苹果树腐烂病菌细胞色素P450基因Vmcyp5的功能

【目的】研究表明,细胞色素P450(CYP)在死体营养型真菌的毒素合成代谢中发挥重要作用,预测可能与病原菌致病相关。论文对苹果树腐烂病菌(Valsa mali)毒素合成基因簇中的1个上调表达的CYP基因Vmcyp5进行生物学功能研究,明确CYP基因对病原菌致病力影响,为细胞色素P450基因家族对苹果树腐烂病菌致病机理的进一步研究提供依据。【方法】通过Double-joint PCR和PEG介导的原生质体转化技术获得具有G418抗性的突变体,并对突变体进行PCR检测及Southern blotting验证得到单拷贝敲除突变体。将目的基因片段重新导入敲除突变体,筛选获得互补突变体。最终对野生型菌株及敲除突变体、互补突变体进行菌落、产孢及致病力观察,利用SPSS软件对数据进行差异显著性分析,并利用q RT-PCR技术分析突变体黑色素基因簇的表达水平。【结果】通过基因敲除技术获得1个Vmcyp5基因的敲除突变体。与野生型菌株相比,Vmcyp5基因的敲除突变体菌落呈白色,产孢量减少51.3%。q RT-PCR分析发现敲除突变体黑色素基因簇基因表达量降低。重要的是,敲除突变体致病力较野生型菌株降低24.5%。互补突变体菌落颜色、产孢及致病力近似恢复至野生型菌株水平。【结论】Vmcyp5基因与病原菌黑色素合成、子实体的产生和致病力相关。     

蜡蚧轮枝菌VL17中杀虫成分分离及鉴定北大核心CSCD

蜡蚧轮枝菌（Verticilliumlecanii）VL17菌株是从罹病的蚜虫中分离得到的一种具有高效杀虫活性的内生真菌。根据生物活性跟踪测试,采用不同溶媒萃取法、硅胶柱分离法、高速逆流色谱法、半制备高效液相分离纯化法,从该菌株的代谢产物中筛选出具有杀蚜虫的有效成分。实验结果表明：经察氏液体培养基培养采用乙酸乙酯提取获得粗毒素对萝卜蚜若蚜的毒杀活性最好;该提取物经HSCCC、HPLC分离纯化后收集到4个馏分,其中馏分Ⅲ对萝卜蚜的防治效果最佳,LC50值为0．4748mg／mL;馏分Ⅲ通过IR、MS初步鉴定推测结果为羧酸酯类化合物,分子量约为437。     

河北省玉米小斑病菌玉米离蠕孢dsRNA病毒的检测及带毒菌株的生物学特征

玉米小斑病是我国玉米生产上的重要病害之一,每年造成玉米大幅减产。真菌病毒能够在真菌体内进行复制和繁殖,可以作为生物防治的潜在资源。为了明确河北省玉米小斑病菌玉米离蠕孢dsRNA病毒的多样性及生物学特性,为玉米小斑病的防控提供潜在生防资源,本研究采用单孢分离的方法分离纯化玉米小斑病菌150株,通过dsRNA提取及凝胶检测的方法检测带毒率,从分离的150株玉米离蠕孢中获得10株带有dsRNA病毒的菌株。通过电镜观察及RT-PCR方法验证发现5个菌株带有Bipolaris maydis partitivirus病毒。通过原生质体脱毒的方法获得无毒菌株后比较带毒菌株的生物学特性及胞外酶的分泌。结果发现Bipolaris maydis partitivirus病毒降低了玉米离蠕孢的生长速度和产孢量,显著降低其致病力及淀粉酶的分泌。本研究明确了河北省玉米离蠕孢dsRNA病毒的多样性,明确了携带Bipolaris maydispartitivirus病毒菌株的生物学特性,为玉米小斑病的防控提供了研究基础。