OEP及卵黄浓度对蓝狐冻融精子质量的影响

人工采取 6只优质芬兰雄性蓝狐精液 ,利用不同OEP及卵黄含量的Tris 果糖 -柠檬酸钠稀释液稀释 ,制成细管冻精 ,透射电镜下观察精子冷冻前后质膜和顶体超微结构 ,荧光免疫方法检测不同培养时间冻融精子的质量。结果表明 ,蓝狐精子顶体外膜双层膜的厚度为 0 0 2 0 μm ,冷冻 -解冻过程中易发生质膜膨胀、顶体外膜融合现象。顶体产生的囊泡分两种类型 ,一种是体积较大的中空囊泡 ,平均直径为 1 2 5 μm。另一种是体积较小的实体囊泡 ,内充满顶体内容物 ,平均直径为 0 83μm ,两种囊泡的数量不定。OEP能有效抑制顶体囊泡形成 ,影响顶体囊泡类型、体积大小及囊泡数量 ,添加适宜剂量OEP能使顶体囊泡的体积明显缩小 ,囊泡的总数及中空囊泡的数量显著降低。蓝狐冻融精子质量与OEP及卵黄剂量有关 ,在卵黄存在的前提下 ,OEP有利于维持冻融过程中质膜 (5 6 3% )、顶体的完整性 (5 7 8% ) ,显著提高冻融精子活力 (5 4 7% )。在蓝狐精液稀释液中 ,OEP、卵黄的适宜含量分别为 1 %、 2 0 %     

猪圆环病毒2型ORF2基因序列分析及真核表达载体的构建

根据ＧｅｎＢａｎｋ中猪圆环病毒２型（ＰＣＶ－２）ＯＲＦ２基因序列,设计一　对引物,应用ＰＣＲ从疑患断奶仔猪多系统消耗综合症（ＰＭＷＳ）的死亡仔猪组织病料中扩增出ＯＲＦ　２全基因（７０２ｂｐ）。将此片段克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ　ｅａｓｙ载体,筛选获得重组质粒ｐＴＯＲＦ２,并对此质　粒中的插入序列进行了测序分析,结果表明本试验克隆的ＯＲＦ２与美国ＰＣＶ－２分离株ＡＦ２６４０３９　的核苷酸及氨基酸序列同源性均达到１００％,与其他ＰＣＶ－２毒株同源性分别为９２．３％～９８．　６％和　９２．３％～９６．６％。重组质粒ｐＴＯＲＦ２经　Ｂａｍ　Ｈ　Ｉ、Ｅｃｏ　Ｒ　Ｖ双酶切,回收ＯＲＦ２基因,转　移入真　核表达载体ｐＳｅｃＴａｇ２／ＨｙｇｒｏＢ的相应酶切位点之间,构建成重组质粒ｐＳｅｃＴａｇＯＲＦ２。此重组表　达载体的构建成功为进一步研究ＯＲＦ２编码蛋白的生物学活性及建立ＰＣＶ诊断试剂盒打下基础。     

感染性猪圆环病毒2型基因组DNA的分子克隆

本研究通过PCR扩增出猪圆环病毒2型(PCV—2)的全基因组(1768bp),克隆入pcDNA3载体的EcoR I酶切应点,获得含有PCV-2全基因组的重组质粒,命名为pcDNApcv2。将重组质粒大量扩增后,用EcoR I切出1768bp的PCV—2全基因组,在体外用T4DNA连接酶使其连接环化。用脂质体法将体外连接产物转染无PCV污染的PK—15细胞,经4次连续传代,用间接免疫荧光实验(IFA)及电镜观察证实已获得复制能力的PCV—2病毒。由此可见,本试验构建的环化的PCV—2全基因组DNA具有感染性。     

猪札幌病毒的研究进展

猪札幌病毒(porcine sapovirus,PoSaV)是一种经粪-口途径传播引起猪急性胃肠炎的肠道病毒,对环境友好生态型养殖业构成一定威胁。研究表明,某些PoSaV与人SaV核苷酸序列具有很高的同源性,且越来越多来源于人和猪的SaV重组新毒株被发现,提示PoSaV具有跨种间感染及传播给人的潜在风险。迄今,PoSaV的入侵与感染、变异与迁移、免疫与致病、暴发与流行、跨种间感染与传播等机制尚不清楚。本文主要对PoSaV形态与抵抗力、基因组结构与功能、基因重组、传播方式、流行病学、受体等方面的研究进展进行综述。     

猪圆环病毒2型及猪繁殖与呼吸综合症病毒的快速检测

According to the published genome sequences of Porcine circovirus type 2(PCV2)and Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV),primers were designed and PCR,RT-PCR were set up for the detection of PCV2 and PRRSV,respectively,With the established methods,38 clinical samples from the respiratory disease pigs were detected for the presence of PCV2 and PRRSV. The results demonstrated that 22 samples were positive for PCV2,27 samples were positive for PRRSV and among the above positive samples,18 samples were positive for both viruses,The data obtained in the present study indicated that PCV2 and PRRSV maybe play an important role in the course of the development of respiratiory diseases.     

猪圆环病毒2型分离毒株全基因组的克隆及序列分析

根据GenBank中猪圆环病毒2型（PCV－2）基因序列,设计两对特异性引物,用PCR方法从接种疑似PMWS仔猪病料的细胞中分段扩增2个分离毒株全基因组。将扩增片段克隆入pGEM-T easy载体,筛选获得含有相应片段的阳性重组质粒。对质粒中的插入片段进行测序拼接,获得2株均为1768bp的全基因组序列。应用DNA star序列分析软件,对所测PCV－2序列与GenBank中的国内外PCV毒株进行同源性比较,并绘制系统发生树,结果发现：所测两毒株之间的核苷酸序列同源性极高,可达99．8％,亲缘关系密切;与PCV－2参考毒株的同源性介于95．3％－99．7％之间,其中与美国的一株PCV－2同源性最高,分别为99．5％和99．7％,亲缘关系很近;与国内两分离株同源性分别为96．4％和98．8％－98．9％;与PCV－1参考毒株同源性仅为77．1％－77．5％。     

鸽源冠状病毒核衣壳基因克隆及分子进化分析

目前最新研究发现,冠状病毒除能感染鸡、火鸡外,也能感染孔雀、鹧鸪、海鸟、灰雁、野鸭、野鸽等多种禽类[4-5]。2005年初笔者从以呼吸锣音、上呼吸道粘液异常增多、气管壁出血、胰脏肿大充出血和肺脏出现肉样病变为主要特征的病鸽中分离到1株病毒,通过形态学观察、动物回归试验     

牛奶: 戊型肝炎病毒新的传播途径

正近期,黄芬实验室在Hepatology发表了一篇题为"Excretion of Infectious Hepatitis E Virus Into Milk in Cows Imposes High Risks of Zoonosis"的文章[1],首次发现牛奶能够作为戊型肝炎病毒(HEV)的一种跨物种感染途径,存在将HEV传播给人类的风险.该研究通过对中国云南省大理市某农村(该地区一直维持传统的家庭混养模式)的HEV流行情况调查显示,该地区奶牛HEV RNA的阳性率     

鸽源冠状病毒核衣壳基因克隆及分子进化分析

目前最新研究发现, 冠状病毒除能感染鸡、火鸡外,也能感染孔雀、鹧鸪、海鸟、灰雁、野鸭、野鸽等多种禽类[4-5].2005年初笔者从以呼吸锣音、上呼吸道粘液异常增多、气管壁出血、胰脏肿大充出血和肺脏出现肉样病变为主要特征的病鸽中分离到1株病毒,通过形态学观察、动物回归试验、鸡胚接种试验、血凝特性试验等证实为冠状病毒,暂命为PSH[2].本研究对PSH N基因进行了克隆和序列分析,其目的一方面是为揭示该病毒N结构基因的变异特点和该病毒的遗传演化规律;另一方面为进一步研制出快速诊断试剂和安全有效的基因工程疫苗及防治鸽源冠状病毒病奠定良好的基础.     

猪圆环病毒2型及猪繁殖与呼吸综合症病毒的快速检测

呼吸道疾病是猪场最常见的疾病之一,严重影响猪群的健康,已经给世界养猪业造成了巨大的经济损失[1,2].呼吸道疾病的病原复杂多变,不同的猪场病因可能完全不同,从而给疾病的诊断与防治带来了很大的困难.多年的研究表明,呼吸道疾病的病因可能包括猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、猪流感病毒、猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,MH)、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus, PCV2)及猪链球菌或沙门氏菌等[3～8].其中PRRSV与PCV2为近几年新发现的猪重要的传染性病原,且呈不断的蔓延趋势,在呼吸道疾病发生过程中所起的作用日益增强[9,10].