水泡性口炎病毒对IPEC-J2细胞因子转录时相的影响

摘要：【目的】为了更好的了解水泡性口炎病毒（VSV）感染后引起细胞炎性反应特别是炎性细胞因子的反应,探讨宿主-病毒之间的作用关系。【方法】我们运用荧光定量PCR技术,测定和分析VSV感染IPEC-J2细胞引起的病毒RNA量的变化和细胞因子IL-2、6、8、10、12、IFN-α、 IFN -γ、TNF-α、TGF-β和TLR3分泌水平。【结果】我们发现,VSV感染后引起IPEC-J2细胞分泌IL-6、8、12、TNF-α和TLR3显著增加,TGF-β无显著差异;IPEC-J2细胞不分泌IL-2、IL-10、IFN-α和IFN –γ。【结论】水泡性口炎病毒感染可引起IPEC-J2细胞炎性分子分泌增加。     

TLR2在红色毛癣菌感染中对角质形成细胞分泌γ-IFN和IL-8的影响

目的 观察红色毛癣菌刺激人角质形成细胞后γ-IFN及IL-8浓度的变化,以及TLR2对γ-IFN和IL-8分泌的影响.方法 用红色毛癣菌悬液分别刺激TLR2抗体处理前后的角质形成细胞,采用ELISA方法检测不同时间点细胞上清液中γ-IFN及IL-8的浓度,并设置阴性对照;比较TLR2抗体处理的后γ-IFN及IL-8浓度的变化.结果 红色毛癣菌刺激角质形成细胞后,γ-IFN及IL-8浓度明显升高(P＜0.05),4h即开始,至16 h达高峰;用TLR2抗体中和TLR2后,上清液中IL-8的浓度在2h、4h、8h、16h各时间点较中和前低,差异有统计学意义(P＜0.05);γ-IFN的浓度2h、4h、8h时间点较中和前低,差异有统计学意义(P＜0.05),而在16h时间点,上清液中γ-IFN的浓度与中和前比较略低,但差异没有统计学意义(P＞0.05).结论 红色毛癣菌刺激角质形成细胞后,可促进角质形成细胞分泌γ-IFN和IL-8;TLR2在角质形成细胞分泌γ-IFN和IL-8的过程中发挥重要的调节作用.     

黄芪多糖对多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞增殖与细胞因子表达的影响

目的:探讨黄芪多糖对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSC)增殖与细胞因子表达的影响.方法:采用密度梯度离心法分离MM患者骨髓间充质干细胞(MM-BMSC)及正常人骨髓间充质干细胞(ND-BMSC).取第3代BMSC,测定细胞的生长曲线及细胞因子的表达.分别采用MTT法、细胞流式术检测不同浓度APS对MM-BMSC的细胞增殖、细胞周期的影响,ELISA法测定IL-1β与IL-6的表达水平.结果:成功分离得到MM-BMSC和ND-BM-SC,细胞生长曲线显示MM-BMSC增殖缓慢,倍增时间为86h,而ND-BMSC的倍增时间为60h,两者相比差异具有统计学差异(P＜0.05).基础正常情况下,MM-BMSC与ND-MSC分泌的IL-1β、IL-6的水平有明显差异(P＜0.05).APS可促进MM-BMSC增殖,其中1 mg/mL APS的作用最为明显(P＜0.01).MM-BMSC基本都处于静止期,1 mg/mL APS处理的MM-BMSC处于G0/G1期细胞比例较其明显降低(P＜0.05),S,G2/M期细胞比例较其明显增高(P＜0.05),且1 mg/mL APS可显著下调MM-BMSC分泌IL-1β及IL-6的水平(P＜0.05).结论:多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞IL-1β、IL-6分泌水平异常,1 mg/mL黄芪多糖可促进骨髓间充质干细胞的增殖并下调其IL-1β,IL-6的分泌.     

副猪嗜血杆菌外膜囊泡激活caspase-11和NLRP3炎性体诱导炎性细胞因子IL-1β和IL-18分泌

【背景】副猪嗜血杆菌可引起多种炎性反应和较高死亡率,其致炎机制目前尚不清楚。【目的】探究副猪嗜血杆菌外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)诱导RAW264.7细胞caspase-11及NLRP3炎性体活化的功能,以及caspase-11在OMVs活化炎性体诱导炎性因子表达过程中的关键作用。【方法】副猪嗜血杆菌OMVs感染RAW264.7细胞,收集6、12和24h细胞,RT-PCR检测caspase-11、NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA的表达;收集感染后48 h细胞,Western blotting检测caspase-11、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达。收集感染后6、12、24、48和72h细胞上清,ELISA检测interleukin(IL)-1β和IL-18表达水平;不同浓度OMVs(0、2.5、10、25、50和100μg/mL)感染RAW264.7细胞24h,ELISA检测上清中IL-1β和IL-18水平。构建caspase-11沉默RAW264.7细胞株,收集OMVs感染后12、24和48h细胞培养上清检测IL-1β和IL-18水平。【结果】Caspase-11 mRNA转录水平在OMVs感染6、12和24h均极显著高于对照组(P<0.01);NLRP3 mRNA转录水平在感染后6、24h极显著高于对照组(P<0.01);ASC mRNA转录水平在感染后12、24h显著低于对照组(P<0.05);caspase-1 mRNA转录水平在感染后6、12和24h显著高于对照组(P<0.05)。Western blotting结果显示,与空白对照组相比,OMVs组caspase-11、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达均明显升高。OMVs感染RAW264.7细胞后12、24、48和72h,IL-1β表达量极显著高于对照组(P<0.01),而且呈现时间依赖性升高,IL-18表达水平在感染后6、12、24、48和72h显著高于对照组(P<0.05);不同浓度OMVs感染细胞时,OMVs对细胞的致炎作用呈现剂量依赖性增强。Caspase-11沉默后,IL-1β水平在感染后12、24和48h显著低于未沉默组;Caspase-11沉默组IL-18表达量在感染后24、48h均显著低于未沉默组(P<0.05)。【结论】副猪嗜血杆菌OMVs在副猪嗜血杆菌诱导的炎症反应中发挥重要作用,OMVs可诱导RAW264.7细胞caspase-11介导的非经典NLRP3炎性体信号通路活化。     

Fucoidan对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用

目的观察褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan)对巨噬细胞RAW264.7体外吞噬活性、细胞因子TNF-α和IL-6分泌,以及Toll样受体4(TLR4)mRNA表达的影响。方法实验分对照组,Fucoidan高、中、低剂量组(浓度分别是200、400和800μg/mL)。药物处理6~48h后,MTT法检测RAW264.7细胞活力;中性红比色法检测细胞吞噬活性;ELISA法检测培养上清中TNF-α和IL-6的分泌水平;实时定量PCR检测Toll样受体4(TLR4)mRNA表达量。结果与对照组相比,Fucoidan显著增强RAW264.7细胞代谢活力和吞噬能力(P0.01),增加TNF-α和IL-6的分泌,上调TLR4的表达,呈剂量依赖关系。结论 Fucoidan可上调TLR4表达,增强巨噬细胞代谢和吞噬活性,增加TNF-α和IL-6的分泌,具有潜在的调节免疫作用。     

IL-25在支气管哮喘中的作用

白介素25(Interleukin-25,IL-25)是细胞因子IL-17家族的成员之一,主要由活化的Th细胞和肥大细胞所分泌。IL-25能够诱导释放Th2型细胞因子IL-4、IL-5、IL-13,炎性细胞因子IL-6,Th1型趋化因子CXCL10、CXCL9、CCL5的产生,导致嗜酸性粒细胞的浸润,在支气管哮喘的发病中起重要作用,本文就此作一综述。     

肺炎链球菌肽链内切酶O(PepO)依赖MAPKs-NF-κB-PI3K/Akt信号激活肺泡上皮细胞分泌IL-6和CXCL

肺炎链球菌肽链内切酶O(Pep O)是一种新发现的且广泛表达的肺炎链球菌毒力蛋白,帮助肺炎链球菌黏附侵袭入宿主细胞。我们的前期研究发现Pep O能诱导小鼠肺部强烈的固有免疫反应。但仍需进一步研究肺组织内识别Pep O的细胞。本实验中我们研究了Pep O对小鼠肺泡上皮细胞株MLE-12分泌的促炎性细胞因子IL-6及CXCL1的影响并研究了相关的信号通路。Pep O刺激MLE-12以剂量依赖的方式合成和释放IL-6、CXCL1。在Pep O激活的MLE-12细胞中我们同时检测到了TLR4 m RNA的上调。Pep O激活导致了MAPKs、P65和Akt的磷酸化,且MAPKs、IκB-α以及PI3K的抑制剂能降低IL-6以及CXCL1的分泌。这些结果提示我们Pep O以MAPKs-NF-κB-PI3K/Akt信号通路依赖的方式促进小鼠肺上皮细胞产生IL-6和CXCL1,在肺炎链球菌肺炎的病理形成中可能发挥着重要的作用。     

沙眼衣原体持续感染对Hela细胞TLR4/IL-6/STAT3信号通路的影响

目的：分析沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）持续感染对靶细胞TLR4/IL-6/STAT3信号通路的影响.方法：利用Hela细胞分别建立Ct急性感染及持续性感染模型,通过qRT-PCR、ELISA等方法比较Ct感染过程中靶细胞TLR4、STAT3、IL-6转录水平及细胞因子IL-6分泌量的变化.结果：Ct感染后靶细胞TLR4、IL-6、STAT3转录水平及细胞因子IL-6分泌量均呈现时间相关性上调,且持续性感染状态下比急性感染状态下的上调更为显著;IL-6/STAT3的表达量与TLR4转录水平正相关.结论：Ct持续感染过程中TLR4 的持续活化可大幅上调IL-6/STAT3信号通路表达,可能参与了Ct持续感染后慢性炎性损伤过程.     

连续观察兔油酸ARDS模型稳定性及血L-1、IL-8近期变化

目的：探讨油酸（OA）构建兔急性呼吸窘迫综合征（ARDS）模型3天内的稳定性及血浆炎症因子IL-1、IL-8含量变化的意义。方法：健康新西兰大耳白兔30只随机分为5组,每组6只,实验组（n=24）耳缘静脉注射油酸（0.1mL/kg）建立ARDS模型,对照组（n=6）注射等量生理盐水。分别检测对照组6h和实验组6h、24h、48h、72h（n=6）动脉血PH值、PaO2、PaO2/FiO2、PaCO2、肺湿/干重比值（W/D）,ELISA法检测血浆细胞因子IL-1、IL-8含量,HE染色观察肺组织病理学改变。结果：和对照组比较,实验组血中细胞因子IL-1在6h、24h组升高;细胞因子IL-8在6h组、24h组、48h组升高。6h组、24h组、48h组氧合指数〈200mmHg。结论：兔油酸ARDS模型48h内稳定,炎性细胞和IL-1、IL-8可能是导致ARDS的发生和发展主要原因之一。     

连续观察兔油酸ARDS模型稳定性及血L-1、IL-8近期变化

目的:探讨油酸(OA)构建兔急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型3天内的稳定性及血浆炎症因子IL-1、IL-8含量变化的意义。方法:健康新西兰大耳白兔30只随机分为5组,每组6只,实验组(n=24)耳缘静脉注射油酸(0.1mL/kg)建立ARDS模型,对照组(n=6)注射等量生理盐水。分别检测对照组6h和实验组6h、24h、48h、72h(n=6)动脉血PH值、PaO2、PaO2/FiO2、PaCO2、肺湿/干重比值(W/D),ELISA法检测血浆细胞因子IL-1、IL-8含量,HE染色观察肺组织病理学改变。结果:和对照组比较,实验组血中细胞因子IL-1在6h、24h组升高;细胞因子IL-8在6h组、24h组、48h组升高。6h组、24h组、48h组氧合指数<200mmHg。结论:兔油酸ARDS模型48h内稳定,炎性细胞和IL-1、IL-8可能是导致ARDS的发生和发展主要原因之一。     

IL-6与肿瘤耐药相关性的研究进展

【摘 要】 肿瘤对化疗药物耐药性的产生是造成治疗失败的主要因素。形成肿瘤耐药的机制很复杂。IL-6作为一种重要的炎性细胞因子与恶性肿瘤细胞对化疗药物耐药性密切相关。IL-6极有可能成为逆转某些恶性肿瘤耐药性的新靶点。     

MOI对PK-15细胞感染PPV后细胞因子mRNA转录时相的影响

【目的】更好地了解感染复数(MOI)对猪细小病毒(PPV)感染PK-15细胞后引起细胞因子的反应,探讨宿主-病毒之间的作用关系。【方法】运用荧光定量PCR技术,测定和分析3种感染复数对PPV感染PK-15细胞引起的病毒DNA量的变化和细胞因子IFN-、IRF-3、TNF-a和IL-18分泌水平。【结果】PPV感染PK-15细胞12 h病毒开始大量迅速增殖,感染48 h且MOI为1.0时达到最高峰;PPV感染后可引起PK-15细胞中IFN-、IRF-3、TNF-a和IL-18的表达量显著增加,其中IRF-3基因在感染后1 h且MOI为10.0时表达量达到967倍。【结论】细胞因子的分泌水平显著依赖感染复数和感染时间的交互作用。     

Rig-I对LPS诱导的巨噬细胞增殖、凋亡及功能的作用研究

该研究旨在探讨维甲酸诱导基因I(retinoic acid-inducible gene I,Rig-I)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的巨噬细胞增殖、凋亡和细胞因子分泌等生物学功能的影响及其作用机制。以不同剂量的LPS刺激Rig-I基因沉默和过表达的小鼠巨噬细胞系Raw264.7细胞,采用CCK-8和流式细胞术检测细胞的生长状态,采用q PCR方法检测细胞因子TNF-α、IL-10、IL-1和IL-6相关基因的表达水平,并采用Western blot方法检测LPS诱导的TLR4信号通路的相关蛋白表达水平。CCK-8和流式细胞术结果显示,Rig-I促进巨噬细胞的增殖并抑制LPS诱导的细胞凋亡;q PCR结果表明,Rig-I促进巨噬细胞中TNF-α、IL-10、IL-1和IL-6基因的表达。进一步的实验证实,Rig-I通过激活AKT及其下游蛋白p-38、NF-κB和Bcl-x L等抑制细胞凋亡并促进细胞因子的表达。该研究首次证实了Rig-I可通过AKT信号通路对LPS诱导的巨噬细胞增殖、凋亡及功能进行调节。     

Toll样受体和细胞因子在肠道病毒71型感染的SW620细胞中的表达分析

目的观察肠道病毒71型(EV71)感染人结肠癌SW620细胞中Toll样受体(TLRs)和细胞因子的表达,为EV71感染机制研究提供依据。方法用荧光定量RT-PCR检测EV71感染人结肠癌SW620细胞后24、48和72 h TLR3、TLR7、白细胞介素-6(IL-6)、IL-8、IL-12 mRNA表达量。结果接种EV71后72 h TLR7mRNA表达量增加,TLR3 mRNA表达无变化。IL-6、IL-8和IL-12分别在接种EV71后24、48和72 h开始表达增加,IL-6、IL-8随着时间延长表达量持续增加。结论 TLR7参与介导了抗EV71感染过程,除TLR7外还有其他TLRs参与其中。IL-6、IL-8和IL-12有序地被活化参与抗EV71免疫反应。     

重组人IL-18-EGF的双顺反子表达及其对NK细胞和肝癌细胞的影响

构建重组人IL-18-EGF肿瘤靶向分子双顺反子原核表达系统,研究重组人IL-18-EGF融合蛋白对人自然杀伤细胞（natural killer cell,NK细胞）和人肝癌细胞（SMMC-7721）的影响。构建重组人IL-18-EGF原核双顺反子表达系统pET28a（＋）-proIL-18-EGF-Caspase-4/BL21,重组蛋白经纯化后,作用于NK细胞,应用CCK-8法和ELISA试剂盒分别检测NK细胞的增殖情况和IFN-γ的分泌量。Cy3荧光标记IL-18-EGF检测融合蛋白与肿瘤细胞表面EGFR的结合情况。IL-18-EGF与NK细胞共同孵育24 h后,取培养上清液作用于人肝癌细胞SMMC-7721,分别使用细胞划痕实验和Transwell小室实验检测IL-18-EGF对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。实验结果显示：重组人IL-18-EGF能加快NK细胞的增殖,促进NK细胞分泌IFN-γ;IL-18-EGF能与肿瘤细胞表面EGFR特异性结合;细胞划痕实验中,重组人IL-18-EGF组空白区域的抗填充能力高于对照组;Transwell小室实验中,12,24,48 h时IL-18-EGF组细胞穿膜数分别为94.6±2.9、101.8±4.0和116.2±4.5,均显著低于相应时间的对照组（分别为128.6±8.5、133.0±7.5和138.8±5.4）（P〈0.05）。以上结果表明,IL-18-EGF对人肝癌细胞SMMC-7721的迁移和侵袭能力有明显的抑制作用,能提高机体的免疫能力,有可能作为辅助药物运用于肝癌的治疗。     

大肠杆菌EscI蛋白C-末端多肽诱导巨噬细胞炎性体应答

摘要:【目的】分析E.coli的EscI蛋白C-末端多肽诱导巨噬细胞NLRC4炎性体应答情况。【方法】以含有E.coli的EscI蛋白C-末端氨基酸序列的多肽为材料,通过体外导入小鼠腹腔巨噬细胞,分析细胞的应答情况。【结果】利用脂多糖预先刺激后,含有EscI蛋白C-末端15个氨基酸的多肽能够明显地激活细胞内NLRC4炎性体应答,细胞内半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1 被激活,细胞发生pyroptosis,细胞培养上清中IL-1β和IL-18的含量增加(P＜0.05)。通过优化刺激条件发现,以多肽/脂质体为70 μg/μL的比例导入细胞并孵育4 h时,IL-1β的分泌量最高。【结论】含有E.coli的EscI蛋白C-末端15个氨基酸的多肽能够明显地诱导巨噬细胞NLRC4炎性体应答。     

重组IL-18BP拮抗重组鸡IL-18刺激外周血单核细胞产生IFN-γ的作用

【目的】白细胞介素-18通过激活Th1细胞和NK细胞产生IFN-γ而发挥关键的免疫调节作用。人和小鼠分泌的白细胞介素-18结合蛋白(IL-18BP)可以拮抗其活性。推测在鸡痘病毒基因组中也含有IL-18BP基因的同源物,对其表达的蛋白质进行了活性鉴定,为拮抗IL-18主导的疾病提供理论依据。【方法】根据鸡痘疫苗病毒的基因组序列设计特异性引物,使用PCR方法从中分离cIL-18BP基因,将该基因克隆到酵母表达载体pPICZαA中,甲醇诱导后在酵母GS115中进行表达。对表达的重组蛋白进行了活性鉴定。【结果】从鸡痘病毒中克隆到cIL-18BP基因,SDS-PAGE鉴定了该基因在酵母系统中的高效表达。ELISA检测表明纯化后的cIL-18BP与重组鸡(c)IL-18发生特异性结合;通过测定IFN-γ的浓度,表明该蛋白具有拮抗IL-18刺激外周血单核细胞(PBMCs)和MSB1细胞分泌IFN-γ的活性。【结论】实验表明,cIL-18BP通过抑制cIL-18刺激相关免疫细胞分泌IFN-γ而发挥对IL-18的拮抗作用,敲除该基因可能有助于研制更安全和高效的鸡痘疫苗。     

TLR4、TRAF6、IL-6和IL-1β在深静脉血栓大鼠模型中的表达和意义

摘要 目的：探究4个炎症因子Toll样受体4（TLR4）、TNF受体相关因子6（TRAF6）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-1β（IL-1β）在深静脉血栓大鼠体内的表达及在深静脉血栓形成的作用。方法：将SD大鼠随机分成对照组（n=10）和模型组（n=90）,采用血管钳夹结合固定制动的方式建立深静脉血栓模型,建模后分别于1 h、6 h、12 h、1 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d处死,检测血栓重量/长度比值、血浆中4个炎症因子的浓度,并进行组织学观察。结果：（1）1 h、6 h、12 h的血栓重量/长度比值较低,组间无显著性差异（P>0.05）;1 d、3 d、7 d的血栓重量/长度比值维持在较高水平,组间无显著性差异（P>0.05）;14 d、21 d、28 d的血栓重量/长度比值均降低,组间无显著性差异（P>0.05）。（2）模型组中1-7 d的血栓重量/长度比值均明显高于正常组（P<0.05）。（3）模型组中1-7 d的TLR4、TRAF6、IL-6和IL-1β浓度水平均明显高于正常组（P<0.05）。（4）Pearson 相关性分析显示TLR4、TRAF6、IL-6和IL-1β浓度与血栓程度具有正相关性。结论：深静脉血栓大鼠体内的TLR4、TRAF6、IL-6和IL-1β表达上调可能在深静脉血栓形成中发挥了重要作用。     

RAW264.7小鼠巨噬细胞与阿萨希毛孢子菌相互作用后TNF-α、IL-1β和CCL3的表达变化

目的研究RAW264.7小鼠巨噬细胞与T.asahii相互作用后TNF-α,IL-1β和CCL3的表达水平变化。方法RAW264.7细胞与T.asahii菌液共孵育3 h、6 h、9 h、12 h,对照组不加菌液。在各孵育时间点取上清液,采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测上清液中TNF-α、IL-1β和CCL3的含量。台盼蓝拒染法计各孵育时间点RAW264.7细胞的活细胞数。结果 RAW264.7细胞与T.asahii共孵育3 h、6 h、9 h、12 h后,TNF-α、IL-1β、CCL3的表达水平均明显高于对照组,有显著性差异(P0.05)。3种细胞因子的表达水平随共孵育时间延长而增高,共孵育9 h的表达水平最高。RAW264.7细胞的活细胞数随共孵育时间延长而逐渐下降,共孵育12 h后的活细胞数量与其他各时间点有统计学差异(P0.05)。结论 RAW264.7小鼠巨噬细胞面临T.asahii感染时可分泌TNF-α、IL-1β、CCL3等细胞因子,这些炎性细胞因子可能参与了抗T.asahii感染的免疫反应。     

枯草芽孢杆菌刺激小鼠肠上皮细胞分泌的IL-33在活化树突状细胞中发挥重要作用

【目的】枯草芽孢杆菌能有效诱导肠道黏膜免疫应答,但活化黏膜下树突状细胞(DC)的具体机制不完全清楚。【方法】本研究首先用不同浓度枯草芽孢杆菌刺激小鼠肠上皮CMT93细胞,用荧光定量PCR和ELISA检测细胞因子表达水平,然后将枯草芽孢杆菌刺激细胞的培养上清与小鼠骨髓源树突状细胞(BMDC)进行共孵育,用流式细胞术检测BMDC活化标志,最后用RNA干扰技术证明IL-33在活化BMDC中的作用。【结果】枯草芽孢杆菌能显著刺激CMT93细胞分泌IL-6、IL-33和IFN-γ等细胞因子,对刺激IL-33表达呈现剂量依赖性;枯草芽孢杆菌刺激CMT93细胞产生的细胞因子能活化BMDC,在RNA干扰IL-33基因表达和枯草芽孢杆菌刺激后,CMT93细胞培养上清活化BMDC的能力显著降低。【结论】本研究结果表明枯草芽孢杆菌刺激肠上皮细胞产生的IL-33在BMDC活化中具有重要作用。