沙眼衣原体持续感染对Hela细胞TLR4/IL-6/STAT3信号通路的影响

目的：分析沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）持续感染对靶细胞TLR4/IL-6/STAT3信号通路的影响.方法：利用Hela细胞分别建立Ct急性感染及持续性感染模型,通过qRT-PCR、ELISA等方法比较Ct感染过程中靶细胞TLR4、STAT3、IL-6转录水平及细胞因子IL-6分泌量的变化.结果：Ct感染后靶细胞TLR4、IL-6、STAT3转录水平及细胞因子IL-6分泌量均呈现时间相关性上调,且持续性感染状态下比急性感染状态下的上调更为显著;IL-6/STAT3的表达量与TLR4转录水平正相关.结论：Ct持续感染过程中TLR4 的持续活化可大幅上调IL-6/STAT3信号通路表达,可能参与了Ct持续感染后慢性炎性损伤过程.     

湖南汉族人群IL-1O启动子和IL-1ra基因多态性与SLE相关性研究

目的:研究湖南汉族人群IL-10启动子和IL-1受体拮抗剂(IL-1ra)的基因多态性,探讨IL-10启动子和IL-1ra基因多态性与SLE疾病的关系。方法:PCR和限制性内切酶酶切分析SLE患者(n=83)和正常对照人群(n=125)IL-10启动子和IL-1ra基因多态性,对基因频率进行分析。结果:湖南汉族人群IL-1ra及IL-10启动子基因具有多态性;SLE患者IL-1RN*1等位基因的频率显著高于正常对照组(P<0.05,RR=5);SLE患者IL-10启动子区-597位*A、-824位*T和ACC亚型的基因频率高于正常对照组(P<0.001)。结论:SLE患者IL-1RN*1的基因频率、IL-10启动子区-597位和-824位的基因多态性与正常人比较有显著差异,提示以上基因可能与SLE的发病有一定相关性。     

湖南汉族人群IL-10启动子和IL-1rα基因多态性与SLE相关性研究

目的：研究湖南汉族人群IL-10启动子和IL-1受体拮抗剂（IL-1rα）的基因多态性,探讨IL-10启动子和IL-1rα基因多态性与SLE疾病的关系。方法：PCR和限制性内切酶酶切分析SLE患者（n=83）和正常对照人群（n=125）IL-10启动子和儿-1rα基因多态性,对基因频率进行分析。结果：湖南汉族人群IL-1rα及儿．10启动子基因具有多态性;SLE患者IL-1RN ＊ 1等位基因的频率显著高于正常对照组（P〈0．05,RR=5）;SLE患者IL-10启动子区-597位女A ＊、-824位＊T和ACC亚型的基因频率高于正常对照组（P〈0．001）。结论：SLE患者IL-1RN ＊1的基因频率、IL-10启动子区-597位和-824位的基因多态性与正常人比较有显著差异,提示以上基因可能与SLE的发病有一定相关性。     

A、B型流感病毒HA1嵌合基因疫苗的构建及免疫保护研究

为制备能提供交叉保护的疫苗,本研究在证实A型、B型流感病毒HA1 DNA能够提供抗流感病毒保护的基础上,将编码A型和B型流感病毒HA1的基因构建在同一质粒中,制备成嵌合DNA疫苗.将该重组质粒免疫小鼠,并以致死量同种流感病毒A/PR/8/34或B/Ibaraki/2/85攻击,通过测定小鼠的血清抗HA抗体和保护效果(包括存活率、肺部病毒量和体重丢失率)来评价DNA疫苗的免疫效果.结果表明:A、B型流感病毒HAl嵌合DNA疫苗能保护小鼠抵抗两种致死量流感病毒的攻击,具有提供交叉保护的能力.     

MICA*A5.1与沙眼衣原体感染的相关性

目的 研究MICA*A5.1基因与沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)感染的关系。方法 聚合酶链反应(PCR)- SSP检测样本中的MICA*A5.1基因,荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)检测Ct-DNA。结果 在122例不孕患者组中有33例Ct感染阳性,140例对照组中有16例Ct感染阳性,2组Ct感染率分别为27.1%和11.4%。经PCR-SSP方法检测,不孕患者组中MICA*A5.1基因阳性个体有35例,Ct感染阳性且同时MICA*A5.1基因阳性的个体有5例;对照组中MICA*A5.1基因阳性个体有43例,Ct感染阳性且同时MICA*A5.1基因阳性的个体有1例。MICA*A5.1基因阳性个体和MICA*A5.1基因阴性个体之间Ct感染率的差异具有统计学意义(不孕患者组P=0.046;对照组P=0.022;两组合并P=0.01)。结论 不孕患者组Ct感染率要高于对照组;与MICA*A5.1基因阴性个体相比,MICA*A5.1基因阳性个体的Ct感染率较低。     

MTT方法的优化

目的：对MTT法检测悬浮细胞增殖活性的实验条件进行筛选。方法：以K562细胞为实验对象,分别测定不同MTT用量、细胞浓度、MTT溶剂种类及作用时间等实验条件下的OD570值。结果：检测K562细胞的增殖活性时,细胞浓度应选取0．8×108～0．2×108/L,MTT加入量不应超过20μL/孔,若不考虑时间成本,应以三联溶液作为甲硂溶剂,反应12 h后检测,所获结果精密度最高;若需快速获得结果,也可选择DMSO作为甲硂溶剂,反应10 min后检测。结论：建立了优化的MTT法检测悬浮细胞增殖活性。     

枸杞多糖对甲型H1N1流感裂解疫苗黏膜接种的免疫增强作用

探讨枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)对不同剂量甲型H1N1流感裂解疫苗黏膜免疫的佐剂效力。设单独免疫LBP组和不免疫组作为对照,BALB/c小鼠以滴鼻方式免疫两次,间隔三周,二次免疫后两周收集小鼠血清、鼻洗液和脾脏淋巴细胞。结果显示血清中甲流特异性IgG和HI抗体滴度与接种疫苗剂量呈正相关,LBP的添加可提高体内抗体水平。高剂量组小鼠鼻洗液中也检测到特殊异性sIgA。单独疫苗组和添加佐剂组均能在体内诱导产生IgG1和IgG2a,所有组别IgG1抗体水平均略高于IgG2a,表明滴鼻接种裂解疫苗诱导Th1/Th2混合型免疫,LBP对Th1和Th2型免疫反应均有增强作用。高剂量疫苗添加LBP佐剂组小鼠脾脏细胞分泌IFN-γ水平显著高于其他组别,表明其在小鼠体内诱导了较强烈的细胞免疫反应。以上实验结果均证实LBP可以作为佐剂增强甲流裂解疫苗经黏膜途径免疫时的免疫效力。     

丙型肝炎病毒的发现及研究进展——2020年诺贝尔生理学或医学奖的启示*

2020年诺贝尔生理学或医学奖授予美国科学家哈维.阿尔特(Harvey J. Alter),查尔斯.赖斯(Charles M. Rice),和英国科学家迈克尔.霍顿(Michael Houghton),以表彰他们在发现丙型肝炎病毒方面的决定性贡献.在他们的发现之前,甲型肝炎病毒和乙型肝炎病毒的研究均有重大突破,但是大部分血源性肝炎病例仍然无法解释,而丙型肝炎病毒的发现揭开了这些肝炎的病因,并推动了相应的血液检测与新药研发. 丙型肝炎病毒进入细胞之后引起慢性炎症,并通过多种途径诱导肝癌的发生.本文总结了丙型肝炎病毒的生物学特性及丙型肝炎病毒感染导致肝癌的机制,并介绍了丙型肝炎防治的研究进展.     

MICB基因多态性与乳腺癌的易感关联性研究

目的:研究海南汉族人群MICB等位基因的多态性与乳腺癌易感性之间的关联性。方法:采用PCRSSP(PCR sequence-specific primers)和PCR-SBT(PCR sequence-based typing)方法对样本MICB等位基因的多态性进行检测。结果:乳腺癌患者中检出14种MICB等位基因;和对照组相比较,MICB*002和MICB*014等位基因在乳腺癌患者组分布频率较少,MICB*002和MICB*014等位基因可能对乳腺癌不易感(MICB*002:OR=0.31,95%CI:0.19-0.51,Pc0.05;MICB*014:OR=0.32,95%CI:0.17-0.60,Pc0.05)。MICB*016和MICB*003等位基因在乳腺癌患者组分布较多;MICB*016和MICB*003等位基因可能对乳腺癌易感(MICB*016:OR=10.68,95%CI:2.52-45.28,Pc0.05;MICB*003:OR=3.57,95%CI:1.34-9.49,Pc0.05);MICB*002/002和MICB*014/014基因型可能对乳腺癌不易感(MICB*002/002:OR=0.12,95%CI:0.04-0.36,Pc0.05;MICB*014/014:OR=0.30,95%CI:0.10-0.89,Pc0.05)。结论:MICB等位基因的多态性与乳腺癌的易感性之间存在关联性。     

pLXSN-MICA~* 008和pLXSN-MICA~* 001在人成纤维细胞表达

目的:建立表达MICA* 008和MICA* 001蛋白的人包皮成纤维(human foreskin fibroblast,HFF)细胞,为研究MICA基因的免疫功能提供生物学材料。方法:组织块法原代培养HFF细胞;用脂质体将质粒pLXSN,pLXSN-MICA* 008和pLXSN-MICA* 001转染PA317包装细胞后收集病毒颗粒,再将病毒颗粒感染HFF细胞,G418筛选14天,扩增耐药细胞,westernblot检测MICA* 008和MICA* 001蛋白表达情况。结果:逆转录病毒载体pLXSN,pLXSN-MICA* 008和pLXSN-MICA* 001经包装细胞PA317包装可产生有感染能力的病毒,该病毒感染HFF细胞后,westernblot检测出外源蛋白MICA* 008和MICA* 001。结论:建立了表达MICA* 008和MICA* 001蛋白的人成纤维细胞。