低。重要的是,敲除突变体致病力较野生型菌株降低24.5%。互补突变体菌落颜色、产孢及致病力近似恢复至野生型菌株水平。【结论】Vmcyp5基因与病原菌黑色素合成、子实体的产生和致病力相关。     

锰过氧化物酶的耦合固定化及其性质研究

分别采用海藻酸钠、明胶和壳聚糖为载体,并以戊二醛为交联剂,通过包埋-交联和吸附-交联两种耦合固定化方法制备固定化锰过氧化物酶。探讨了酶的不同固定化条件和固定化酶的部分性能。与游离酶相比,制备的3种固定化酶最适反应pH分别由7.0降低到5.0、5.0和3.0,最适反应温度分别由35℃升高到75℃、55℃和75℃。3种固定化酶的耐热性都显著提高,其中用壳聚糖制成的固定化酶在pH 2.2～11的宽范围内表现出很好的酸碱耐受性。30℃连续测定6～9次酶活力,重复使用的3种固定化酶显示出良好的稳定性。将固定化酶应用在偶氮染料的脱色中,用明胶制成的固定化酶在静置和摇床条件下,以及用海藻酸钠制成的固定化酶在摇床条件下,均表现出与游离酶相近的脱色能力,并且在重复进行的摇床实验中,脱色能力未降低,反应前后的酶活力均没有损失。     

微囊藻和栅藻共培养实验及其竞争参数的计算

以Ｌｏｔｋａ－Ｖｏｌｔｅｒｒａ的双种竞争模型为基础,进行试验设计。共培养试验中,两种藻类的增长行为是不同的,培养前期共培养中栅藻的数量大于纯培养中栅藻的数量,而在后期则相反,微囊藻则是在整个共培养过程中的数量都小于纯培养中的数量。通过纯培养取得参数Ｋ和ｒ,变模型的微分形式为差分形式,以生长曲线拐点（密度制约起始点）出现的时间作为计算竞争参数的起始时间。经模拟计算获得参数,表明微囊藻的抑制能力是栅藻     

四川荛花属一新种

常绿灌木,高约1-2米,全株除幼芽被白色柔毛外,其余无毛;幼枝淡绿色,老枝紫褐色,叶迹明显隆起,近半圆形。