锯缘青蟹精子超微结构的研究

利用光镜和电镜观察了锯缘青蟹成熟精子的形态和超微结构。精子呈陀螺形，无鞭毛，在较宽的一端环生着１０余辐射臂。精子由球状的顶体、核杯以及核衍生的辐射臂三部分组成。顶体包括顶体管和顶体囊，后者包绕在顶体管的中央管周围，并可分为头帽带，内层和外层区。顶体被杯状的核包裹，仅头帽露于精子表面。成熟的精子中，位于核杯和顶体管之间的核膜出现局部断续或消失，中心粒和一些胞器出现的核杯腔中。     

锯缘青蟹精子顶体反应的研究

采用正交实验法研究了诱导锯缘青蟹精子产生顶体反应的最佳条件。结果表明：从纳精囊中获得的精子,用离子载体Ａ23187(64μg/ml）诱导,在ＣaCl2浓度为0.25％,pH为9.0的人工海水中４０分钟,可以得到最大的顶体反应率（82.5%）。在此基础上采用光镜和电镜观察顶体反应过程中显微和超微结构的变化。顶体反应过程可大致分为两个时相,第一时相为顶体囊外翻;第二时相为顶体管前伸。本文还对顶体反应的作用进行了初步探讨。     

三疣梭子蟹精卵相互作用的扫描电镜观察

应用扫描电镜技术观察了三疣梭子蟹的精卵相互作用。未受精成熟卵表面较光滑、无受精孔,但有许多微孔。成熟卵外被卵膜,内为卵母细胞。在卵自然产出后,精子迅速发生顶体反应使顶体囊外翻并压入卵膜,而核仍留于卵膜外,核辐射臂不收缩且仍附着于卵膜上。三疣梭子蟹为多精着卵和多精入卵膜。精子外翻顶体囊压入卵膜后,核辐射臂陆续回缩直至消失。作用于顶体丝上的卵母细胞主动拖精作用对入卵膜精子的进一步入卵、受精至关重要,环状卵膜突起的向心伸展也有一定的协助作用。探讨了着卵精子的顶体反应、精子入卵膜的机制及卵子在精子入卵过程中的作用     

三疣梭子蟹精子顶体反应过程中的形态和结构变化

用离子载体A2 3187和卵水人工诱导三疣梭子蟹精子的顶体反应 ,分别获得 75 33%和 84 83%的顶体反应率。应用光镜和电镜技术观察了顶体反应前后精子形态和结构的变化。未处理精子呈陀螺形 ,由顶体、核杯和 5 - 10条核辐射臂组成。顶体包括顶体囊和顶体管。顶体囊的伞形头帽拥有约 70条辐射肋。连续发生的精子顶体反应过程被人为地分为四个阶段 :(1)头帽鼓起 ;(2 )顶体囊外翻 ;(3)穿孔器前伸 ,顶体囊膜翻转 ;(4 )顶体囊膜脱落 ,顶体丝形成。直到第四阶段才观察到钉状精子的辐射臂开始收缩。探讨了辐射臂和穿孔器前冲在精子入卵中的功能     

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精子顶体反应的研究

分别用卵水、海水、caCl_2或NaCl水溶液对中华绒螯蟹成熟精子进行人工诱导顶体反应,结果表明:精子的生理性成熟、同种卵或Ca~(++)的存在、碱性环境以及与一定的固体接触均为精子顶体反应触发的重要条件。3月份精子诱导率最高。 电镜观察证明,中华绒螯蟹精子的顶体反应可分四个阶段:(1)辐射臂收缩;(2)顶体囊外翻;(3)顶体管前伸;(4)片层结构脱落。     

锯缘青蟹精巢发育的组织学观察

组织学观察表明,锯缘青蟹（Scylla serrata)精巢发育周期可以分为精原细胞期,精母细胞期,精子细胞期,精子期和休止期5个时期。在划分精巢发育期的基础上,结合生精小管直径的成熟节段比例这2个指标,可以较准确地反映锯缘青解精巢的发育状况。而成熟节段比例可以作为锯缘青蟹精巢发育的表征指标。     

受精过程中的顶体反应

各类动物精子的顶体结构大体相似,位于核的前端,为一顶体膜包围的囊状结构,这就是顶体囊.在它和核之间有一顶体下腔,内有未聚合的肌动蛋白.当精子遇到卵膜时,顶体膜和其外的质膜发生融合,释放内含的顶体酶.与此同时,顶体下腔内的肌动蛋白发生聚合,形成顶体突起.由此突起附着于卵膜,借精子的运动和顶体酶的作用,使精子穿过卵膜而与卵的质腹相遇融合而受精.     

三疣梭子蟹精子顶体反应前后胞内Ca~(2+)的变化

应用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)和Fluo-3/AM荧染技术对三疣梭子蟹精子顶体反应前后的胞内Ca2 变化进行了观察和检测.结果显示,在精子顶体反应过程中,胞内Ca2 主要分布在细胞核、穿孔器和胞质膜残存处,胞内Ca2 浓度([Ca2 ]I)总体上呈现先上升后下降的趋势.顶体反应前精子的平均荧光强度为35.95±5.71;穿孔器前伸、顶体囊膜翻转阶段精子的平均荧光强度为66.80±7.35;顶体囊膜脱落、顶体丝形成阶段精子的平均荧光强度为3.87±2.82;上述各阶段间精子荧光强度有极显著差异(P<0.01).顶体反应穿孔器前伸、顶体囊膜翻转阶段的精子相比顶体反应前精子,[Ca2 ]I显著提高;而在顶体囊膜脱落、顶体丝形成阶段,[Ca2 ]I则急剧下降,只在顶体丝基部胞质膜残存处有微量Ca2 存在.初步探讨了三疣梭子蟹精子顶体反应前后胞内Ca2 变化的功能.     

锯缘青蟹主要过敏原的纯化与鉴定

以锯缘青蟹为研究对象,从免疫鉴定、分离纯化、抗体制备和免疫学分析等方面对其主要过敏原进行研究。首先利用过敏者血清的免疫印迹法,确定锯缘青蟹的主要过敏原为分子量约38kD的蛋白。然后通过制备丙酮粉、等电点沉淀、硫酸铵沉淀及加热处理对分子量为38kD的主要过敏蛋白进行了高度纯化。该蛋白的pI约为4.5,与虾的原肌球蛋白Pena1性质相近,证实了锯缘青蟹的主要过敏原为原肌球蛋白。通过免疫新西兰大白兔,制备了原肌球蛋白的抗血清,采用Protein A Sepharose亲和层析柱对动物抗体进行了纯化。该抗血清效价高,经4×105倍稀释后仍能与抗原进行反应。该抗体与甲壳类动物及软体动物的原肌球蛋白具有较强的免疫交叉反应,可用于食品过敏原检测。       

东方扁虾精子的超微结构

利用电镜研究了东方扁虾（Ｔｈｅｎｕｓ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）精子的形态和结构。精子由核、膜复合物区和顶体区３部分组成。核内含非浓缩的染色质、微管及细纤维丝,外被核膜;５～６条辐射臂自核部位伸出,臂内充满微管。膜复合物区位于核与顶体之间,由许多膜片层结构及其衍生的囊泡共同组成。顶体区由顶体囊和围顶体物质组成,顶体结构复杂,由顶体帽、内顶体物质和外顶体物质等构成;围顶体物质呈细颗粒状,主要分布于顶体囊     

无蹼壁虎精子头部形成的研究

本文用透射电镜观察了无蹼壁虎精子头形成的过程。早期精细胞具有显著的高尔基复合体、线粒体集合及细胞质桥、接着高尔基体成熟面分泌出前顶体囊泡,并逐渐向核移动。以后精子形成可分四个时间：时间Ⅰ,当前顶体囊泡移至核膜时,核膜凹陷形成封闭的顶体囊泡,囊泡底部靠近核膜有一电子致密的顶体颗粒;时间Ⅱ,细胞核延长,顶体囊泡变扁平;时期Ⅲ,细胞核进一步延长,核内染色质纤维变粗并沿核纵轴方向排列有序;时间Ⅳ,精子发育     

浙江乐清湾锯缘青蟹渔业生物学初步研究

锯缘青蟹(Scylla serrata)系为热带性种,在我国主要分布于南方诸省沿海,是构成潮间带滩栖游泳蟹类的优势种群之一。锯缘青蟹(以下简称青蟹)对环境适应性强,具有食性杂、生长快、易养殖、营养丰富、肉味鲜美、商品价值高等优点,近年来是颇受各国重视的优良养殖品种。由于对青蟹的生物学研究缺少,尚不能开展大规模的养殖。为此,作者于1979—1983年对具有亚热带海区特点的乐清湾青蟹生物学及其增殖作了深入的研究,现整理分述如下。     

受精过程中的顶体反应

各类动物精子的顶体结构大体相似,它位于核的前端,为一顶体膜包围的囊状结构,这就是顶体囊。在它和核之间有一顶体下腔,内有未聚合的肌动蛋白。当精子遇到卵膜时,顶体膜和其外的质膜发生融合,释放内含的顶体酶;与此同时,顶体下腔内的肌动蛋白发生聚合形成顶体突起。由此突起附着于卵膜,藉精子的运动和顶体酶的作用,使精子穿过孵膜而     

长江华溪蟹精子形成的研究

1994年9-11月,对采自安徽省宁国县的长江华溪蟹(Sinopotamon yangtsekiense),利用透射电镜技术,并结合细胞化学方法,研究了其精子形成过程。结果显示:早期精细胞圆形,胞质丰富,内含大量内质同小泡及线粒体。核也为圆形,较小。精细胞开始分化,细胞膨胀为长椭圆形,核质重新分布,分别移向细胞的两端。精子的顶体由高尔基体产生,其过程为:高尔基体分泌产生囊泡,继而形成原顶体囊,进一步发育成顶体囊,最后形成顶体。在顶体囊与核之间有膜复合体。中心粒位于核内面凹陷处。细胞化学反应显示,核杯为Feulgen阳性,顶体为PAS阳性。       

两种石龙子精子超微结构的比较

利用透射电镜研究多线南蜥和印度蜓蜥附睾精子的超微结构。两种卵胎生石龙子的精子具有一些有鳞类精子的共同特征,即具有顶体囊、顶体下锥、单个核前穿孔器和核喙,无核内管,纤维鞘伸入中段,与双联微管3和8相邻的外周致密纤维具双份纤维结构。多线南蜥和印度蜓蜥精子超微结构的种间差异主要表现在:多线南蜥精子核前方的顶体下锥电子密度较小,顶体囊具单侧嵴,横切面上可见非连续的致密体环或11个线粒体;印度蜓蜥无单侧嵴,横切面上可见连续的致密体环或12个线粒体。迄今未发现石龙子科精子的独征,但该科不同类群的顶体囊、顶体下腔、核前方的顶体下锥电子致密程度、核肩、纵切面线粒体与致密体的排列方式、横切面致密体环形状和线粒体等精子超微结构特征有一定程度的差异。这些差异可为研究石龙子科系统发生提供辅助信息。     

锯缘青蟹(Scylla serrata)Hsp70基因cDNA的克隆及序列分析

采用RT-PCR及RACE技术克隆锯缘青蟹(Scylla serrata)的热休克蛋白Hsp70基因并进行序列分析。克隆测序后拼接得到一条长2482 bp的cDNA序列,该序列ORF(Open reading frame,开放阅读框)为1950 bp,编码649个氨基酸,分子量约为71.06 kD,理论等电点为5.24。3'UTR(untranslated region,非编码区)为158 bp,5'UTR为40 bp。通过antheprot分析发现2个Hsp70家族的签名序列:IFDLGGGTFDVSIL,IVLVGGSTRIPKIQK;Dnak特征基序DLGTT-S-V;非细胞器基序:RARFEEL;核定位信号标签:KKDPSESKRALRRL;胞质Hsp70特征基序EEVD。同源性分析表明,锯缘青蟹Hsp70编码区核苷酸序列与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)、斑节对虾(Penaeus monodon)、罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)的相似性分别为84.02%、83.87%和79.60%;核苷酸序列所推导出的Hsp70氨基酸序列,与凡纳滨对虾、斑节对虾和罗氏沼虾的相似性分别为92.79%、92.17%和96.47%。本研究克隆了锯缘青蟹Hsp70基因,为进一步深入研究锯缘青蟹的抗逆机理及其遗传改良奠定了基础。     

OEP及卵黄浓度对蓝狐冻融精子质量的影响

人工采取 6只优质芬兰雄性蓝狐精液 ,利用不同OEP及卵黄含量的Tris 果糖 -柠檬酸钠稀释液稀释 ,制成细管冻精 ,透射电镜下观察精子冷冻前后质膜和顶体超微结构 ,荧光免疫方法检测不同培养时间冻融精子的质量。结果表明 ,蓝狐精子顶体外膜双层膜的厚度为 0 0 2 0 μm ,冷冻 -解冻过程中易发生质膜膨胀、顶体外膜融合现象。顶体产生的囊泡分两种类型 ,一种是体积较大的中空囊泡 ,平均直径为 1 2 5 μm。另一种是体积较小的实体囊泡 ,内充满顶体内容物 ,平均直径为 0 83μm ,两种囊泡的数量不定。OEP能有效抑制顶体囊泡形成 ,影响顶体囊泡类型、体积大小及囊泡数量 ,添加适宜剂量OEP能使顶体囊泡的体积明显缩小 ,囊泡的总数及中空囊泡的数量显著降低。蓝狐冻融精子质量与OEP及卵黄剂量有关 ,在卵黄存在的前提下 ,OEP有利于维持冻融过程中质膜 (5 6 3% )、顶体的完整性 (5 7 8% ) ,显著提高冻融精子活力 (5 4 7% )。在蓝狐精液稀释液中 ,OEP、卵黄的适宜含量分别为 1 %、 2 0 %     

青蟹的饲养经验

青蟹,学名称锯缘青蟹 Scylla serrata(Forskal),是属于节肢动物门(Phylum Arthopoda)甲壳纲(ClassCrustacea)十足目(Order Decapoda)爬行亚目(Subor-der Reptantia)短尾派(Section Brachyura)游泳蟹科(Family Portunidae)青蟹属(Scylla Genus)的一种。分布较广,在温带、亚热带和热带的海区均有发现。特别是在潮流缓慢、有机物质丰富的浅海内湾和江河入     

低温驯化下锯缘青蟹肝胰腺蛋白质表达及脂肪酸组成的变化

锯缘青蟹(Scylla serrata)在不同低温下经3周驯化后,采用双向电泳(Two division electrophoresis,2D-E)和气相色 谱(Gas chromatography,GC)分别对肝胰腺中蛋白质表达和脂肪酸组成变化进行研究,结果发现5℃驯化组与27℃组 相比,肝胰腺中共有22种蛋白的变化,其中5℃驯化组有15种蛋白在27℃组没有检出,而27℃组有7种蛋白在5℃ 驯化组没有发现;10℃驯化组与27℃组相比,共有18种蛋白变化,10℃驯化组有14种蛋白在27℃组没有检出,27℃ 组有4种蛋白在10℃驯化组没有出现;锯缘青蟹15℃驯化组与27℃组相比,肝胰腺中有6种蛋白质有变化,其中驯 化组分离出5种在27℃组没有检出的蛋白质,27℃组分离出1种在驯化组没有出现的蛋白质。27℃组没有检出,仅 在驯化组中出现的蛋白质中,经Imagemaster2D Elite软件分析后发现5℃和10℃驯化组有14种蛋白质在图谱上是匹 配的(即是同样的),15℃驯化组表达的5种蛋白与5℃驯化组和10℃驯化组表达的蛋白不匹配。低温驯化3周后 锯缘青蟹肝胰腺中饱和脂肪酸∑SFA在5℃和10℃驯化组显著低于27℃组(P<0．05),而∑UFA在5℃和10℃驯化 组显著高于27℃组(P<0．05),相应地5℃和10℃驯化组饱和指数∑SFA/∑UFA也显著低于27℃组(P<0．05),其 主要是∑PUFA-ω6低温驯化下显著升高(P<0．01)所致。结论表明锯缘青蟹不同低温驯化下,肝胰腺细胞中蛋白 质表达是一种动态变化模式。驯化温度越低,差异蛋白变化越大。低温驯化下脂肪酸饱和指数降低,主要是维持 低温下肝胰腺正常的生理功能。     

长江华溪蟹精子超微结构的研究

透射电镜下观察长江华溪蟹成熟精子的形态和超微结构。精子呈椭球形,无鞭毛,具数条由核延伸而成的辐射臂精子。由球形的顶体,膜复合体,核杯及辐射臂组成,顶体由头帽,亚帽带,丁体囊及中央管组成。在中央管的基部发现有中心粒。核膜与质膜紧贴在一起形成了精子的界膜。