全细胞多重PCR检测蓝藻、微囊藻及产毒微囊藻方法初探

选取三对分别针对微囊藻、蓝藻16S rDNA及微囊藻毒素合成酶基因mcyB的保守序列的特异性引物209F/409R、27F1/409R、MTR/MTF,其中409R为一条共用引物。设计并优化了一种可以同时检测蓝藻和微囊藻的两重全细胞PCR方法和一种可以同时检测蓝藻、微囊藻和可产毒微囊藻的三重全细胞PCR方法,并且测试了这两种PCR反应的灵敏度区间,分别为105～103cell·mL-1、105～102cell·mL-1。对采集水库水样检测结果表明双重全细胞PCR方法可以直接应用于对天然水样的检测,三重全细胞PCR方法可用于实验室培养藻细胞的筛查。全细胞多重PCR方法具有快速、简便、准确等特点,在水体微囊藻毒素检测预警方面具有应用价值。     

微囊藻毒素合成酶基因的PCR检测方法

针对微囊藻毒素合成酶基因簇的核酸序列,筛选特异性引物,探索一种适用于自然水样中微囊藻产毒潜能检测的全细胞PCR方法。经灵敏度测试表明,这种PCR方法的检测下限相当于100cells。该方法不需要提取基因组DNA,检测所需水样量少,具有操作简便、快速、成本低、灵敏度高等优点,能应用于水库等饮用水源水体中具有产毒潜能的微囊藻的检测。     

利用PCR方法研究广州市景观湖产毒微囊藻的季节分布特点

为研究景观水体中产毒微囊藻的季节性分布特点,利用针对蓝藻和微囊藻的16 srDNA、微囊藻毒素合成酶mcyB 基因的部分核苷酸序列设计和筛选的特异性引物,对广州市内8个景观湖108份水样进行了冬季、夏季和秋季的二重及套式PCR的检测.结果显示,在冬季能被检测出的产毒微囊藻的阳性水样为42份,夏季为102份,而秋季为100份;阳性率分别为38.9%、94.4%、92.5%,产毒微囊藻在夏季和秋季阳性率高.结果表明在冬季、夏季和秋季均有产毒微囊藻分布;夏、秋季是广州市景观水体微囊藻污染的高峰季节,值得引起水文部门足够的重视.     

粤东三个中型水库富营养化特征分析

于2000年的丰水期和枯水期,对粤东三个中型水库:合水水库、河溪水库、沙田水库进行了富营养化特征进行了调查与分析。结果表明:三个水库多数采样点处于中营养阶段;总氮在0.16～1.58mg·L~(-1)范围内,总磷为0.034～0.15mg·L~(-1)叶绿素则为0.732～6.57mg·m~(-3);浮游植物大部分是中污性至寡污性的种类,以蓝藻、绿藻种类占优势,常见种是微囊藻(Microcystis sp.)、颗粒直链藻(Melosira granulata)、梅尼小环藻(Cyclotella meneghiniana)。合水水库和河溪水库的富营养化水平较高,TSI指数在40左右,丰水期的富营养化水平高于枯水期;而沙田水库的富营养化水平相对要低,TSI指数在30左右,丰水期的富营养化水平要低千枯水期。说明这三个水库受流域的影响程度不同。     

优美红游动菌类胡萝卜素的提取条件研究

研究了优美红游动菌(Rhodoplaneselegans)的生长以及类胡萝卜素的产生,通过比较4种广泛采用的细胞破碎方法,对优美红游动菌(Rhodoplaneselegans)类胡萝卜素的提取条件进行了研究,结果表明:类胡萝卜素的产生与菌种的生长曲线相符合,菌种活化后培养45h,类胡萝卜素的含量趋于稳定;取此时培养液,采用超声波法破碎细胞(破碎功率640W,时间10min),类胡萝卜素提取效果最好,初提液类胡萝卜素的提取率约为7.62mg·(g干菌体)-1;酸热法对色素的破坏严重。这为进一步开发利用天然色素资源提供了一定的理论依据。     

克氏原螯虾(Procambarus clarkii)血细胞染色方法的研究

甲壳类血细胞的形态和分类是甲壳类免疫学研究的基础。本文选择三种甲壳类血细胞的常用染料：瑞氏染液、姬姆萨染液和瑞氏—姬姆萨混合染液,研究它们对于克氏原螯虾血细胞的染色效果。通过改变染色时间、染色温度、分色方式以及分色时间等染色条件,观察、比较不同染色条件下血细胞内的颗粒、细胞核和细胞质的着色情况,以及细胞整体轮廓清晰程度,确定适用于克氏原螯虾血细胞染色的理想染色方法,并建立相应的操作程序。     

注射光合细菌后罗氏沼虾血细胞组成的变化

以光合细菌作为刺激物,对罗氏沼虾进行肌肉注射,在注射后12、24、36、48、60h依次从罗氏沼虾心脏取血,用改良后的瑞氏染色法制成血涂片,光镜观察罗氏沼虾血细胞组成的变化。结果发现罗氏沼虾透明细胞在循环血细胞中所占地比例由正常状态下的66．62％略微下降至60％左右;36h左右所占比例急剧下降到30％左右;48h左右开始逐步回升;60h恢复至55％;接受刺激后的变化遵循缓慢下降、急剧下降、缓慢回升的过程。     

金藻基因组DNA的提取与PCR扩增

以金藻门群体和单细胞藻类的典型代表--球形棕囊藻和绿色巴夫藻为研究对象,对金藻基因组DNA的提取方法进行了深入研究,并以psbA基因的PCR扩增结果对4种DNA提取方法进行了检测.结果显示,PVP法和高盐法安全、快速、经济,获得的基因组DNA产量高,但DNA杂质含量也较高.CTAB法虽然也具有安全、快速等优势,但提取的DNA产量较低.玻璃粉法提取的DNA质量好,产量也较高,但操作略为烦琐,经济费用高.结论:就球形棕囊藻而言,玻璃粉法是4种方法中最好的DNA提取方法.就绿色巴夫藻而言,4种方法都行,但是从经济和方便考虑,以高盐法为最好.     

广东南江工业园经济区对周边水域的影响分析

南江工业园地处北江江边,内设有电镀,五金加工企业,为查明工业园所在区域的环境状况,确定本项目对周边水域的影响,调查了南江工业园的水质状况,用单因子评价法对其水质进行了评价。结果表明,工业园周边水域的水质未受到重金属的污染,水质状况良好,但却受到了有机物的污染。     

广东南江工业园对其生态环境的影响分析

南江工业园地处北江江边,内设有电镀、五金加工企业,为查明工业园所在区域的环境状况,确定本项目对周边生态环境的影响,对南江工业园的陆地生态环境和水生生态环境进行了调查,结果表明工业园对其陆地生态环境造成一定的影响,约333hm2土地受到占用及将受到破坏,其中挖方、填方造成的水土流失量分别为110t·km-2·a-1、225t·km-2·a-1,而采取水土保护措施后,挖方、填方造成的水土流失量分别为58t·km-2·a-1、45t·km-2·a-1。在水生态方面亦对水生生物造成了一定的直接影响。